LABORATORIO DE
BIOQUÍMICA DE LA NUTRICIÓN
Práctica No. 12
“Determinación colorimétrica de proteínas totales y de
albúmina en suero”.
EQUIPO 1:
Espinoza Mercado Ana Cecilia
Fortunat Pazarán Alondra
Piña de la Rosa Ingrid
Zamudio Hernández Luis
Profesor:
Edgar Pichardo Ontiveros
INTRODUCCIÓN
Las proteínas son compuestos orgánicos macromoleculares, ampliamente
distribuidos en el organismo, esenciales para la vida. Actúan como elementos
estructurales y de transporte y aparecen bajo la forma de enzimas, hormonas,
anticuerpos, factores de coagulación, etc. En el plasma, las proteínas contribuyen a
mantener el volumen del fluido circulante, transportan sustancias relativamente
insolubles y actúan en la inactivación de compuestos tóxicos y en la defensa
contra agentes invasores. La determinación de proteínas totales es útil para el
monitoreo de cambios ocasionados por diversos estados de enfermedad. En
condiciones patológicas como pérdidas renales, desnutrición, infecciones
prolongadas, etc., suelen presentarse hipoproteinemias, mientras que en otras
como mieloma múltiple, endocarditis bacteriana y hemoconcentración de diversos
orígenes, se observan hiperproteinemias.
OBJETIVO
➔ Determinar la concentración de proteínas totales en suero por el método de
Biuret.
➔ Determinar la concentración de albúmina sérica en una muestra.
➔ Conocer la utilidad clínica de la determinación de albúmina en los
pacientes.
GUÍA DE ESTUDIO
1. ¿Cuál es la concentración normal de proteínas totales séricas?
Rango normal de 6.0 a 8.3 gramos por decilitro (g/dL) o 60 a 83 g/L
2. ¿Qué importancia tiene la concentración de albúmina para determinar el
estado de nutrición?
La albúmina es la proteína plasma tica más abundante en un 54% de las proteínas
plasmáticas que circulan en el organismo, es sintetizada exclusivamente por el
hígado en una cantidad de entre 100 - 200 mg/kg/día y tiene una vida media entre
18 y 21 días.
La albúmina es la principal determinante de la presión oncótica plasmática y es
fundamental para el mantenimiento de la misma, es necesaria para la distribución
correcta de los líquidos corporales entre el compartimento intravascular y el
extravascular, localizado entre los tejidos.
La síntesis de albúmina comienza con la asociación del ARN mensajero a las
subunidades de los ribosomas libres en el citoplasma del hepatocito, formándose
una molécula precursora llamada pre-proalbúmina, algunas porciones de esta
molécula son eliminadas con posterioridad en el hepatocito y el producto final es
la albúmina, secretada fuera del hepatocito.
Los factores que regulan la síntesis de la albúmina, son fundamentalmente el
estado nutricional, el equilibrio hormonal y la presión oncótica.
El estado nutricional es el más importante de los factores antes mencionados, ya
que la síntesis de albúmina depende de la existencia de aminoácidos disponibles,
para su producción, sobre todo del triptófano. Cuando la ingesta de proteínas es
limitada, se observa una disminución del índice de degradación de la albúmina.
La albúmina es el indicador de elección en la evaluación de la integridad y la
funcionalidad del compartimiento proteico visceral. Una cifra de albúmina sérica
disminuida, en un individuo con una historia de ingresos dietéticos subóptimos, es
suficiente para establecer el diagnóstico de desnutrición
3. Función de la albúmina y órgano en donde se sintetiza.
- Transporte de una amplia variedad de sustancias como hormonas
esteroides, ácidos grasos, bilirrubina, catecolaminas, que en forma libre son
insolubles en medio acuoso.
- Mantenimiento de la presión coloidosmótica, que estaría relacionado con su
bajo peso molecular y su gran carga neta.
Se sintetiza en el hígado.
4. ¿Qué fuentes de interferencia pueden presentarse en los métodos
colorimétricos en el método de Biuret?
Se basa en la formación de un complejo coloreado entre el Cu2+ y los grupos NH
de los enlaces peptídicos en medio básico. 1Cu2+ se acompleja con 4 NH.
La intensidad de coloración es directamente proporcional a la cantidad de
proteínas (enlaces peptídicos) y la reacción es bastante específica, de manera que
pocas sustancias interfieren.
La sensibilidad del método es muy baja y sólo se recomienda para la
cuantificación de proteínas en preparados muy concentrados
Los componentes no proteicos pueden interferir
Más aún las, modificaciones de las proteínas pueden interferir con la estimación
de su concentración en algunos de los ensayos cuando se comparan con las
proteínas no modificadas
Las concentraciones altas de sales de amonio interfieren con la reacción
Puede ocurrir opalescencia en la solución final si están presentes altas
concentraciones de lípidos o hidratos de carbono
Debe estandarizarse el color mediante cantidades de proteína conocidas
PROCEDIMIENTO
RESULTADOS
TUBO Concentración proteínas Absorbancia 550
totales (g/dl)
1-2 Blanco 0.203
3-4 2 0.221
5-6 4 0.282
7-8 6 0.314
9-10 8 0.400
11-12 10 0.427
13-14 suero 0.381
Tubos Stock Solución Suero (mcL) Reactivo de Abs 630
albúmina salina 0.9% color (mL)
(mcL) (mcL)
Control - 100 - 5 0.45
3 12.5 87.5 - 5 0.371
5 25 75 - 5 0.430
7 50 50 - 5 0.418
9 100 - 100 5 0.519
Muestra 1 - - 100 5 0.471
CONCLUSIÓN
Las proteínas se necesitan para la mayoría de las funciones normales del cuerpo,
como el mantenimiento, crecimiento, reproducción. Durante el desarrollo de la
práctica a través de la separación de las proteínas por medio de la curva de
calibración se pudo observar que se obtuvieron valores anormales con respecto a
los estándares, esto se pudo presentar por algún error experimental o alguna falla
durante la práctica.
Bibliografía
http://sgpwe.izt.uam.mx/files/users/uami/acym/27_METODOS_PARA_LA_CUANTIFICACION_DE_PROTEINAS.pdf
https://www.medigraphic.com/pdfs/actamedica/acm-2016/acm162j.pdf
