Glicemia
enzimática
Método enzimático para la determinación de glucosa
en suero o plasma
SIGNIFICACION CLINICA porciones antedichas. Es importante además, respetar el or-
La patología más común relacionada con el metabolismo de den de agregado de los reactivos y asegurar una perfecta
los hidratos de carbono es la diabetes mellitus. El diagnósti- homogeneización de los mismos, a fin de que el Reactivo B
co precoz y el control de los pacientes diabéticos, tienen por no deteriore el Reactivo de Trabajo.
objeto evitar la cetoacidosis y las complicaciones de los sín-
tomas resultantes de la hiperglicemia, mediante el tratamien- PRECAUCIONES
to adecuado. Los reactivos son para uso diagnóstico "in vitro".
Dado que existen múltiples factores causales de hiper o hipo- El Reactivo B (fenol) es tóxico e irritante. R36/38: irrita los
glicemia, debe considerarse en cada caso la condición fisio- ojos y la piel. R25: tóxico por ingestión. S24/25: evítese el
lógica y/o la patología presente en el paciente en cuestión. contacto con los ojos y la piel. S37/39: usar guantes adecua-
dos y protección para los ojos/la cara.
FUNDAMENTOS DEL METODO Utilizar los reactivos guardando las precauciones habituales
El esquema de reacción es el siguiente: de trabajo en el laboratorio de análisis clínicos.
GOD Todos los reactivos y las muestras deben descartarse de
glucosa + O2 + H2O > ácido glucónico + H2O2 acuerdo a la normativa local vigente.
POD
2 H2O2 + 4-AF + fenol > quinona coloreada + 4 H2O ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE
ALMACENAMIENTO
REACTIVOS PROVISTOS Reactivos Provistos: son estables en refrigerador (2-10oC)
A. Reactivo A: solución de 4-aminofenazona 25 mmol/l en hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja. No mante-
Buffer Tris 0,92 mol/l. ner a temperaturas elevadas durante lapsos prolongados.
B. Reactivo B: solución de fenol 55 mmol/l. Reactivo de Trabajo: en refrigerador (2-10oC) y en frasco
C. Reactivo C: solución de glucosa oxidasa (1000 U/ml) y color caramelo es estable un mes a partir de la fecha de su
peroxidasa (120 U/ml). preparación.
S. Standard: solución de glucosa 1 g/l.
Concentraciones finales INDICIOS DE INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOS
GOD .................................................................... ≥ 3000 U/l REACTIVOS
POD ..................................................................... ≥ 400 U/l Durante el uso, el Reactivo de Trabajo puede desarrollar un
4-AF ...................................................................... 1,25 mM ligero color rosado que no afecta su funcionamiento siempre
Fenol ..................................................................... 2,75 mM que se procese un Blanco con cada lote de determinaciones
pH .......................................................................... 7,4 ± 0,1 y un Standard periódicamente. Desechar cuando las lecturas
del Blanco sean superiores a 0,160 D.O. o las lecturas del
REACTIVOS NO PROVISTOS Standard sean anormalmente bajas.
Agua destilada. Ver LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO.
MUESTRA
INSTRUCCIONES PARA SU USO Suero o plasma
Standard: listo para usar. a) Recolección: se debe obtener suero o plasma de la ma-
Reactivo A: listo para usar. nera usual. Cuando no es posible extraer sangre venosa o en
Reactivo B: listo para usar. Ver PRECAUCIONES. casos de extrema urgencia, la determinación se puede reali-
Reactivo C: homogeneizar por inversión antes de usar, evi- zar en sangre capilar.
tando la formación de espuma. b) Aditivos: en caso de que la muestra a emplear sea plas-
Reactivo de Trabajo: de acuerdo al volumen de trabajo, co- ma, se recomienda el uso de Anticoagulante G de Wiener
locar en una probeta 500 partes de agua destilada, 50 partes lab. para su obtención (el mismo contiene fluoruro como con-
de Reactivo A, 50 partes de Reactivo B y llevar a 1000 partes servador).
con agua destilada. Agregar 3 partes de Reactivo C previa- c) Sustancias interferentes conocidas: los sueros o plasmas
mente homogeneizadas. Mezclar por inversión, sin agitar. Ro- con hemólisis visible o intensa deben ser desproteinizados.
tular y fechar. No se observan interferencias por: bilirrubina hasta 200 mg/l,
Pueden prepararse distintas cantidades respetando las pro- ácido ascórbico hasta 75 mg/l, ácido úrico hasta 200 mg/l,
870560022 / 00 p. 1/9
hemólisis ligera. METODO DE CONTROL DE CALIDAD
Referirse a la bibliografía de Young para los efectos de las Procesar 2 niveles de un material de control de calidad
drogas en el presente método. (Standatrol S-E 2 niveles) con concentraciones conocidas
d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: los de glicemia, con cada determinación.
hematíes y leucocitos son los responsables de la destruc-
ción enzimática de la glucosa sanguínea, siendo máxima a VALORES DE REFERENCIA
37oC, razón por la cual debe centrifugarse la sangre dentro de Se analizaron con Glicemia enzimática, 120 muestras de
las dos horas posteriores a la extracción, hasta obtener un individuos en ayunas, de ambos sexos, con edades com-
sobrenadante límpido y transferir a otro tubo para su conser- prendidas entre 20 y 45 años, provenientes de la ciudad de
vación. En estas condiciones la glucosa es estable 4 horas a Rosario (Argentina), sin síntomas de diabetes o cualquier otra
temperatura ambiente o 24 horas refrigerada (2-10oC). enfermedad aparente. Se encontró que el 95% de los resulta-
En caso de no poder procesarse la muestra de la forma antes dos cubrieron el siguiente rango:
indicada, deberá adicionarse un conservador en el momento Suero o plasma: 0,70 a 1,10 g/l
de la extracción para inhibir la glucólisis. En la literatura (Tietz, N.W.) se menciona el siguiente rango
de referencia:
MATERIAL REQUERIDO (no provisto) Suero o plasma: 0,74 - 1,06 g/l
- Espectrofotómetro o fotocolorímetro.
- Material volumétrico adecuado. Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios
- Frasco de vidrio color caramelo. valores de referencia, teniendo en cuenta sexo, edad hábitos
- Tubos o cubetas espectrofotométricas de caras paralelas. alimenticios y otros factores.
- Baño de agua a 37oC.
- Reloj o timer. CONVERSION DE UNIDADES
Glucosa (g/l) = Glucosa (mg/dl) x 0,01
CONDICIONES DE REACCION Glucosa (mg/dl) x 0,0555 = Glucosa (mmol/l)
- Longitud de onda: 505 nm en espectrofotómetro o en fotoco-
lorímetro con filtro verde (490-530 nm). LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
- Temperatura de reacción: 37oC Ver Sustancias interferentes conocidas en MUESTRA.
- Tiempo de reacción: 10 minutos Los reductores disminuyen la respuesta de color, mientras
- Volumen de muestra: 20 ul que los oxidantes colorean el Reactivo aumentando los Blan-
- Volumen de Reactivo de Trabajo: 2 ml cos. Dichos agentes son frecuentemente encontrados en el
- Volumen final de reacción: 2,02 ml agua destilada empleada para preparar el Reactivo de Traba-
Los volúmenes de Muestra y de Reactivo pueden variarse jo, por lo que se recomienda controlar la calidad de la misma.
proporcionalmente (Ej.: 50 ul de Muestra + 5 ml de Reactivo Los detergentes, metales pesados y cianuros son inhibido-
de Trabajo). res enzimáticos.
PERFORMANCE
PROCEDIMIENTO a) Reproducibilidad: procesando replicados de las mismas
En tres tubos marcados B (Blanco) S (Standard) y D (Des- muestras en 10 días diferentes, se obtuvo lo siguiente:
conocido) colocar: Nivel D.S. C.V.
1,00 g/l ± 0,022 g/l 2,37 %
B S D
2,00 g/l ± 0,030 g/l 1,50 %
Standard - 20 ul - b) Recuperación: agregando cantidades conocidas de glucosa a
Muestra - - 20 ul distintos sueros, se obtuvo una recuperación entre 99 y 101%.
c) Linealidad: la reacción es lineal hasta 4,5 g/l. Para valo-
Reactivo de Trabajo 2 ml 2 ml 2 ml res superiores, diluir 1/2 la solución coloreada final con el
Incubar 10 minutos en baño de agua a 37 C. Luego leer en
o Reactivo de Trabajo y repetir la lectura multiplicando el resul-
espectrofotómetro a 505 nm o en fotocolorímetro con filtro tado final por dos.
verde (490-530 nm) llevando el aparato a cero con el blanco. d) Exactitud: empleando el método de la hexoquinasa como
referencia, se observa que la correlación estadística entre am-
bos métodos es excelente (r= 0,99).
ESTABILIDAD DE LA MEZCLA DE REACCION FINAL e) Sensibilidad: el mínimo límite de detección es 0,0054 g/l y
El color de reacción final es estable 1 hora, por lo que la la sensibilidad analítica es de 0,042 g/l.
absorbancia debe ser leída dentro de este lapso.
PRESENTACION
CALCULO DE LOS RESULTADOS - 1000 ml (Cód. 1400101)
1,00 g/l
glucosa g/l = D x f donde f = BIBLIOGRAFIA
S - Henry, R.J.; Cannon, D.C; Winkelman, J. - Clinical Chemistry,
870560022 / 00 p. 2/9
Principles and Techniques, 2nd. ed., Harper and Row SIMBOLOS
Publishers Inc. N.Y. (1974) p. 1288. Los siguientes símbolos se utilizan en todos los kits de reac-
- Lott, J.A. and Turner, K. - Clin. Chem. 21, 1754-1760 (1975). tivos para diagnóstico de Wiener lab.
- "Tietz textbook of Clinical Chemistry" - Burtis and Ashwood
Editors, 3rd Ed. - Saunders Co., 1999. Este producto cumple con los requerimientos previs-
- Trinder, P. - Ann. Clin. Biochem., 6/24 (1969).
- Young, D.S. - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests", C tos por la Directiva Europea 98/79 CE de productos
sanitarios para el diagnóstico "in vitro"
AACC Press, 4th ed., 2001.
- Ziegenhorn, J.; Newman, U.; Hegen, A. - J. Clin. Chem. Clin. P Representante autorizado en la Comunidad Europea
Biochem. 15/1:13 (1977).
- Caraway - Stand. Meth. Clin. Chem. 4:240 (1963).
V Uso diagnóstico "in vitro"
X Contenido suficiente para <n> ensayos
H Fecha de caducidad
l Límite de temperatura (conservar a)
G No congelar
F Riesgo biológico
Volumen después de la reconstitución
Cont. Contenido
g Número de lote
M Elaborado por:
Xn
Nocivo
Corrosivo / Caústico
Xi
Irritante
i Consultar instrucciones de uso
Calibr. Calibrador
b Control
b Control Positivo
c Control Negativo
h Número de catálogo
M Wiener Laboratorios S.A.I.C.
Riobamba 2944
2000 - Rosario - Argentina
http://www.wiener-lab.com.ar
Dir. Téc.: Viviana E. Cétola
Bioquímica
Producto Autorizado A.N.M.A.T.
Wiener lab.
Disp. Nº: 1357/79-318/00 2000 Rosario - Argentina
870560022 / 00 p. 3/9 UR100806
