热蛋白质组分析（TPP）：解析病原体与宿主细胞相互作用的新利器

更多详细信息请见：最经典、主流的药物靶点筛选技术——TPP热蛋白组分析

在细胞生物学和微生物学的研究领域，揭示病原体与宿主细胞之间的复杂相互作用对于理解感染机制和开发新的治疗策略具有重要意义。传统的蛋白质组学方法通常侧重于蛋白质的丰度变化，然而，热蛋白质组分析（Thermal Proteome Profiling, TPP）技术的出现为研究蛋白质的功能状态提供了一种全新的视角。TPP通过测量蛋白质在温度梯度下的热稳定性变化，揭示蛋白质的生物物理状态改变，如配体结合、磷酸化、蛋白质相互作用等。本文将通过介绍TPP技术在沙门氏菌（Salmonella enterica subsp. Typhimurium, STm）感染宿主细胞研究中的应用，来展示其在解析病原体与宿主细胞相互作用中的强大潜力。

热蛋白质组分析实验工作流程

TPP在沙门氏菌感染研究中的应用

在该沙门氏菌感染宿主细胞的研究中，TPP技术被用来系统评估STm感染周期中宿主蛋白丰度和热稳定性的变化。研究者比较了活STm和热杀死STm（HK-STm）处理的巨噬细胞，通过TPP技术检测宿主蛋白的热稳定性和丰度变化。研究结果揭示了以下重要发现：

1. 区分活菌与死菌感染的宿主响应：

通过比较活STm和HK-STm处理的巨噬细胞，研究发现大部分宿主蛋白丰度变化在两种处理条件下相似，表明这些变化多为对革兰氏阴性菌的通用响应。然而，蛋白热稳定性变化在活STm和HK-STm处理之间的相关性较低，尤其是在感染4小时后，这与STm的SPI-2效应子注入和细胞内增殖时间一致，表明活STm对宿主蛋白热稳定性有广泛影响。

 STm感染会影响宿主蛋白质的热稳定性

2. 发现关键蛋白的热稳定性变化 ：

TPP技术揭示了与线粒体功能相关的蛋白（如Acod1/Irg1、Cox6c、Samm50、Vdac1等）和干扰素诱导的含四肽重复蛋白Ifit1的热稳定性在活STm感染中发生显著变化。这些蛋白的热稳定性变化可能反映了沙门氏菌对宿主细胞代谢和免疫功能的调控。

STm对宿主蛋白丰度和热稳定性的特异性变化

3. 揭示新的分子相互作用 ：

通过整合TPP数据和STm-宿主蛋白相互作用数据库，研究发现STm分泌的效应子激酶SteC能使宿主核糖体保存因子Serbp1热不稳定化并磷酸化。这一发现不仅揭示了SteC在沙门氏菌感染中的新功能，还为理解宿主-病原体相互作用提供了新的分子机制。

STm效应子SteC在热上不稳定和磷酸化Serbp1

结论

TPP技术为研究病原体与宿主细胞相互作用提供了一种强大的工具。在沙门氏菌感染的研究中，TPP不仅帮助研究者区分了活菌与死菌感染引起的宿主细胞响应，还揭示了关键蛋白的热稳定性变化和新的分子相互作用。未来，随着TPP技术的不断完善和应用范围的扩大，它有望在更多的病原体-宿主相互作用研究中发挥作用，为感染机制的理解和新型治疗靶点的发现提供重要支持。

通过本文的介绍，我们希望读者能够对TPP技术及其在病原体与宿主细胞相互作用研究中的应用有一个初步的了解。这种创新的技术手段正在改变我们对细胞内复杂生物学过程的认识，为生命科学研究开辟了新的道路。