UNIVERSIDAD DE SUCRE - FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD

ASIGNATURA. BIOQUIMICA DOCENTES. Q.F. RINA MARTINEZ CARDEÑO - PhD NERLIS PAJARO – José Luis Macareno Barvo Q.F. [Link]

PRACTICA No. 2
MEDICIÓN Y MANIPULACION DE EQUIPOS DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA
1. OBJETIVOS
• Aprender el correcto manejo de las balanzas, realizar la medición de diferentes masas de sustancias.
• Conocer las partes y funcionamiento de las micropipetas
• Efectuar mediciones de volúmenes realizando comparaciones con los diferentes instrumentos volumétricos
• Adquirir destrezas en la utilización de micropipetas para la medición de volúmenes en el rango de los µL
• Evaluar la calibración de las micropipetas, su exactitud y precisión

2. INTRODUCCIÓN
Un estudiante en el laboratorio de bioquímica debe ser capaz de manipular cantidades muy pequeñas de sustancias y/o
muestras, de ahí que, de las prácticas generales de medición en el laboratorio de bioquímica, una de las más comunes son
la medición de los volúmenes, para lo cual se usan los instrumentos volumétricos. Aunque el dominio completo de estos
materiales se conseguirá definitivamente a través de la experiencia, es importante comenzar a familiarizarse con las
formas correctas de sus manipulaciones, cuidados y fuentes de error en su uso. Los equipos que pueden ayudar en este
proceso se denomina micropipetas y deben ser empleadas con precisión, ya sea usen las de volumen variable o las de
volumen fijo para adicionar y transferir pequeñas cantidades de reactivos y muestras con precisión y exactitud.

Al igual que la medición de volúmenes, la medición de masas también resulta ser bastante común en el laboratorio. De
igual modo, el dominio completo de estas mediciones solo se conseguirá a través de la experiencia.

En esta guía se explica el buen manejo de estos equipos al tiempo que se pone a prueba o se evalúa la exactitud de estas
herramientas y su comprensión de como configurarlas para obtener con precisión la cantidad de líquido requerido

3. MATERIALES Y REACTIVOS
- Beaker
- Pipeta graduada
- Pipeta volumétrica
- Micropipetas
- Puntas para las micropipetas
- Probeta
- Balanza Analítica
- Vidrio de reloj

4. PROCEDIMIENTO

Medidas volumétricas:
Las pipetas de vidrio no son muy precisas para volúmenes de menos 1 mL, pero las micropipetas son tanto exactas (menos
de 1% de error), como precisas (menos de 0.5%)
Cada micropipeta se puede configurar para transferir cualquier volumen dentro de su propio rango de volumen, utilizando
puntas especialmente diseñadas para los diferentes volúmenes de pipeteo. Cabe destacar que el uso de micropipetas
permite emplear distintos sin tener que lavarlas, para ello se utilizan las puntas desechables.

FOR-CO-009_Ver. 4.0
UNIVERSIDAD DE SUCRE - FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD
ASIGNATURA. BIOQUIMICA
DOCENTES. Q.F. RINA MARTINEZ CARDEÑO - PhD NERLIS PAJARO - José Luis Macareno Barvo Q.F. [Link]

La utilidad y confiablidad de un análisis depende del control de las fuentes de variación, entre ellas, la verificación y/o
calibración de las micropipetas debido a que estas son utilizadas en los ensayos de bioquímica y es necesario su revisión
para garantizar resultados confiables. Además, las cantidades que se requieren en muchos casos para las reacciones son
pequeñas, por lo que si la micropipeta está desequilibrada estrían tomando volúmenes equivocados.

Procedimiento experimental
Realizar o verificar el inventario del material suministrado en su gaveta de prácticas o puesto de laboratorio y efectuar las
siguientes manipulaciones u operaciones.
1. Depositar en un beaker (vaso de precipitado) de 500 mL aproximadamente 300 mL de agua destilada.
2. Usando la pipeta (pera de goma) llene hasta sobrepasar la línea de calibrado de una pipeta volumétrica de 25 mL.
Deje escapar el volumen sobrante hasta que el menisco inferior enrase con la línea de calibrado. Deposite el volumen
anterior en una probeta de 50 mL. Efectúe la lectura y observe si hay alguna diferencia con el volumen inicial, en caso
afirmativo explique la razón.
3. Complete con agua destilada el volumen total de probeta anterior llevándolo hasta la línea de calibrado. Introduzca
una pipeta graduada y déjela llenar libremente por presión. Saque la pipeta y haga la lectura del volumen tomado.
¿Cuándo se debe aplicar este método?
4. Del volumen tomado de la pipeta deje escapar sucesivamente 10 gotas, 4.5 mL, y 8 mL de agua. Repita el
procedimiento hasta que lo ejecute correctamente.
5. Deposite 100 mL de agua en un erlenmeyer, luego pásalo a un beacker
6. Deposite 100 mL de agua en un beacker, luego pásalo a una probeta de 100 mL
7. Deposite 100 mL en un erlenmeyer, luego pásalo a un matraz de 100 mL

1
UNIVERSIDAD DE SUCRE - FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD
ASIGNATURA. BIOQUIMICA
DOCENTES. Q.F. RINA MARTINEZ CARDEÑO - PhD NERLIS PAJARO - José Luis Macareno Barvo Q.F. [Link]

Práctica con las micropipetas

8. Toma la punta dependiendo de la micropipeta
9. Coloca el dedo pulgar sobre el botón pulsador de la micropipeta
10. Pulsar el botón pulsador, hasta que se sienta un punto de resistencia que es el primer tope, ya que si continúa pulsando
se tendrá el segundo tope que generalmente es empleado para expulsar la totalidad de los líquidos de la micropipeta
11. Al oprimir el botón pulsador hasta el primer tope se puede introducir la punta de la micropipeta unos pocos mm y
luego soltar suavemente para succionar el líquido y llenar la punta.
12. Luego desplace la micropipeta al recipiente al que se va adicionar el líquido y expúlselo oprimiendo el botón pulsador
hasta el segundo tope suavemente

Práctica de micropipeteo
En este experimento, se pipetea 10 µL de agua destilada en un tubo Eppendorf de 1.5 Ml. Observe el volumen ty anote en
su libreta de laboratorio, luego adicione 18 µL de agua detilada y hacer otra observaciónagregue 80 µL de agua y observe.
Por último, añadir 900 µL de agua y observar. Asegúrese de que está utilizando la pipeta correctamente. Cada integrante
del grupo de laboratorio debe probar una o dos pipetas usando la cantidad de agua detilada suministrda.

Medidas de masa
• Reconozca las partes de las balanzas que se encuentran en el laboratorio.
balanza analítica: con platillo protegido de las corrientes de aire, puede ser de cruz con doble platillo o de un solo
platillo. Esta balanza aprecia hasta las décimas de miligramos 0.1 mg ó 0.0001 g. (figura 1).

Figura 1 Balanza Analítica

1. Botón Micrométrico 2. Indicador de peso 3. Platillo 4. Botón ajuste cero 5. Nivelador 6. Ventanilla 7. Botón
cambio de pesos 10-10g 8. Botón cambio de pesas 1-1 g.
En el manejo de la balanza se deben tener en cuenta los siguientes cuidados y precauciones:

✓ El sitio de ubicación de una balanza debe estar libre de corrientes de aire, vibraciones y cualquier tipo de
movimientos que altere la respuesta; ésta debe descansar sobre una superficie plana.
2
UNIVERSIDAD DE SUCRE - FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD
ASIGNATURA. BIOQUIMICA
DOCENTES. Q.F. RINA MARTINEZ CARDEÑO - PhD NERLIS PAJARO - José Luis Macareno Barvo Q.F. [Link]

✓ La balanza debe ser manejada por una sola persona, la cual debe estar situada frente a ella.
✓ No pese objetos que excedan la carga de seguridad de la balanza que esté usando
✓ Jamás coloque las sustancias directamente sobre el platillo de la balanza, sino sobre un vidrio de reloj, crisol o
pesa sustancias. Preferiblemente evite pesar sobre papel.
✓ No coloque nunca objetos calientes sobre el platillo
✓ No se debe golpear la caja ni el soporte de la balanza en ningún momento, ni tocar parte alguna del aparato o
de su apoyo durante la fase de lectura.
✓ Cuando termine la fase de lectura o de pesada, cerciórese que la balanza no quede cargada, que está apagada y
el platillo completamente limpio.
✓ Cubra la balanza con la funda correspondiente mientras no esté en uso.
✓ Para pesajes en serie utilice siempre la misma balanza

Para realizar una pesada de la siguiente manera:

• Coloque la balanza en un sitio firme y sin corrientes de aire
• Accione el botón de encendido
• Verifique que la balanza este en cero
• Verifique que este nivelada, si no lo está accione los botones cuidadosamente hasta lograrlo
• Coloque el recipiente pesa sustancias sobre el platillo de la balanza y acciones el botón de tara, si la balanza lo
posee, si no es así obtenga el peso del recipiente, adicionando o quitando peso con el botón macrométrico o
micrométrico de acuerdo al caso
• Anote el peso del recipiente
• Procesa a pesar la sustancia correspondiente teniendo en cuenta, que, si es un polvo, con la espátula tome
pequeñas cantidades y adicione al recipiente hasta obtener el peso deseado
• Elimine las pesas de la balanza hasta dejarlo en cero
• Retire el recipiente con la sustancia pesada
• Apague la balanza
• Si la balanza funciona con fluido eléctrico, desconéctela si no la va a seguir usando
• Limpie el platillo en caso de haber derramado alguna sustancia
• Coloque las fundas de protección de la balanza
• Siempre tenga en cuenta los siguientes cuidados:
• Nunca pese sustancias directamente sobre el platillo de la balanza, ni coloque sustancias calientes
• No sobrepase la capacidad máxima de la balanza.

Realice las siguientes pesadas:

• En la balanza mida la masa de un vidrio de reloj, tarar y añadir 1,5 gramos de NaCl.
• Mida el peso de cualquier objeto como anillo, cadena, reloj.
13. CUESTIONARIO
1. Analice y explique qué cuidados debes tener para que las mediciones volumétricas sean confiables.
2. Explique la importancia de adquirir destrezas en este tipo de prácticas de laboratorio
3. Que otros tipos de balanza se utilizan en el laboratorio
4. Que utilidad tiene la balanza en un laboratorio de bioquímica
14. BIBLIOGRAFÍA
Brown, TL., Lemay, HE., Bursten, BE. Química. La ciencia central, Prentice & Hall. México. 1991.
Chang, R. Química. MacGraw-Hill. Mexico. 1994.
Skoog West. Química analítica.