PRACTICA 8
Determinacin de PCR
Objetivo: Determinar la presencia dela protena C reactiva en una muestra
sangunea y saber interpretar el resultado.
Fundamento del maestro
En el laboratorio de Inmunologa constantemente estars realizando diluciones.
Esto obedece a que, para determinar la cantidad de anticuerpos que tiene un
animal, o la cantidad de antgeno que contiene una vacuna, etc., es necesario
diluir stos hasta el punto donde ya no es posible detectar actividad. A este
proceso se le denomina titulacin, y la ltima dilucin que todava muestra
actividad se le denomina ttulo.
En 1930 se observ que la reaccin que se origina en el suero de pacientes que
sufren de enfermedades inflamatorias precipitan con un extracto de
neumococo no proteico llamado polisacrido C. la protena que causa esta
reaccin fue llamada Protena C reactiva. Como un fenmeno no especfico, el
incremento en la concentracin de PCR se puede presentar en cualquier
proceso inflamatorio agudo (ya sea infeccioso o no infeccioso). El principio del
procedimiento presentado involucra una reaccin inmunolgica entre la PCR
(como antgeno) y el anticuerpo correspondiente adsorbido a las partculas de
ltex.
TECNICA
Mtodo cualitativo
El latex anti-PCR debe estar a temperatura ambiente antes de ser utilizado
1. Hacer una dilucin 1:20 del suero con la solucin diluyente.
2. Depositar 0.05mL de suero en una placa de aglutinacin.
3. En otro espacio de la placa colocar una gota del control positivo y en
otro el control negativo.
4. Aadir a cada uno de los 3 espacios una gota de latex.
5. Mezclar manualmente la placa de reaccin durante 2 minutos y leer los
resultados.
No aglutinacin: negativo.
Aglutinacin: positivo.
Mtodo cuantitativo
1. Colocar en una gradilla 5 tubos y numerarlos.
2. Depositar al tubo 1 0.95mL del diluyente al igual que en los otros tubos
3. Aadir al primer tubo 0.05mL del tubo 1 al tubo 2 y mezclar y as
sucesivamente.
4. Depositar 0.05mL de cada una de las diluciones en reas diferentes de la
placa.
5. Aadir una gota de reactivo a cada una reas de la placa con dilucin.
6. Mezclar manualmente la placa de reaccin durante 2min.
7. Leer los resultados.
Interpretacin: El ttulo del suero problema ser la ltima dilucin presenta con
agregados macroscpicos.
Limitaciones:
No deben utilizarse sueros turbios, hemolisados o contaminados.
No pasarse de los dos minutos para hacer la lectura
CUESTIONARIO
1.
2.
3.
4.
Qu es la protena C reactiva?
Cul es la funcin de la protena C reactiva?
Dnde se produce?
Escribe el nombre de 5 enfermedades que dan positiva para la prueba
de la PCR
Glosario: autoinmune, hemolisis, inflamacin, adsorcin.