Universidad Ana G.
Méndez, Recinto de Gurabo
División de Ciencias y Tecnología
Departamento de Biología
EJERCICIO 6: INSTRUMENTACIÓN
I. Objetivos de la experiencia
• Aprender destrezas necesarias para las experiencias a llevarse a cabo en el laboratorio
de genética
• Utilizar las micropipetas adecuadamente
• Determinar la exactitud y la precisión de las medidas
II. Introducción: Importancia de las medidas tomadas con las micropipetas
Las micropipetas son dispositivos que permiten medir volúmenes pequeños que van desde 1 μl
hasta 1 ml (hoy en día hay micropipetas de hasta 5 ml). Al igual que las pipetas éstas pueden
servir para contener o para vertir volúmenes. En algunas experiencias de laboratorio estaremos
utilizando micropipetas ya sea para un volumen fijo o un volumen variable. Las micropipetas
tienen un rango de valores que permiten ajustar la micropipeta al volumen deseado. Debido a
que muchas compañías han diseñado micropipetas, es importante leer las instrucciones para
asegurar el uso adecuado de la misma. Independiente del modelo todas las micropipetas
funcionan utilizando un pistón y puntas plásticas (tips) en uno de sus extremos lo que permite
colectar el volumen deseado (Figura 1).
Figura 1: Partes de la micropipeta.
Las micropipetas tienen un valor máximo de volumen, el cual puede ser identificado en la parte de
arriba del pistón de la micropipeta o en uno de los lados (Figura 2). Exceder este volumen provocaría
un error en la medida. La Tabla 1 muestra los rangos de volúmenes que pueden medir las diferentes
micropipetas.
Figura 2. Micropipetas: volúmenes máximos
Tabla 1: Rangos de volúmenes de las diferentes micropipetas.
Pipeta Rango de uso (µl) Volumen mínimo (µl) Volumen máximo (µl)
P2 0.2 – 2 0.2 2
P10 0.5 - 10 0.5 10
P20 2-20 2 20
P100 10 - 100 10 100
P200 20 - 200 20 200
P1000 100 - 1000 100 1000
III. Instrucciones específicas para el uso de micropipetas
1. Selección de la micropipeta a utilizar según el volumen a dispensar. La tabla 1 muestra los
rangos de volúmenes que se pueden pipetear utilizando las micropipetas. Para prevenir un
daño en el mecanismo interno de la micropipeta recuerde no sobrepasar los volúmenes
mínimos ni máximos permitidos para cada micropipeta.
2. Debido a que la micropipeta tiene un rango de volumen ajustable, es necesario seleccionar el
volumen a medir. Para ello se debe localizar el indicador de volumen, compuesto de tres
dígitos que se deben leer de arriba hacia abajo (en el caso de las micropipetas del laboratorio).
En la parte más baja del indicador hay una escala que permite el ajuste del volumen al último
dígito o decimal permitido según el caso. En las micropipetas de 2 hasta 200 μl, los dígitos
negros indican microlitros y los dígitos rojos representan décimas de microlitro.
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En la figura 3 se muestra un ejemplo de cómo debe lucir el indicador de volumen para
medir diferentes volúmenes. La tabla 2 muestra algunos ejemplos de volúmenes medidos.
Figura 3: Indicador de volumen.
Tabla 2: Ejemplos de volúmenes medidos.
3. Ajustar el volumen de la micropipeta con el graduador de volumen (ver Figura 1) hasta llegar
a 1/3 por encima del valor deseado. Luego, lentamente, girando el tornillo o la rueda, disminuir
el ajuste hasta el valor deseado prestando atención para no excederlo. Si se excede, es
aconsejable repetir el procedimiento de ajuste. Siempre se debe ajustar el volumen deseado
desde un volumen más alto hasta obtener la medida menor que se desea medir.
4. Seleccionar la punta o tip plástico apropiado para la micropipeta: La punta debe ajustarse al
cono de la micropipeta (ver figura 1). Al insertar la punta en el cuerpo de la pipeta hay que
aplicar presión con movimiento giratorio para asegurar la hermeticidad. Nunca usar la pipeta
con líquidos sin la punta colocada. Es posible que la punta plástica se encuentre en una caja
también plástica que facilita su uso. Si la punta no queda bien ajustada o no está en la caja,
deberá ajustarse con la mano sin tocar la superficie que estará en contacto con la solución a
medir.
5. Aspiración: apretar el botón pulsador hasta el primer tope (Figura 4A)
6. Con la pipeta en posición vertical, sumergir la punta entre 1 mm y 3 mm en la muestra.
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7. Lentamente se aspira el líquido al relajar la presión del dedo sobre el botón pulsador (Figura
4B). Si este paso no se realiza con atención, puede entrar aire en la punta y la cantidad de
muestra aspirada no será la adecuada.
8. Esperar un segundo y retirar la punta del líquido.
9. Dosificación: colocar la parte inferior de la punta contra la pared interior del recipiente
depositar el líquido, con un ángulo entre 10⁰ y 70⁰.
10. Apretar el botón pulsador suavemente hasta el primer tope (Figura 4C) y esperar un segundo.
11. Apretar el botón pulsador hasta el segundo tope para vaciar el resto del líquido (Figura 4D).
Manteniendo apretado el botón pulsador en el segundo tope, retirar la pipeta deslizando la
punta por la pared del recipiente. Soltar luego el botón pulsador (Figura 4E).
12. Expulsar la punta apretando el botón del expulsor (Figura 4F).
Figura 4. Posiciones de la micropipeta a la hora de medir un volumen específico. A: Botón
pulsador en el primer tope, B: la punta de la micropipeta es sumergida entre 1 mm y 3 mm
en la muestra para luego liberar el botón pulsador suavemente hasta su posición original, C:
Formacorrecta de dispensar el líquido medido en el recipiente correspondiente, D: Posición
de la micropipeta al apretar el botón pulsador hasta el segundo tope, E: Vuelta a la posición
inicial, F: Expulsión de la punta, la cual debe ser descartada en un recipiente apropiado.
Tomado del manual de manejo de micropipetas Biorad, BR/06/05
Importante: Para no dañar el sistema interno de pistones que posee la micropipeta: el líquido
nuncadebe entrar en contacto con el cono de la micropipeta, nunca vuelque la micropipeta con
la parte de arriba hacia abajo, nunca coloque la micropipeta en forma horizontal si la punta tiene
líquido, nunca ajuste el volumen fuera del rango de la micropipeta.
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IV. Complete las siguientes actividades
Actividad 1. Micropipetas
a. Escriba el nombre de las partes de la micropipeta señaladas en el siguiente diagrama.
b. Complete la siguiente tabla. Para cada volumen que se necesite medir, escriba cuál es la
micropipeta adecuada para tomar el volumen (Sólo puede utilizar una P2, P20, P200 y P1000).
Volumen Pipeta
1.5 µL
8 µL
11 µL
75 µL
138 µL
610 µL
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c. Complete la siguiente tabla. Indique el tipo de micropipeta escogida para cada volumen y la
forma como se leerá en la ventana del volumen. (Sólo puede utilizar una P2, P20, P200 y
P1000).
Micropipeta
P P P P P P
Volumen 1.3 µL 8 µL 17 µL 57 µL 171 µL 730 µL
Actividad 2: Pipeteo utilizando micropipetas.
A. Mezcla de compuestos para preparar soluciones
1. Utilice un marcador indeleble para rotular los cinco microtubos de reacción: 1, 2, 3, 4 y 5.
2. Coloque la micropipeta disponible, ya sea la P-10, P-20, P100 ó P200 en el volumen
deseado según la solución que desea hacer. Por ejemplo: Para la solución #1 debe añadir
17 µl del compuesto C y 83 µl del compuesto D.
3. Proceda a aspirar el volumen deseado utilizando la micropipeta y échelo en el microtubo
correspondiente.
4. Expulse la punta en el recipiente de residuos de plástico y reemplácela por una nueva.
5. Proceda a colocar otra punta y añada el próximo compuesto según aparece en la tabla III.
6. Continúe repitiendo estos pasos hasta que haya terminado de añadir todos los compuestos.
Tabla 3: Resumen de volúmenes en los microtubos:
Soluciones
1 2 3 4 5
A 0 µL 32 µL 60 µL 26 µL 33 µL
Compuestos
B 0 µL 68 µL 0 µL 53 µL 33 µL
C 17 µL 0 µL 0 µL 21 µL 34 µL
D 83µL 0 µL 40 µL 0 µL 0 µL
100 µL 100 µL 100 µL 100 µL 100 µL
B. Comprobación de la precisión y la consistencia del pipeteado
1. Los microtubos 1, 2, 3, 4 y 5 deben contener 100 μl de solución.
2. Prepare su micropipeta en 100 μl y coloquen una punta nueva en el cilindro.
3. Verifiquen con cuidado el volumen de cada microtubo, debe tener un volumen de 100 μl.
4. Tome una foto de las 5 soluciones
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V. Resultados:
Complete la siguiente tabla:
Color de la Razones para no obtener el
Solución Volumen obtenido
mezcla volumen medido
1
2
3
4
5
Documentar los resultados de forma fotográfica
Colocar acá la fotografía
VI. Discusión
Tenga en cuenta estas recomendaciones para hacer su discusión. La discusión de esta práctica de
laboratorio debe ser sobre todas las actividades realizadas con la micropipeta. Comience
explicando si fue capaz de identificar las partes de la micropipeta, si pudo identificar la micropipeta
adecuada para el volumen requerido y si pudo aprender a leer el volumen de la micropipeta
correctamente. Luego debe comentar sobre el uso de la micropipeta. ¿Cómo fue su precisión
durante el ensayo? Al comparar sus muestras con la de sus compañeros, ¿Obtuvieron los mismos
colores? ¿Fueron sus compañeros precisos?
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VII. [Link]
VIII.
IX. Referencias:
• Foto de micropipeta: [Link]
• Información sobre uso de pipeta y micropipetas:
[Link]
df
• Actividad de Pipeteo. Adaptado del Programa Bruce Wallace, UPRH
• Microscopio: Tortora G., Funke B., Case C. (2010). Microbiology An Introduction. Tenth
edition. Pearson, Manual de laboratorio de Biología General I, UPRH.
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