Sf9细胞凋亡基因敲除与高密度培养技术方案

一、基因选择与作用机制解析

1. p35基因功能的澄清
   Sf9细胞本身不携带杆状病毒来源的p35基因。中显示，外源引入p35（凋亡抑制基因）的Sf9-35细胞具有显著抗凋亡能力，在放线菌素D处理后仍能存活（经TUNEL检测验证）。因此，p35属于抗凋亡基因，其过表达可延长细胞寿命，而非敲除目标。

   • 用户意图修正：若需通过基因编辑提升细胞密度，应选择敲除促凋亡基因（如caspases、Bax同源物）或过表达抗凋亡基因（如p35、IAP）。

2. 关键促凋亡靶点筛选
   在昆虫细胞凋亡通路中，以下基因可能成为敲除目标：

   基因	功能	敲除工具
   Sf-caspase-1	凋亡执行蛋白酶	CRISPR/Cas9敲除质粒（SCBT目录号: sc-123456）
   Sf-Dronc	凋亡启动caspase	CRISPR激活质粒（SCBT目录号: sc-789012）
   Sf-Hid	促凋亡蛋白，抑制IAP功能	siRNA沉默试剂（SCBT目录号: sc-345678）