ISOELECTROENFOQUE
CURSO:INSTRUMENTACIN Y AUTOMATIZACIN
ALUMNO:RAMOS PACHECO JOHN OLIVER
acta como
cido y como base.
una forma dipolar
neutra, con el mismo
nmero de carga +
como -,
ISOELECTROENFOQUE
Se trata de la separacin de
pptidos
o
protenas
en
ungradiente de pH, separndose
por tanto por carga, el punto
isoelctrico (pI).
Punto isoelctrico
A
pH cido: prevalece la especie con carga +
A pH bsico: prevalece la especie con carga
Hay un valor de pH para el cul la carga de la
especie es cero. (zwitterin)
pI = pK1 + pK2
para un aa neutro
2
Punto isoelctrico: valor de pH al cul la
carga neta del aminocido es cero.
FUNDAMENTO
Se basa en la separacin de protenas
en base al
contenido de las protenas
anfotericas (aminocidos cidos o bsicos).
Para cualquier protena, el pH al cual el nmero de cargas positivas
es igual al nmero de cargas negativas
es conocido
como punto isoelctrico (pI).
Cuando el pH es igual al pI la carga neta de la protena es cero y no
tendr movilidad electrofortica.
Se aade una solucin con
protenas y se reaplica un
campo elctrico
Se genera un
gradiente estable
de pH tras la
aplicacin de un
campo elctrico
Tras la tincin,
las protenas
aparecen
distribuidas a lo
largo del
gradiente de pH
de acuerdo con
su valores de pI
Patrones de electroforesis
PROTEINAS SEGN A SU PUNTO ISOELECTRICO
EQUIPOS QUE USAN SISTEMA DE
ISOELECTROENFOQUE
Sistema de isoelectroenfoque
PROTEAN IEF Cell (Bio-Rad)
separacin
de
protenas
mediante
isoelectroenfoque utilizando hasta 24
tiras con gradiente de pH inmovilizado
(IPG) de 7, 11, o 18 cm..
utiliza hasta 24 tiras de 7 cm, o 12
tiras de 11, 17, 18, o 24 cm
dispone de bandejas
isoelectroenfoque de 7,
y 18 cm, as como
bandejas
inertes
hidratacin/equilibrado
de
11
de
de
ETTAN IPGphor III IEF es un sistema optimizado para realizar
en forma completa la tcnica de isoelectroenfoque, permite
velocidad y precisin en la primera dimensin en una
electroforesis 2-D.
pueden ser almacenados Hasta 10 protocolos
,fcilmente editados en el equipo, utilizando un
PC conectado y cargado
con el programa
adecuado.
Procesa
de
1
a
12
IPG
strips
simultaneamente a travs de IPG manifold
o cubetas cermicas.
Acomoda una bandeja para contenedores
cermicos de cintas de 1 a 12 cintas de variados
tamaos 7, 11, 13,18 24. Ideales para
diferentes procedimientos.
El IPGphor Sistema Isoelectroenfoque realiza primera dimensin
isoelectroenfoque (IEF) en la electroforesis 2-dimensional (2-D)
tiras estn disponibles en cinco
longitudes-7, 11, 13, 18 y 24 cm-y una
serie de pH rangos, varios lineal y no
lineal
Copa titulares de banda de carga para 3 mm de ancho
de 7 a 24 cm de largo
tiras de gel, que contienen un gradiente de pH
inmovilizado (IPG), los titulares de la tira, que
sirven como: la rehidratacin y cmaras de IEF de
las tiras de IPG incluye control de temperatura, y
se puede programar con hasta diez protocolos IEF
Electroforesis Capilar en Biotecnologa utilizando el Sis
tema PA-800 plus
i) CE-SDS:
1) el anlisis de pureza y
heterogeneidad
2) la separacin de protenas basado
en el peso molecular.
ii)cIEF: isoelectroenfoque capilar
iii) Clasificacin y anlisis de
carbohidratos: anlisis
cualitativo y cuantitativo de
glicanos (molculas de
oligosacridos asociados con
protenas).
r
G
i
c
a
s
a
..
