VALTEK S.A.
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Santiago CHILE
CK-MB (NAC)
Mtodo de inmunoinhibicin (activado por N-acetilcistena), para la determinacin cuantitativa
de la actividad de la isoenzima MB de la Creatn Quinasa.
Para uso en el diagnstico in Vitro.
SIGNIFICANCIA CLINICA
EQUIPO REQUERIDO
La enzima Creatin Quinasa (CK) es un dmero conformado por la
combinacin de las subunidades inmunolgicamente diferentes,
M y B. Existe como las isoenzmas MM, MB y BB.
Las CK-MM y CK-MB se distribuyen bsicamente en el msculo
esqueltico y cardaco, en tanto la isoforma CK-BB est
presente principalmente en el tejido cerebral y en tejidos
compuestos por msculo liso. Ante un infarto al miocardio, la
CK-MB aumenta considerablemente, y constituye un marcador
altamente especfico para el diagnstico del infarto.
Espectrofotmetro o fotocolormetro de filtros capaz de medir
absorbancia a 340 nm., bao termorregulado, cronmetro y
pipetas.
TECNICA
Si la actividad de CK-Total determinada con el kit VALTEK CKNAC fuese superior a 1500 UI/l, diluir la muestra 1:1 con suero
fisiolgico antes de efectuar el ensayo de CK-MB. El resultado
obtenido en este caso, se multiplica por 2.
FUNDAMENTOS DEL METODO
El mtodo VALTEK se basa en la medicin de la actividad de
la CK en presencia de un anticuerpo dirigido contra el monmero
M. Este anticuerpo inhibe totalmente la isoenzima CK-MM, y la
mitad de la actividad de la forma CK-MB, sin afectar la actividad
del monmero B de las isoenzimas MB y BB. Dado que la
isoenzima CK-BB no se encuentra normalmente en la sangre, la
determinacin de la actividad del monmero B es prcticamente
especfica para la forma MB.
Reactivo de trabajo
(ml)
1.00
Muestra
(ml)
0.05
Mezclar y transferir a la cubeta del equipo. Incubar 5 minutos a
la temperatura de medicin (30 37 C). Leer la absorbancia
inicial (A1), y repetir la lectura a los 5 minutos (A2).
Adaptaciones para la aplicacin de este
reactivo en
autoanalizadores
estn
disponibles
a
solicitud.
Es
responsabilidad del laboratorio validar esta aplicacin.
REACTIVOS
CALCULOS
Conservados entre 2 y 8C, estable hasta la fecha de caducidad
consignada en la etiqueta.
Reactivo CK-MB (Concentraciones al reconstituir):
D-Glucosa
20 mM
Magnesio++
10 mM
Adenosina-5'-monofosfato (AMP)
50 mM
Creatina fosfato
30 mM
Adenosina-5'-difosfato (ADP)
2 mM
NADP+
2 mM
G-6-PDH
>3.000 U/L
HK
>3.000 U/L
EDTA
2 mM
Estabilizantes y preservantes
c.s.
Determine el cambio de absorbancia A2-A1 (Abs).
Actividad CK-MB(UI/l)= Abs x 1350
FACTOR=
Vt= Volumen total de reaccin
NADPH 340= Coef. de extincin molar del NADPH a 340 nm
P= Espesor del paso de luz en la cubeta
Vm= Volumen de muestra
ADVERTENCIA:
Diluyente CK-MB:
Buffer BIS TRIS pH 6.70.1
100 mM
Anticuerpo anti CK-M humana en cantidad suficiente para inhibir
hasta 1500 UI/l de CK-MM.
Estabilizantes y preservantes
c.s.
Preparacin del Reactivo de Trabajo:
Reconstitur el frasco de Reactivo CK-MB con el volumen de
diluyente CK-MB indicado en la etiqueta. Estabilidad del reactivo
de trabajo: 7 das entre 2 y 8C. Descartar el reactivo si su
absorbancia contra blanco de agua a 340 nm. es mayor que
0,700.
MUESTRAS
Utilizar suero fresco libre de hemlisis o plasma heparinizado. La
CK es estable por 24 horas a temperatura ambiente y 14 das
entre 2 y 8C.
Vt
x 1000 x
2 = 1350
p-NADPH 340 x P x Vm x 5
Es conveniente analizar junto con las muestras, sueros
controles con valor conocido.
El factor podra variar en autoanalizadores por diferencia en
el espesor de paso de luz. En este caso utilizar un
calibrador srico para obtener el factor.
A pesar de la ausencia de la isoenzima CK-BB en
condiciones normales o en pacientes con infarto, se ha
descrito en algunos casos una forma macro de la CK-BB
que podra sobreestimar la medicin del monmero B.
Se sospecha la presencia de esta forma macro si el valor
obtenido para la CK-MB es superior al 20% de la actividad
CK total.
Evitar el uso de sueros hemolizados ya que se pueden
obtener resultados falsamente elevados.
Este reactivo contiene Azida de Sodio como preservante.
No ingerir. Puede reaccionar con tuberas de cobre o
plomo, elimine los residuos con gran cantidad de agua.
E-mail: info@[Link] WEB site: [Link] REV N 2
RANGOS DE REFERENCIA
ESPECIFICACIONES DE DESEMPEO:
-Linealidad: hasta 400 U/l.
Para valores superiores a 400 U/l, diluir la muestra con suero
fisiolgico y el resultado obtenido se multiplica por el factor de
dilucin.
-Lmite de deteccin: 10 U/l.
-Interferencias: Hemoglobina sobre 1,0gr/dl, bilirrubina sobre
20mg/dl y la lipemia (triglicridos sobre 500 mg/dl) podran
interferir en la tcnica. Otros medicamentos y sustancias podran
interferir (6).
- Reproducibilidad interserie: n=10
Nivel
Patolgico
Media (U/Lt)
190
C.V.
3,71 %
Estos datos han sido obtenidos utilizando la tcnica manual. Los
resultados pueden variar al cambiar de instrumento
- Certificado de Conformidad y Trazabilidad disponible a solicitud
Temperatura medicin
CK-MB (UI/l)
30C
0 a 10
37C
0 a 25
Sospecha de infarto al miocardio:
CK-MB > 6% de la actividad CK-Total cuando:
a 30C CK-MB > 10 UI/l y CK-Total > 160 UI/l
a 37C CK-MB > 25 UI/l y CK-Total > 420 UI/l
BIBLIOGRAFIA
[Link], N.W., Fundamentals of Clinical Chemistry, 2nd Ed.,
[Link], Philadelphia, PA., 1976.
[Link], G., Clin. Chem. 22 (650), 1976.
[Link], L.G., et al., Clin. Chem. 23(1569), 1977.
[Link], D.S., et al., Clin. Chem. 21(10), 1975.
[Link], A.H.B., Bowers, C.N., Clin. Chem. 28(2017), 1982.
6. Young D.S., Effects of drugs on clinical laboratory tests,
th
4 ed. AACC Press,1995.
