自噬机制解析（二）：一文厘清 LC3/Atg8 概念及实验应用要点

在自噬机制研究中，LC3/Atg8 蛋白是监测自噬活性的核心标志物，但其亚型分类、加工过程及检测逻辑常给初学者带来困惑。本文结合实验实际场景，从 LC3 的来源与去向、动态变化规律、种属细胞分布特点及电泳迁移特性四个维度，系统梳理 LC3/Atg8 相关核心知识点，为自噬实验设计与结果分析提供参考。

一、LC3/Atg8 的 “生命周期”：从加工生成到降解回收

LC3（Microtubule-associated protein 1 light chain 3）作为 Atg8（AuTophaGy-related protein 8）家族在哺乳动物中的同源蛋白，其功能实现依赖于一系列蛋白修饰过程，具体可分为以下关键步骤：

1. 初始剪切：生成胞质可溶性 LC3-I
   未修饰的 LC3 前体蛋白首先被具有蛋白内切酶活性的Atg4识别，在其羧基端（C 端）进行剪切，去除部分氨基酸残基，形成分子量约 16kD 的可溶性蛋白，即LC3-I。此时 LC3-I 主要分布于细胞质中，不具备结合膜结构的能力。

2. 泛素样修饰：脂质化生成膜结合型 LC3-II
   LC3-I 需通过泛素样反应完成脂质化修饰：

   • 第一步，LC3-I 在E1 样酶 Atg7的作用下被激活，形成 Atg7-LC3-I 复合物；
   • 第二步，激活后的 LC3-I 被转移至E2 样酶 Atg3，形成 Atg3-LC3-I 复合物；
   • 第三步，在 Atg5-Atg12-Atg16L 复合物（E3 样连接酶）的介导下，LC3-I 与自噬相关膜结构上的磷脂酰乙醇胺（PE