Universidad de Santiago de Chile Facultad de Qumica y Biologa Laboratorio de Anlisis Instrumental II

Determinacin de Fosforo Foliar

Nombre: Constanza Venegas A. Profesor: Dr. Mauricio Escudey Fecha de Realizacin: 2-mayo-2013 Fecha de Entrega: 9 -mayo-2013 Muestra Problema: muestra 8 (Ficcus)

Resumen Se determin la concentracin de fosforo foliar contenido en hojas de Ficcus, utilizando un espectrofotmetro visible midiendo a 470 nm y aplicando la Ley de Beer. A partir de un estndar NaH2PO4, se construyo una curva de calibrado, y a travs de sta se determina la concentracin de fosforo en la muestra que fue calcinada y posteriormente las cenizas fueron disueltas con acido ntrico y filtradas, dicha concentracin se debe corregir la masa inicial de hojas por el factor de humedad que es 1,0643, obtenindose de esta manera 0,178 % de fosforo o 1.785,85 ppm (mg/kg). Y un porcentaje de humedad de 6,43 4,76%.

Introduccin

El anlisis Foliar o de Tejidos Vegetales o danlisis de Plantas, designado a veces como anlisis de las hojas, es la determinacin del contenido elemental de minerales en alguna parte determinada de la planta. El fsforo presente en las hojas de las plantas se encuentra presente en forma de fosfatos, para poder cuantificar la cantidad de fosforo en la muestra se realiz un anlisis por el mtodo de MolibdatoVanadato de Amonio dando lugar a la formacin de un complejo de color amarillo.

(PO4)3-+(VO3)-+11(MoO4)2-+ 22H+
Objetivos

P(VMo11O40)3- + 11 H2O

Aplicacin de la espectrofotometra visible a la determinacin de P en hojas de un rbol (ficcus). Expresando la cantidad total de P a partir de las cenizas. Equipo, materiales y reactivos: o o o o Espectrofotmetro Cubetas de 1 cm matraces aforados 50 mL Reactivo de coloracin de HNO3: se prepara por mezcla de dos disoluciones, Disolucin A: se prepara por disolucin de 25 g de molibdato amnico en 400 mL de agua. Disolucion B: disolver 1,25 g de metavanadato amnico (NH4VO3) en 300 ml de agua hirviendo. Dejar enfriar y aador sobre ella 250 ml de HNO3

Procedimiento experimental: Determinacin de curva de calibrado y % de humedad

1 2 3

Se toman alcuotas de 0, 2, 5 y 10 mL de un estndar de 51 ppm de NaH2PO4 y se introducen en matraces de 50 mL.

Seguidamente se aaden 10 mL de reactivo de coloracin y se diluye hasta 50 mL con agua destilada, agitando bien. Se mide la absorbancia a 470 nm.

Para medir el % de humedad en la hojas de limn pesar 0.5 g en un vaso precipitado tarado. Poner en estufa a 105 C por una hora , se pone en desecadora y se pesa.

Determinacin de fosforo foliar En una mufla tarar a 550 C ,3 crisoles (1hora ) sacar de mufla y poner en desecadora . Una vez alcanzada la temperatura ambiente pesar los crisoles. Agregue a cada crisol 1 g de hoja limn. Calcinar en mufla a 550 C ( mnimo una hora ), deje enfriar y pesar crisoles. Las cenizas se disuelven en HNO3 6M, se filtra, se introducen en un matraz de 50 mL, se aaden 10 mL del reactivo de coloracin de cido ntrico y se diluye hasta enrase con agua destilada y se agita. Se mide la absorbancia a 470 nm.

1 2 3

Resultados I. Determinacin del % de humedad de las hojas de ficcus. Se mas una muestra 1 0,5278 g y muestra 2 de 0,5249 g de muestra de hojas de ficcus para determinar su humedad. Para calcular el porcentaje de humedad se utiliza la siguiente expresin;

% Humedad

masa hmeda masa sec a

Muestra 1: Masa hmeda 0,5278 g y masa seca 0,3377 g

% Humedad

0,5278 - 0,4977 * 100 0,4977

% Humedad = 6,05 % muestra 1.

Muestra 2: masa hmeda 0,5249 g y 0,3078 g masa seca

% Humedad

0,5249 - 0,4915 * 100 0,4915

% Humedad = 6,80 % muestra 2.

Tabla 2. Porcentaje (%) de humedad de muestra 8 (hojas de ficcus) % humedad de muestra Muestra 1 6,05 Muestra 2 6,80 X 6,43 4,76
*error calculado con un 95% de confianza.

II.

Construccin de curva de calibrado

Tabla 2. Volumen para preparar soluciones estndares a diferentes concentraciones a partir de estndar de 50 ppm de P en matraces de 50 mL y sus Absorbancia correspondientes a 470 nm. Concentracin solucin Volumen necesario Absorbancia estndares (ppm) para preparacin (mL) 0 0 0,000 4 4 0,030 8 8 0,044 12 12 0,075 16 16 0,094 20 20 0,113

Valor de longitud de onda para medir la Absorbancia, 470 nm

Figura 1. Curva de calibrado de estndar de fosforo, Absorbancia vs la Concentracin

0,12

0,10

0,08

Absorbancia

0,06

0,04

0,02

0,00 1 2 3 4 5 6

Concentracin [ppm]

y= b*x + a a: -0,01947 0,00397 b: 0,02251 0,00102

r: 0,995 Donde, valor de la pendiente (b) del grafico anterior corresponde a la absortividad molar. Dado que las concentracin de la muestra problema no se encuentra en el rango de la concentracin de la curva de calibrado, se realiza una dilucin (se toma 1 mL de solucin y se enraza con 2 mL de agua en la misma cubeta (Vt 3 mL )

Tabla 5. Masa de muestra problema de P con sus respectivas absorbancias Muestra Masa hojas (g) Masa ceniza (g) Absorbancia 1 2 3 X 0,4082 0,4003 0,4176 0,4087 0,3653 0,3570 0,3719 0,3647 0,0800 0,0670 0,1030 ---

Reemplazando el valor de la absorbancia de cada muestra problema en la ecuacin de la recta de la curva de calibrado y despeja la concentracin. Ejemplo: y = 0,02251 [concentracin] + -0,01947 , para y= 0,0800 [Concentracin]= 4,419 ppm de fosforo diluido.

Tabla 7. Concentracin de Fosforo en muestra diluida. muestra 1 2 3 X * Error calculado con un 95% de confianza. Dado que esta concentracin corresponde a la solucin diluida, se debe concentrar, por lo tanto: Concentracin (ppm) 4,419 3,841 5,441 4,567 2,011

C1 * V1 = CCONCENTADA * VCONCENTRADA 4,419 ppm * 3 mL = CCONCENTADA * 1 mL CCONCENTADA = 13,257 ppm

C2 * V2 = CCONCENTADA * VCONCENTRADA 3,841 ppm * 3 mL = CCONCENTADA * 1 mL CCONCENTADA = 11,523 ppm C1 * V1 = CCONCENTADA * VCONCENTRADA 5,441 ppm * 3 mL = CCONCENTADA * 1 mL CCONCENTADA = 16,323 ppm

Tabla 8. Concentracin de Fosforo en muestra problema concentrada. muestra 1 2 3 X * Error calculado con un 95% de confianza. Peso molecular del fosforo (P)= 30,9 g/mol Por lo tanto la concentracin la concentracin de fosforo en la muestra de hojas de ficcus es: Si, 13,701 ppm 13,7 mg 1L 0,0137 g 1L Moles = masa / PM Moles = 0,0137 g/30,9 g/mol Moles = 4,43x10-4 Para muestra: 0,0137 g 1L X g 0,05 L X = 6,85x10-4 g = 0,685 mg 6,85x10-4 g 0,3840 g Xg 100 g Concentracin (ppm) 13,257 11,523 16,323 13,701 6,034

Aproximadamente 0,178 % P/P de fosforo en la muestra problema seca. 0,685mg 0,3840 g X mg 1000 g X = 1.783,85 ppm (mg/kg) de fosforo en la muestra problema seca.

Determinacin de factor de correccin por humedad (Fh):

Fh

100 % Humedad 100

Por lo tanto reemplazando los valores se obtiene,

Fh

100 6,43% 100

Fh = 1,0643
Determinacin de masa seca en muestra de hojas,

masa sec a

0,4087 1,0643

Masa seca = 0,3840 g Clculo del lmite de deteccin El lmite de deteccin concentracin ms baja de un determinado analito que puede ser detectada en forma concluyente por un determinado mtodo.

LD =
El lmite de cuantificacin Corresponde a la cantidad o concentracin del analito a partir de la cual es confiable realizar determinaciones cuantitativas y se define como:

LQ =
Donde, = desviacin estndar de la respuesta S = La pendiente de la curva de calibracin

Por lo tanto,

LD =

= 0,52 ppm = 1,76 ppm

LQ =

Anlisis El fsforo (P) es uno de los 17 nutrientes esenciales para el crecimiento de las plantas. Sus funciones no pueden ser ejecutadas por ningn otro nutriente y se requiere un adecuado suplemento de P para que la planta crezca y se reproduzca en forma ptima. El P se clasifica como un nutriente primario, razn por la cual es comnmente deficiente en la produccin agrcola y los cultivos lo requieren en cantidades relativamente grandes. La concentracin total de P en los cultivos vara de 0.1 a 0.5 %. El P juega un papel vital virtualmente en todos los procesos que requieren transferencia de energa en la planta. Los fosfatos de alta energa, que son parte de la estructura qumica de la adenosina difosfato (ADF) y de la ATF, son la fuente de energa que empuja una multitud de reacciones qumicas dentro de la planta. La transferencia de los fosfatos de alta energa del ADF y ATF a otras molculas (proceso denominado fosforilacin), desencadena una gran cantidad de procesos esenciales para la planta, se encuentra la fotosntesis, transferencia gentica, transporte de nutrientes. El primer sntoma de falta de fsforo (P) es una planta atrofiada. Las hojas pueden deformarse. Con deficiencia severa, se pueden producir reas necrticas en las hojas, frutos y tallos. Las hojas ms viejas quedan afectadas antes que las jvenes. Por ejemplo se observa en las plantas de maz un color rojizo por deficiencia de fsforo (P). En base a los clculos la concentracin mnima detectable (limite de deteccin) corresponde a 0,52 ppm y la concentracin mnima confiable para realizar el anlisis (limite de cuantificacin) es de 1,76 ppm. La concentracin en hoja seca de fosforo determinada es de 0,178 % P/P o 1.785,85 ppm (mg/kg).

Conclusin Se determin mediante espectrometra de absorcin molecular visible a 470 nm la concentracin de fosforo en una muestra de ficcus, resultando ser 0,178 % P/P o 1.783,85 ppm (mg/kg) y un 6,43 4,76 % de humedad.

Bibliografa http://validacionycalificacion.blogspot.com/2011/05/limite-de-deteccion-y-cuantificacion.html. http://www.drcalderonlabs.com/Servicios/Serv03.htm http://www.ipni.net/publication/ialahp.nsf/0/542916612D123EFE852579A3007A3286/$FILE/Fun ciones%20del%20F%C3%B3sforo.pdf