LABORATORIO N° 6
ESTUDIO DE LOS FACTORES QUE INFLUYEN EN LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE LA CATALASA
Introducción:
Las reacciones químicas que se dan en los seres vivos no podrían tener lugar sin la presencia de los enzimas. Estas
macromoléculas, que generalmente son proteínas, catalizan las reacciones bioquímicas, permitiendo que los sustratos
se conviertan en los productos que necesita la célula. Como todo catalizador, los enzimas no se consumen en las
reacciones que catalizan, pero a diferencia de otros catalizadores de naturaleza inorgánica, las reacciones que catalizan
son muy específicas: sólo interaccionan con determinados sustratos, y sólo facilitan el curso de determinadas
reacciones.
Un enzima que podemos encontrar en todos los seres vivos es la catalasa, necesaria para descomponer el peróxido de
hidrógeno, un compuesto tóxico, que se produce durante el metabolismo celular.
Objetivos:
● Aplicar las diferentes fases del método científico: planteamiento de problemas, formulación y contrastación de
hipótesis, diseño y desarrollo de experimentos, interpretación de resultados, comunicación científica, estimación
de la incertidumbre de la medida y utilización de fuentes de información.
● Familiarizarse con las propiedades de los enzimas y observar la actividad de la catalasa
● Entender por qué se utiliza el peróxido de hidrógeno como desinfectante y el uso de la catalasa en alimentos como
antioxidante.
Material y recursos necesarios:
Recursos de laboratorio: Vasos de precipitados, Tubos de ensayo, Embudos de vidrio, Agua oxigenada, Agua
destilada, Fuente de catalasa: patata, Cronómetro (puede utilizarse el del teléfono móvil)
Normas de seguridad:
Si se emplea agua oxigenada al 30% utilizar guantes para hacer las diluciones.
Procedimiento:
1. Cortar la patata en cinco trozos de igual tamaño (1g aproximadamente).
2. Rotular cinco vasos de precipitados con los números 1,2,3,4 y 5
3. Realizar cinco disoluciones de agua oxigenada (0, 25, 50, 75 y 100 %)
4. Introducir un trozo de patata en cada vaso, a continuación la disolución de agua oxigenada correspondiente y
cubriendo la patata colocar el embudo en posición invertida. El extremo del embudo debe quedar por debajo de
la superficie de la disolución. Comprobar que el agua entra con facilidad dentro del embudo, en caso contrario
colocar debajo del embudo algo que lo levante unos milímetros.
5. Llenar los tubos de ensayo con la disolución correspondiente y con mucho cuidado para que no entre aire
introducirlos por la parte estrecha del embudo.
6. Cuando transcurran 20 minutos marcar con un rotulador
la cantidad de oxígeno acumulado en el extremo de cada
tubo.
7. A continuación medir el volumen de oxígeno, llenando
el tubo de ensayo con agua hasta la marca realizada, con
ayuda de una pipeta de 10 ml.
8. Repetir el experimento pero sin patata, esto servirá de
control.
9. Realizar tres réplicas del experimento y sacar la media,
Cuestiones para los alumnos:
● Buscar información sobre los enzimas: ¿Qué son? ¿Cómo actúan? ¿Qué factores afectan a su actividad?
● Buscar información sobre el enzima catalasa: ¿Qué reacción cataliza? ¿Dónde se encuentra? ¿Por qué es tan
importante?
● ¿Qué factores crees que pueden influir en la actividad de la catalasa?
● Emitir una hipótesis sobre la influencia de uno de los factores sobre la actividad enzimática de la catalasa
● ¿Cuál es la variable dependiente? ¿Y la independiente?
● Diseñar un experimento que permita comprobar la hipótesis que has emitido. Para ello tener en cuenta los
siguientes puntos:
- No debes modificar más de una variable independiente en cada experimento.
- Debes de plantear una prueba control en la que no modifiques ninguno de los factores que intervienen en
el proceso.
a) Se deben realizar al menos tres repeticiones de cada experimento y luego sacar la media.
Conclusiones
PRÁCTICA No. 2. REACCIONES QUE INVOLUCRA UNA ENZIMA
(Funcionamiento de la enzima catalasa en varios organismos).
-INTRODUCCIÓN
Las células llevan a cabo simultáneamente una gran cantidad de reacciones químicas necesarias para la
vida. Muchos de los productos de esas reacciones se necesitan inmediatamente, y si no fuera por la
participación de las enzimas, algunas reacciones no se producirían tan rápido. Las enzimas, en su mayoría
proteínas o RNA (riboenzimas), son catalizadores químicos que agilizan una reacción que envuelve la
formación o rompimiento de enlaces químicos. Las enzimas no se consumen en las reacciones, ni tampoco
se alteran, razón por lo cual no se necesitan en grandes cantidades. Las enzimas actúan sobre los sustratos
formando un complejo enzima/sustrato; esto ocurre en un lugar en específico conocido como el sitio
activo de la enzima. Las enzimas son muy selectivas porque pocas moléculas pueden interactuar bien con
este sitio (Figura 1).
Figura 1. Reacción con participación de una enzima.
Figura 2. Energía de activación necesaria para iniciar la reacción.
Las enzimas trabajan óptimamente bajo condiciones específicas y ciertos cambios pueden alterar el
funcionamiento de la enzima, desactivarla o hasta destruirla. Algunas
enzimas necesitan activadores para cambiar su conformación de modo que pueda formarse el complejo
enzima–sustrato. Estos activadores se conocen como cofactores y pueden ser tan simples como iones
metálicos. Los cofactores orgánicos se conocen como coenzimas. Las enzimas pueden afectarse
negativamente por inhibidores que impidan la actividad enzimática. Estos inhibidores pueden afectar el
sitio activo de dos maneras: competitivamente, al bloquear el sitio activo, o no competitivamente, al
pegarse en otro lugar de la enzima y alterar indirectamente la forma del sitio activo. Factores que afectan
el funcionamiento de la catalasa En los ejercicios siguientes se estudiará el cómo algunos factores pueden
afectar funcionamiento de la catalasa. Esta enzima está presente en casi todas las células aeróbicas y actúa
descomponiendo peróxido de hidrógeno (agua oxigenada) en agua y oxígeno, según la siguiente reacción:
-OBJETIVO
En esta práctica el alumno explicará lo que significa una enzima y cómo éstas actúan en reacciones
intracelulares, además identificará los factores que afectan la actividad enzimática, al mismo tiempo
distinguirá entre inhibición competitiva e inhibición no- competitiva.
- MATERIAL Y EQUIPO (REVISARLO)
Peróxido de hidrógeno, Papa, Hígado, Setas, Espinaca o cebolla Gasa, Placas de porcelana, Goteros o pipetas
desechables, Morteros o licuadora, Embudo, Vaso de p.p.
-DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
En este ejercicio se preparará un homogenado de hígado para obtener partículas pequeñas y uniformes al
mezclarlas con el agua.
1. Para preparar el homogenado, corte en pedazos por separado la muestra de hígado.
2. Usando una licuadora o mortero, muela el material con un poco de agua hasta diluir parte de la muestra;
no muela excesivamente para que no queden pedazos muy pequeños del material.
3. De ser necesario, filtre el macerado con una gasa.
4. Coloque el homogenado en un vaso de p.p.
5. Usando un gotero, coloque cuatro o cinco gotas del homogenado de hígado en una de las fosas de la
placa de porcelana y añada tres gotas de peróxido de hidrógeno.
6. Haga el mismo procedimiento que en el #5, en otra fosa con un pedazo de espinaca o cebolla.
8. A una fosa añada cuatro gotas de agua y tres gotas de peróxido de hidrógeno.
9. Anote los resultados en una Tabla que llamará: Resultados del homogenado con peróxido de
hidrógeno. Reacción al añadir gotas de peróxido.
10. ¿Qué ocurrió al añadir el peróxido?
11. ¿Ocurrió lo mismo en todas las muestras?
12. ¿Por qué se forman burbujas?
13. ¿Qué otros organismos podrían usarse para esta prueba?
14. ¿Por qué se preparó un homogenado o se picaron las muestras? ¿Por qué no se añadió el peróxido
directamente a los tejidos sin macerarlos?
A.2. Efecto de la temperatura sobre el funcionamiento de las enzimas
- MATERIALES
Homogenado de hígado, baño de agua, Tubos de ensayo grandes, Gradilla de tubos de ensayo,
Termómetro, Agarradera de tubo Hielo, Congelador o baño de hielo, Placa de calentamiento
- DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
1. Rotule cinco tubos de ensayo del 1 al 5 y caliente un baño de agua hasta 37 °C y otro hasta 80°C.
2. Añada 5 mL de hígado homogenado a cada tubo.
3. Mantenga los tubos a las siguientes temperaturas:
Tubo 1 = 80 °C por 15 minutos
Tubo 2 = 37 °C por 15 minutos
Tubo 3 = Temperatura ambiente
Tubo 4 = Hielo por 30 minutos
Tubo 5 = Congelador a 4 °C por 30 minutos
4. Añada 2 mL de peróxido de hidrógeno al tubo 1.
5. Mida el tiempo transcurrido desde que se añadió el peróxido hasta que se comienzan a producir
burbujas, y anótelo en la Tabla 3.
6. Repita con los demás tubos.
7. Compare sus resultados en término de tiempo de reacción vs. Temperatura.
8. ¿Cómo se relacionan la temperatura y la actividad enzimática?
Tabla 3. Resultados del efecto de la temperatura sobre la actividad enzimática
Tiempo que
Tubo Temperatura (ºC) tardó en Observaciones
comenzar la
reacción
1 80
2 37
3 Ambiente
4 Hielo
5 Congelado (4)
A.3. El efecto del pH sobre el funcionamiento de las enzimas
MATERIALES: Homogenado de hígado, Tubos de ensayo grandes, Gradilla de tubos de ensayo, Agarradera de tubo,
Solución 3M de HCL, Solución 3M de NaOH, Probeta, Pipetas desechables
- DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
1. Rotule tres tubos de ensayo A, B y C
2. Añada 3 mL de homogenado de hígado a cada tubo.
3. Añada soluciones 3M de HCl o 3M de NaOH a los tubos como se indica a continuación, y agite suavemente
hasta mezclar:
Tubo A – 3 ml de 3M HCl
Tubo B – 3 ml de 3M NaOH
Tubo C – control (no ácido ni base)
4. Añada 3 mL de peróxido de hidrógeno a cada tubo.
- EVALUACIÓN Y RESULTADOS
1. Observe y anote las reacciones en la Tabla 4.
Tabla 4. Resultados del efecto del pH sobre la actividad enzimática
TUBO Tiempo que toma la reacción en completarse Descripción comparativa de las reacciones
2. ¿Cómo afecta el pH la actividad enzimática?
3. Las enzimas del estómago funcionan óptimamente a un pH de 2. ¿Cómo se afectaría la digestión si el pH
aumenta a 4?
4. ¿De qué otras maneras se podría explorar el funcionamiento de las enzimas estudiadas en el laboratorio?
5. ¿Puede mencionar otras enzimas que actúan en nuestro cuerpo?
6. ¿Qué efecto podría tener una fiebre alta prolongada sobre el funcionamiento de las enzimas?
7. Busque un ejemplo de una condición médica que se deba al mal funcionamiento de una enzima.
DISCUSIÓN
1. Elabore un diagrama de flujo en el que describa el o los procedimientos utilizados en esta práctica.
2. Indique los cálculos necesarios para la elaboración de las soluciones utilizadas y especifique el peso
molecular, temperatura de ebullición, temperatura de fusión, estado físico a 25 °C y solubilidad de los reactivos
utilizados.
3. Diferencie entre las estructuras de proteínas 1 a, 2a, 3a y 4a.
4. ¿Qué otros factores favorecen a la desnaturalización de las enzimas?
CONCLUSIONES
