标签蛋白_His标签蛋白镍柱纯化后总有一条杂带怎么办?

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小明

His标签蛋白镍柱纯化有杂带怎么办啊e71d759b2fad9e086fbb0e8bb2a82315.gif

e72b7d758d40b55c1e82f8cf11b2cbcd.pnga3f49b7cba7d5e103dd8cd3aa04c3fe8.png汇研生物——His标签蛋白纯化填料家簇

1.样品本身的的属性,His蛋白容易被体系中的蛋白酶降解时,此时就要在样品中加入蛋白酶抑制剂。避免在纯化过程中His蛋白被降解,呈现出纯化后纯度下降。

2.His蛋白和其它蛋白结合在一起,纯化后也呈现出纯度不够,这时就需要考虑减少蛋白分子之间的作用力,比如加入2% Triton X-100或者加入10-50%的甘油等减少分子间的作用力。

3.理解镍柱纯化蛋白的原理,除带有His标签的蛋白可以可以镍柱结合,镍柱也能和带有半胱氨酸等氨基酸残基的蛋白结合。理解仅靠一步镍柱纯化90%左右纯度是正常的,若需要更高的纯度,则需要继续纯化,比如镍柱洗脱峰在过汇研生物(联系W/Q:514099167,www.huiyan-bio.com)的复合型离子交换层析MMA/MMC Focurose  6HF等。

4.层析体系需要优化,缓冲体系的pH要在7.5-8.3之间,添加200-500mM氯化钠减少非特异性吸附,上样完后要彻底清洗,保证填料孔内,颗粒间未结合的蛋白全部洗出后,在开始洗脱,保证上完样后,清洗在10CV以上。洗脱过程需要摸索咪唑的强度梯度,用连续咪唑梯度来摸索洗脱浓度。

5.层析柱装填的疏密不合适,层析柱的分配器分配的不均匀。这种情况在工业生产中影响也很大,会影响其纯度等。

6.层析填料上端,和柱头分配器间的体积太大,大中大型层析柱使用过程中,液距控制在0.5cm以内,避免影响整个层析过程。

小明

该如何选择合适的镍柱啊?

IDA/IMAC/NTA/excel/TED镍柱该如何选择e71d759b2fad9e086fbb0e8bb2a82315.gif

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请参考《详述His标签蛋白的纯化》点击括号里面字体即可查看。

《His标签蛋白纯化全攻略》直播课!

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资源下载链接为: https://pan.quark.cn/s/d9ef5828b597 当使用 MySQL 5.5 版本的用户在 Windows 系统下忘记 root 账户密码时,可采用以下两种方法解决。 方法一:命令行操作 先关闭 MySQL 服务,通过命令提示符输入“net stop mysql”来实现。 接着用“mysqld --skip-grant-tables”命令启动 MySQL 服务,这样启动时不会加载权限表,能绕过密码验证直接登录。 打开新的命令提示符窗口,进入 MySQL 的 bin 目录,执行“mysql”命令启动客户端程序,无需密码即可登录。 登录后,输入“show databases;”查看所有数据库。 使用“use mysql;”切换到 mysql 数据库。 执行“update users set password=PASSWORD(新密码) where user=root;”更新 root 用户密码,其中“新密码”是自己想设置的密码。 输入“flush privileges;”重新加载权限表。 输入“quit”退出客户端,再通过“net start mysql”重启 MySQL 服务。 方法二:通过默认账户登录 在 Windows 命令提示符中停止 MySQL 服务。 直接运行“mysql -u root”启动 MySQL 客户端,可能需以管理员身份运行命令提示符,或使用有默认无密码登录权限的用户。 在客户端执行“use mysql;”进入 mysql 数据库。 再执行“update users set password=PASSWORD(新密码) where user=root;”更新密码。 执行“flush privileges;”重新加载权限表。 输入“quit”退出客户端,重启 MySQL 服务。 操作时要注意:Windows 下路径和
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