USO Y MANEJO DE MICRO-PIPETAS – METODOS
GRAVIMETRICO
ALEGRE CORDOVA A.
Facultad de Ciencias Farmacéuticas, Bioquímicas y Biotecnológicas,
Escuela Profesional Farmacia y Bioquimica
RESUMEN:
El presente trabajo se ilustra de manera teórica y práctica la importancia del manejo de
los instrumentos de medición como las micro pipetas, así como su correcta operación y
asegurar su correcta calibración con el método gravimétrico ,ya que son las herramientas
en la que se confiaran una gran cantidad y en consecuencia obtener resultados útiles y
confiables .
Abstract : The present work illustrates in a theoretical and practical way the importance
of the handling of the measuring instruments such as the micro pipettes, as well as their
correct operation and ensure their correct calibration with the gravimetric method, since
they are the tools that will entrust a large quantity and consequently obtain useful and
reliable results.
OBJETIVO:
Conocer el uso correcto de micro pipetas en el laboratorio de Biología Molecular.
Determinar las condiciones de Exactitud y Reproducción de las micro pipetas
usando método gravimétrico.
FUNDAMENTO
La micropipeta es un instrumento del laboratorio empleado para medir pequeños volúmenes de líquidos
y permitir su manejo en las distintas técnicas científicas. En los laboratorios de Biología
Molecular, el manejo del equipo básico es fundamental. Además, se requiere del conocimiento de las
distintas unidades de medición y su correcta conversión, ya que dichos procedimientos se utilizan
a diario en distintas labores relacionadas con el trabajo.
Los volúmenes captables por estos instrumentos varían según el modelo: los más
habituales, denominados p20, p200 y p1000, admiten un máximo de 20, 200 y 1000 μl,
respectivamente.
Es de destacar que el uso de micropipetas permite emplear distintos líquidos sin tener que
lavar el aparato: para ello, se emplean puntas desechables, de plástico, que
habitualmente son estériles. Existen varios tipos de puntas: por ejemplo, las amarillas
para pipetear volúmenes pequeños (por ejemplo, 10 μl), y las azules para pipetear
volúmenes grandes (por ejemplo, 800 μl).
Partes de una micropipeta :
Fig. Nro 1 Partes micropipeta
Una de las fuentes de variación que más afectan la confiabilidad de los resultados
analíticos y que se presenta con mayor frecuencia en los laboratorios de biología
molecular, es el inadecuado uso y funcionamiento de las micropipetas. Las micropipetas
pueden ser verificadas por el método gravimétrico o el fotométrico; para el primero es
indispensable contar con una balanza analítica y para el segundo con pipetas
previamente calibradas, recursos no disponibles en algunos laboratorios. En esta práctica
se llevará a cabo un método gravimetrico sencillo y confiable que permite evaluar
simultáneamente el uso correcto, la precisión y la exactitud de las micropipetas.
Actualmente, se reconocen fácilmente en el mercado dos de las mejores marcas que
existen: Eppendorf y Nichiryo.
METODOS:
Se hizo el reconocimiento la micropipeta y sus partes.
Observamos los volúmenes captables por la micropipeta p20, p200 y p1000,
admiten un máximo de 20, 200 y 1000 μl,respectivamente.
Se identificó los tips y sus diferentes tamaños.
Procedió a manipular correctamente y los cuidados que se tenía que tener al usar
la micropipeta. Identificamos el volumen máximo y mínimo que puede transferir la
micropipeta .
Se procedio a verificar si estaban correctamente calibradas las micropipetas con el
método gravimetrico .
Como primer paso se midió temperatura agua del ensayo con la que se iba ser las
mediciones, obteniendo una temperatura de 23 C.
Se colocó un beaker limpio sobre una balanza analítica y taramos a cero
Procedió ajustar al volumen deseado que fue 1000 ul.
Se pesó 10 veces el mismo volumen y tarando a cero cada pesada, se apuntó el
valor de las 10 lecturas que dio la balanza .
RESULTADOS y DISCUCIONES
Limites de tolerancia para micropipeta
VALORES %E %CV
5-10 1 0.8
20-50 0.7 0.4
100-1000 0.5 0.2
Se obtuvo los siguientes resultados
Nro 10 ul 1000 ul 50 ul 10ul 25 ul
1 0.0085 1.0102 0.0487 0.0080 0.0246
2 0.0087 1.0117 0.0497 0.0079 0.0248
3 0,0095 1.0072 0.0490 0.0079 0.02340
4 0.0095 1.0142 0.0488 0.0078 0.0208
5 0.0091 1.0125 0.0487 0.0077 0.0237
6 0.0090 1.0150 0.0488 0.0080 0.0255
7 0.0081 1.0060 0.0464 0.0080 0.0241
8 0.0089 1.0063 0.0490 0.0078 0.0224
9 0.0086 1.0059 0.0434 0.0079 0.0245
10 0.0089 1.0110 0.0463 0.0076 0.0265
0.0088 1.01 0.0483 0.0079 0.0214
10 ul 100ul 50 ul 10 ul 25 ul
0.0088 1.01 0.0483 0.0079 0.0214
z 0.0088 1.0132 0.0485 0.0815 0.0214
%E 12 1 3 18.5 14.4
S 0.0004 0.0034 1.28x10-3 0.0013 0.0160
CV 4.5454 44.43 2.3257 1.5951 74.8
Los resultados no fueron los esperados ,varios factores pueden a ver influenciado como si
estaba en perfecto funcionamiento la balanza , error en los cálculos hechos ,
manipulación al momento de hacer los pesos .
Conclusiones
Se pudo aprender el uso y correcta manipulación de las micropipetas
Comparando los resultados obtenidos con los límites de tolerancia podemos
deducir que ninguna de las micropipetas analizadas están calibradas ya que no se
encuentran dentro del límite permisible.
Anexos
Figura Nro 2 Micropipetas
