T4 LIBRE Ref.

: 906
Instrucciones de Uso

Finalidad . Sistema para la determinación cuantitativa de la tiroxina no 3. DIL REA - Diluyente de Reacción . Almacenar entre 2 - 8 ºC.
vinculada (T4 Libre) en el suero y plasma. Listo para su uso. Contiene tapón 100 mmol/L pH 7,4; conservante;
tensoactivo y estabilizantes.
[Sólo para uso diagnóstico in vitro.]
4. # - Conjugado Concentrado 50X . Almacenar entre
Introducción . La tiroxina (T4) es una hormona sintetizada a partir de 2 - 8 ºC.
residuos de tirosina que están en la tiroglobulina (proteína producida y C ontiene estreptavidina-peroxidasa, conservante , tensoactivo y
almacenada en la glándula tiroides). Bajo la acción de la hormona estabilizantes. Consultar apartado “Procedimiento - Preparación de
tirotrópica (TSH) la T4 se libera en circulación sanguínea donde se une a reactivos”.
una proteína transportadora específica, la TBG (Thyroxin Binding
Globulin) y en menor medida a la fracción albúmina. La mayor parte de la 5. $ - Diluyente del Conjugado . Almacenar entre 2 - 8 ºC.
T4 está en su forma unida, en equilibrio con una pequeña fracción libre Listo para su uso. Contiene tapón 100 mmol/L pH 7,4; conservante,
(T4 Libre). La fracción libre es la fracción más importante del punto de tensoactivo y estabilizantes.
vista metabólico, ya que ella se puede convertir periféricamente en T3,
que es el derivado hormonal metabólicamente más activo.
6. % - Calibrador Low (Bajo) . Almacenar entre 2 - 8 ºC.
Preparación liofilizada de T4 en matriz de suero humano; conservante y
Principio . La T4 Libre presente en la muestra compite con un análogo estabilizantes. Consultar apartado “Procedimiento - Preparación de
(T4 biotinilado) por un número limitado de anticuerpos de conejo anti-T4. reactivos”. La concentración de T4 está señalada en la etiqueta del frasco.
Los complejos anticuerpo-T4 y anticuerpo-T4 biotinilado son capturados Después de la reconstitución, el calibrador es estable por 14 días cuando
por anticuerpos anti-IgG de conejo que están inmovilizados en la es almacenado entre 2 - 8 ºC, bien cerrado y protegido de la luz, y por 90
superficie de los Inmunotubos ' . Después del lavado se suma al días cuando es almacenado a -15 ºC, bien cerrado y protegido de la luz.
medio el conjugado de estreptavidina-peroxidase que forma un complejo Consultar apartado PRECAUCIONES Y CUIDADOS ESPECIALES, antes
cuaternario. Después de la eliminación de los reactivos en exceso, la de manipular los calibradores.
reacción quimioluminiscente se desencadena mediante la adición de La concentración de ese calibrador, que figura en el rótulo del producto,
peróxido y luminol. La cantidad de luz emitida, medida en unidades deberá ser inserida en el protocolo del test.
relativas de luz (RLU), es inversamente proporcional a la concentración
de T4 Libre presente en la muestra, cuyo valor se obtiene a través de una
7. & - Calibrador High (Alto) . Almacenar entre 2 - 8 ºC.
curva de calibración.
Preparación liofilizada de T4 en matriz de suero humano; conservante y
estabilizantes. Consultar apartado “Procedimiento - Preparación de
Características del sistema . La T4 Libre - Labtest es un sistema reactivos”. La concentración de T4 está señalada en la etiqueta del frasco.
semiautomático desarrollado con un enfoque innovador que permite el Después de la reconstitución, el calibrador es estable por 14 días cuando
uso de los sustratos quimioluminiscentes luminol y peróxido en cinética es almacenado entre 2 - 8 ºC, bien cerrado y protegido de la luz, y por 90
rápida, con obtención de la señal quimioluminiscente en unos pocos días cuando es almacenado a -15 ºC, bien cerrado y protegido de la luz.
segundos. Consultar apartado PRECAUCIONES Y CUIDADOS ESPECIALES, antes
de manipular los calibradores.
Los niveles de sensibilidad son equivalentes a los de otros sustratos La concentración de ese calibrador, que figura en el rótulo del producto,
quimioluminiscentes que emplean fosfatasa alcalina como enzima. deberá ser inserida en el protocolo del test.

Los estudios realizados demuestran que el ensayo no sufre interferencia

8. ' - Inmunotubos . Almacenar entre 2 - 8 ºC.
significativa causada por altas concentraciones de hemoglobina,
Listo para su uso. Tubos de poliestireno sensibilizados con anticuerpos
bilirrubina y de triglicéridos.
policlonales anti-IgG de conejo.
Los envases de plástico que contienen los tubos deben abrirse sólo
Metodología . Quimioluminiscencia. cuando están en equilibrio con la temperatura del ambiente
(temperatura inferior a 30 ºC) donde se hará la prueba, para evitar la
Reactivos condensación de vapor de agua en los tubos. El incumplimiento de
esta orientación resultará en la disminución de la estabilidad del
1. - T4 Biotinilado . Almacenar entre 2 - 8 ºC. reactivo.
Listo para su uso. Contiene T4 biotinilado en tapón 100 mmol/L pH 7,4; Después de abrir los envases, los tubos son estables durante 6 meses
conservante; tensoactivo y estabilizantes. cuando se almacenan entre 2 - 8 ºC y con el desecante en el envase de
plástico bien cerrado.
2. ANTI T4 - Anti-T4 . Almacenar entre 2 - 8 ºC.
Los reactivos sin abrir, cuando se almacenan bajo las condiciones
Listo para su uso. Contiene anticuerpo policlonal de conejo anti-T4 en establecidas, son estables hasta la fecha de caducidad impresa en la
tapón 100 mmol/L pH 7,4; conservante; tensoactivo y estabilizantes. etiqueta.

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Después de abiertos, los reactivos deben ser manejados de acuerdo con 1
las buenas prácticas de laboratorio para evitar contaminaciones de
Muestra
naturaleza química y microbiana que pueden causar reducción de la Utilizar suero o plasma (EDTA, Heparina, Citrato). Cuando se obtiene la
estabilidad. sangre en el anticoagulante citrato, hacer corrección por la dilución
causada en la muestra.
Precauciones y cuidados especiales
El analito es estable durante 7 días entre 2 - 8 ºC y por hasta 30 días en
Los calibradores son preparados a partir de derivados de sangre humana temperatura inferior a 15 ºC negativos cuando se almacena en un
y fueron testados para la presencia de HBsAg, anticuerpos anti-HCV y recipiente apropiado para la congelación.
anti-HIV y presentaron resultados negativos. Se utilizaron pruebas
validadas y aprobadas, pero ellas no pueden asegurar que productos Asegurarse de que las muestras estén descongeladas y
derivados de sangre humana no tengan agentes infecciosos. Por lo tanto, homogeneizadas antes de su uso. Se deben eliminar las partículas en
se deben aplicar los cuidados habituales de seguridad en el manejo de los suspensión a través de la centrifugación. No usar las muestras con
productos (no se deben pipetearlos con la boca). Se recomienda signos de contaminación o muestras congeladas y descongeladas más
manejarlos como potencialmente infecciosos. de una vez.

No mezclar reactivos de lotes distintos y no utilizar los reactivos después Debe crearse un Procedimiento Operativo Estándar (POE) para
de la fecha de caducidad. No permitir la contaminación cruzada entre los recolección, preparación y almacenamiento de la muestra. Enfatizamos
componentes. que los errores debidos a la muestra pueden ser mucho más grandes que
los errores que se ocurrieron en el procedimiento analítico.
Utilizar sólo puntas desechables para pipetear cada muestra y cada
reactivo. Como ninguna prueba conocido puede garantizar que muestras de
sangre no transmiten infecciones, todos ellas deben considerarse como
La limpieza y el secado adecuados del material utilizado son factores
potencialmente infecciosas. Por lo tanto, para su manejo, se deben seguir
fundamentales para la estabilidad de los reactivos y obtención de
las normas de bioseguridad.
resultados correctos. Residuos de jabón, detergentes o agentes
oxidantes en los recipientes utilizados para la preparación del Conjugado
de uso pueden interferir en la reacción. Utilizar preferiblemente material Interferencias
de plástico desechable. Si utilizar envases de vidrio, se recomienda
lavarlos con ácido sulfúrico o ácido clorhídrico 0,5 mol/L, enjuagar Concentraciones de hemoglobina hasta 1000 mg/dL, bilirrubina hasta
exhaustivamente con agua destilada o desionizada y secar antes de 30 mg/dL y triglicérido hasta 800 mg/dL no producen interferencias
usarlos. significativas.

Los envases de plástico que contienen los inmunotubos ' deben Procedimiento
abrirse sólo cuando están en equilibrio con la temperatura ambiente
(temperatura inferior a 30 ºC), donde se hará la prueba, para evitar la Cuidados especiales . Los empaques de plástico que contienen
condensación de vapor de agua en los tubos. El incumplimiento de esta
los inmunotubos ' deben abrirse sólo en equilibrio con la
orientación resultará en la disminución de la estabilidad del reactivo.
temperatura ambiente (temperatura inferior a 30 ºC) donde se hará la
Después de abrir los envases, los inmunotubos son estables durante 6
prueba, para evitar la condensación de vapor de agua en los tubos. El
meses cuando se almacenan con el desecante en el envase de plástico
incumplimiento de esta orientación resultará en la disminución de la
bien cerrado.
estabilidad del reactivo.
Los inmunotubos ' deben ser desechados después de su uso.
No reutilizar para otros fines.

Para la eliminación de los reactivos y del material biológico, se aconseja

Los reactivos líquidos deben homogeneizarse suavemente antes de su
uso.

aplicar las normas locales, provinciales o federales de protección Preparación de los reactivos
ambiental.
Conjugado de uso . Para preparar el Conjugado de Uso es necesario
Material necesario (no está incluído). pipetear todo el contenido del frasco de Conjugado Concentrado
#$ y transferir para el frasco que contiene el Diluyente del
1. Micropipetas y puntas desechables. Conjugado y homogeneizar. Si es necesario, centrifugar el
material para asegurar que todo el contenido del frasco Conjugado
2. Baño María (37 ± 1 ºC).
Concetrado estea en la parte inferior del tubo. Después de transferir la
3. Recipiente para preparar las diluciones. totalidad del volumen, enjuagar el frasco de Conjugado Concetrado con
4. Cronómetro. parte de la mezcla del Conjugado Concetrado y Diluyente del Conjugado.
5. Solución de Lavado Concentrada (Ref. 908). Homogeneizar suavemente por inversión. Una vez preparado, el
Conjugado de Uso es estable durante 4 meses cuando se almacena entre
6. Soluciones Reveladoras (Ref. 909). 2 - 8 ºC. Identificar el frasco y anotar la fecha de caducidad.
7. Estantería para tubos 12 x 75 mm con sistema de fijación.
8. Microordenador.
9. Luminómetro Lumiquest o instrumento similar equipado con dos
inyectores y capacidad para acomodar tubos 12 x 75 mm.
10. Solución Desinfectante (Ref. 604).

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Si es necesario, se puede preparar volúmenes más pequeños del La calibración del sistema se ajusta en las condiciones a continuación:
Conjugado de Uso y transferir 1 (un) volumen del Conjugado
Concentrado y 50 volúmenes del Diluyente del Conjugado
$# para un frasco limpio y seco. Una vez preparado, el
Conjugado de Uso es estable durante 4 meses cuando se almacena entre
2 - 8 ºC. Identificar el frasco y anotar la fecha de caducidad.
1. Cuando se utiliza un lote de producto por primera vez;
2. A cada nueva preparación del Conjugado de Uso;
3. A cada cambio de lote de las Soluciones Reveladoras (Ref. 909).
4. Cuando el control de calidad indicar.
Para mantener su desempeño, el Conjugado de Uso debe permanecer
fuera de la nevera sólo el tiempo necesario para su uso. Procedimiento de prueba
Reconstitución de los calibradores
Consultar el apartado 1 - Observaciones.
Importante

Quitar el precinto de aluminio y retirar con cuidado la tapa de goma. 1. Los parámetros de lectura de las pruebas, así como los
datos de la Master curve deben insertarse en el luminómetro
Sumar al frasco del calibrador el volumen de agua calidad reactivo con antes de hacer las pruebas. Consultar apartado "Calibración"
una pipeta volumétrica, tal como se indica en la etiqueta. Vuelva a colocar y el manual del equipo para obtener más informaciones.
la tapa de goma, dejar reposar durante 15 minutos y homogeneizar
suavemente por inversión. Antes de usar, homogeneizar suavemente y 2. No utilice en el ensayo una cantidad mayor que 20
retirar la cantidad necesaria para su uso. Tapar inmediatamente y inmunotubos a la vez.
almacenar entre 2 - 8 ºC.

Después de la reconstitución, los calibradores permanecen estables 1. Separar el número de inmunotubos necesarios a las pruebas,
durante 14 días, si se almacena entre 2 - 8 ºC.

Para su uso posterior, separar el calibrador en alícuotas inmediatamente

'
calibradores y controles, identificarlos y posicionarlos en la estantería
para inmunotubos.
después de la reconstitución y almacenar en temperatura inferior a 15 ºC
negativos por hasta 90 días en recipiente herméticamente cerrado, 2. Sumar 0,02 mL de Muestra, calibradores y controles en la parte
protegido de la luz. Para evitar la evaporación del material durante el inferior de cada tubo.
período de almacenamiento es esencial utilizar frascos adecuados para
congelación (criotubos). Las alícuotas del calibrador deben 3. Sumar 0,10 mL de T4 Biotinilado en la parte inferior de
descongelarse sólo una vez. cada tubo.

Los calibradores deben ser manejados de acuerdo con las buenas 4. Sumar 0,10 mL de Anti-T4 ANTI T4 en la parte inferior de cada
prácticas de laboratorio para evitar contaminaciones de naturaleza tubo. Homogeneizar.
química y microbiana que pueden causar reducción de la estabilidad.
5. Incubar 30 minutos en baño María a 37 ºC.
Calibración . La calibración del sistema se realiza mediante el uso de
una Master Curve de 6 puntos (concentración de los calibradores y sus
respectivas RLUs) y ajustada cuando sea necesario utilizando los dos
6. Retirar los tubos del baño María.
calibradores de ayuste (Calibrador Low - (Bajo) Ref. 906.6 e Calibrador
High - (Alto) Ref. 906.7). 7. Sumar 1,0 mL de Solución de Lavado Concentrada (Ref. 908) lista
La Master Curve es suministrada en un documento adjunto juntamente para uso.
con el producto T4 Libre y es específica para cada lote de reactivos.
8. Descartar el contenido de los tubos por inversión y, con la estantería
Al inserir los datos de la Master Curve durante la creación del todavía invertida, retirar el exceso de líquido, apoyando el borde superior
protocolo del test, inserir también las concentraciones de los de los tubos sobre una superficie absorbente (2 - 3 capas de toallas de
calibradores de ayuste que figuran en el rótulo de los productos papel).
(Calibrador Low - (Bajo) Ref. 906.6 e Calibrador High - (Alto)
Ref. 906.7). 9. Sumar 0,10 mL de Diluyente de Reacción DIL REA en la parte
inferior de cada tubo.
Cuando se utiliza un lote de producto por primera vez, deben
insertarse los datos de la Master Curve en el programa del
luminómetro y luego debe hacer un ajuste en la curva de calibración, 10. Sumar 0,10 mL de Conjugado de Uso directamente al contenido de
ensayando en duplicado los dos calibradores proporcionados en el kit cada tubo. Homogeneizar.
(Calibrador Low - (Bajo) Ref. 906.6 e Calibrador High - (Alto)
Ref. 906.7). Para configurar la programación del aparato e introducir 11. Incubar 30 minutos en baño María a 37 ºC.
correctamente los datos de la Master Curve, consultar el manual del
equipo. 12. Retirar los tubos del baño María.

Cuando los reactivos se mantienen en las condiciones indicadas, la 13. Repetir por seis veces consecutivas los pasos 7 e 8.
calibración permanece estable durante 15 días.

03 Español - Ref.: 906

14. Para obtener los resultados, proceder de la siguiente manera: Estudios de precisión . Los estudios de precisión se realizaron
1. Realizar el prime del luminómetro (consultar las instrucciones de utilizándose muestras nativas en tres niveles distintos:
uso del producto Soluciones Reveladoras - Ref. 909 y el manual de
operación del luminómetro); Repetitividad - Imprecisión intra-ensayo
2. Seleccionar el protocolo de la prueba que tiene los datos de la
Media
Master Curve; N DE CV (%)
(ng/dL)
3. Realizar la medición de los calibradores de ajuste (si es
Muestra 1 40 0,61 0,07 3,30
necesario), muestras y controles.
Muestra 2 40 1,17 0,08 3,53
Muestra 3 40 3,93 0,19 3,74
Intervalo operativo . El intervalo operativo de la prueba es de
0,3 ng/dL hasta 6,0 ng/dL. El límite del intervalo se define de acuerdo a la
concentración del último calibrador de la curva de calibración. Las
muestras con resultados más bajos que el límite de sensibilidad analítica Reproducibilidad - Imprecisión total
deben reportarse como <0,3 ng/dL. Las muestras con concentraciones Media
superiores al calibrador 6 de la Master curve deben reportarse como N (ng/dL) DE CV (%)
superior a este valor. Consultar la Master curve que acompaña el kit para
obtener el valor del calibrador 6. Debido a la situación de equilibrio entre la Muestra 1 40 0,61 0,09 10,61
T4 y sus proteínas de unión, la dilución de muestras que contienen T4 Muestra 2 40 1,17 0,08 7,17
Libre no proporciona resultados confiables. Muestra 3 40 3,93 0,20 6,19

Control interno de calidad . El laboratorio debe mantener un

programa de control interno de calidad que define claramente los Sensibilidad metodológica o analítica . Límite de detección
reglamentos aplicables, objetivos, procedimientos, normas, criterios 0,3 ng/dL. Representa la concentración más baja de T4 Libre que se
para especificaciones de la calidad y límites de tolerancia, acciones puede distinguir de cero. Equivale a la concentración de T4 Libre situada
correctivas y registro de las actividades. El uso de los controles en todos dos desviaciones estándares por encima del calibrador 1 (0 ng/dL)
los conjuntos de pruebas es esencial para controlar la imprecisión de la
5
medición y desviaciones de la calibración. Significado clínico . La T4 incorporada a las proteínas
Se sugiere utilizar las preparaciones de la Línea Qualitrol Q de Labtest transportadoras representa un depósito de T4 necesario para mantener
(Ref. 907) para control interno de la calidad en ensayos de constante la concentración plasmática de la hormona libre (T4 Libre).
quimioluminiscencia. Periféricamente la T4 Libre se convierte en T3 que es el metabolito más
activo.
Intervalo de referencia2 . Se debe utilizar el intervalo solo para
orientarse. Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio La estimulación de la producción de T4 se hace por la hormona tirotrópica
intervalo de referencia en la población atendida. (TSH). La integración bioquímica de la hipófisis anterior, productora de
TSH y la tiroides, glándula de destino, se hace a través de la Hormona
Suero o plasma: 0,70 - 2,0 ng/dL liberadora de tirotropina, la TRH (Thyrotropin Releasing Hormone), que
actúa directamente sobre la hipófisis y estimula la producción de TSH.
3
Características de desempeño Así, altos niveles de T4 inhiben la producción hipotalámica de TRH,
reduciendo de esta manera el estímulo para la producción de TSH
Comparación de métodos . El método que se propone fue hipofisaria. Por otro lado, la reducción de los niveles plasmáticos de T4
comparado con producto disponible en el mercado, que utiliza resulta en una elevación de la producción de TSH a través de la
metodología similar y se obtuvo los resultados a continuación: disminución del control del hipotálamo.

La comprensión de los mecanismos básicos mencionados

Método Método anteriormente lleva directamente a las interpretaciones clínicas de los
Comparativo Labtest hallazgos de laboratorio encontradas en las diversas patologías. Por lo
Número de muestras 40 40 tanto, en el hipotiroidismo primario, resultante de acometimiento de la
Intervalo de glándula tiroides, los niveles de T4 (y también de T3) se encuentran
0,43 - 2,90 0,51 - 3,28 reducidos. En el hipotiroidismo discreto o en su fase inicial, se puede
concentraciones (ng/dL)
Media de las estimaciones encontrar la T4 en el intervalo de referencia, a pesar de que los niveles de
1,36 1,56 TSH pueden estar altos.
(ng/dL)
Método Labtest = 1,0478 x En el hipotiroidismo secundario, el defecto metabólico está en el nivel
Ecuación de regresión
Método Comparativo + 0,1294 central y ocurre debido a un disturbio en el eje hipotalámico-hipofisario,
Coeficiente de correlación 0,978 resultante de lesiones en el hipotálamo, en la hipófisis o en ambos. En
este caso, los niveles de T4 se reducen.
Usando la ecuación de regresión, el error sistemático (sesgo) estimado
En el hipertiroidismo primario, como lo que ocurre en la Enfermedad de
fue igual a 15,3% para una muestra igual 1,17 ng/dL y 8,07% para una
4 Graves-Basedow, nódulos tiroideos o adenoma tiroideo, los niveles de
muestra igual 3,93 ng/dL, error considerado aceptable y que no
T4 en la mayoría de los casos estarán altos.
representa desviaciones de resultados entre la metodología comparativa.

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Observaciones Presentación
Producto Referencia Contenido
1. El laboratorio clínico tiene como objetivo proveer resultados exactos y
1 X 5 mL
precisos. La utilización de agua de calidad inadecuada es una causa
potencial de errores analíticos. El agua utilizada en el laboratorio debe ANTI T4 1 X 5 mL
tener la calidad adecuada para cada aplicación. Así, para preparar DIL REA 1 X 5 mL
reactivos, usar en las mediciones y para su uso en enjague final de la # 1 X 0,1 mL
vidrería, el agua debe tener resistividad ³1 [Link] o conductividad T4 Libre 906-50
$ 1 X 5 mL
£1 microsiemens/cm y concentración de silicatos <0,1 mg/L. Cuando la
% 1 X 1,0 mL
coluna desionizadora está con su capacidad saturada, ocurre liberación
de vários iones, silicatos y sustâncias com gran capacidad de oxidación o &' 1 X 1,0 mL
reducción que deterioran los reactivos en pocos días o incluso horas, 2 X 25 un
alterando los resultados de modo imprevisible. Por lo cual es fundamental
estabelecer un programa de control de la calidad del agua.
Informaciones al consumidor
Referencias
1. Arup Laboratories: National Reference Laboratory. Disponible en: < [Términos y Condiciones de Garantía]
[Link]>, acceso en 07/2012.
Labtest Diagnóstica garantiza el desempeño de este producto, dentro de
2. Tietz NW: Clinical Guide to Laboratory Tests, [Link]. Philadelphia: las especificaciones, hasta la fecha de expiración indicada en los rótulos,
Saunders Company, 1995. p. 596 - 597. siempre que los cuidados de utilización y almacenamiento indicados en
los rótulos y en estas instrucciones, sean seguidos correctamente.
3. Labtest: Datos de Archivo.

4. RiliBÄK (Richtlinien der Bundesärztekammer), publicado en 2009 en el Labtest Diagnóstica S.A.

site del CLIA ([Link]). (acceso en 07/2012).
CNPJ: 16.516.296 / 0001 - 38
Av. Paulo Ferreira da Costa, 600 - Vista Alegre - CEP 33400-000
5. Burtis CA, Ashwood ER, Bruns DE: Tietz Textbook of Clinical Chemistry
Lagoa Santa . Minas Gerais Brasil - [Link]
and Molecular Diagnostics, [Link]. St. Louis: Sauders/Elsevier, 2006. p.
2053-2095. Servicio de Apoyo al Consumidor e-mail: sac@[Link]

Edición: Enero, 2013 Copyright by Labtest Diagnóstica S.A.

Ref.: 300315 Reproducción bajo previa autorización

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