32、潜指纹与DNA恢复技术解析

潜指纹与DNA恢复技术解析

1. 引言

自1985年“DNA指纹识别”(后更名为“DNA分型”)技术被发现以来,DNA(脱氧核糖核酸)分析就成为了破案的有力工具。早期使用的RFLP(限制性片段长度多态性)方法逐步被如今的STR(短串联重复序列)方法所取代。STR是长度为2 - 7个碱基对的重复DNA区域,个体间的重复次数存在差异。这种转变主要基于两个原因:一是PCR(聚合酶链式反应)能轻松扩增STR,提高了DNA分型的灵敏度;二是仅需100皮克的源DNA。此外,“多重PCR”技术可同时扩增和分析多个STR。美国联邦调查局(FBI)建立的联合DNA索引系统(CODIS)要求DNA完整图谱至少包含20个STR。

2. DNA分析工作流程

DNA分型的工作流程如下:
1. 收集生物材料 :从犯罪现场收集可能含有DNA的生物材料。
2. DNA提取
- FTA纸法 :回收的细胞与FTA纸接触时被裂解并固定,取出一小片纸放入管中清洗和纯化,以去除PCR反应的抑制剂。
- 有机(酚 - 氯仿)提取法 :使用洗涤剂(如十二烷基硫酸钠,SDS)和蛋白酶K裂解细胞并分解蛋白质,酚/氯仿分离DNA与蛋白质和细胞碎片,最后用乙醇沉淀DNA,部分方案使用Microcon® 100浓缩样本。
- Chelex® 100法 :一种离子交换树脂,主要功能是螯合金属离子(如镁),保护DNA免受核酸酶破坏。需将生物样本加热至100°C以裂解细胞。
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