Microscopia
El microscopio TIPOS DE MICROSCOPIOS
Un microscopio es un instrumento que amplifica una imagen y Existen diversos tipos de microscopios que fueron utilizados a
permite ver con más detalle de lo que se puede observar a través de la historia, y también existen actualmente microscopios
simple vista. La función del microscopio es ampliar la imagen a diseñados con un propósito en especial, algunos de estos son:
un nivel en el que la retina pueda observar la información que
de otro modo, estaría por debajo de su limite de resolución, la Microscopio electrónico de barrido
cual no depende solo del sistema óptico sino también de la Microscopio óptico
Microscopio simple
onda de luz y otros factores como el espesor de la muestra, la
Microscopio compuesto
calidad de la fijación e intensidad de la tensión, la máxima Microscopio de luz ultravioleta
resolución de un microscopio es alrededor de 0,2 µm. Microscopio de fluorescencia
Microscopio petrográfico
Microscopio en campo oscuro
Microscopio de contraste de fase
Microscopio de luz polarizada
1 Microscopio confocal
Microscopio electrónico
Microscopio electrónico de transmisión
Microscopio de iones en campo
Microscopio de sonda de barrido
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Microscopio de efecto túnel
Microscopio de fuerza atómica
Microscopio virtual
3
12 1. Ocular
2. Tornillo macrométrico
5
3. Tubo óptico
4
4. Columna
6
5. Revolver portaobjetivos
6. Objetivos
7
8 7. Pinzas
9 8. Platina
9. Diafragma
10. Espejo o lampara iluminadora
10 11. Pie
12. Tornillo micrométrico
11
El microscopio de campo
El microscopio de campo es el más utilizado por los
LENTE ocular: Por medio de este se puede examinar
estudiantes y principalmente se compone de:
directamente la imagen formada por la lente de objetivo.
FUENTE LUMINOSA: Para la iluminación de la muestra. Para que una muestra pueda ser examinada con este
LENTE CONDENSADOR: Para enfocar el haz de luz a la microscopio, debe ser suficientemente fina para ser
altura de la muestra.
atravesada por la luz, sin embargo el sistema de este
PLATINA: Sobre la que se coloca el porta objetos. microscopio no produce un grado útil de contraste en la
LENTE OBJETIVO: Para recoger la luz que ha atravesado muestra no teñida, por ende se utilizan los diferentes métodos
la muestra.
de tinción.
Fuente de electrones
Fuente luminosa
(Cátodo)
(lampara)
Ánodo
Lente condensador
Lente condensador
Solenoide de barrido
Haz de barrido
Muestra
Detector de
Lente objetivo
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electrones
retrodispersos
Muestra
Lente de proyección
vació
Lente ocular
Imagen en la pantalla
Imagen en la de visión
retina del ojo
Detector de
electrones con
MICROSCOPIO ÓPTICO cámara de CCD Imagen de
Imagen de MET MEB
MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE
TRANSMISIÓN (MET) BARRIDO (MEB)
Diagramas comparativos de la formación de la imagen en diferentes tipos de microscopios
Examen de un preparado histologico con el microscopio óptico.
Los órganos son tridimensionales, mientras que los cortes Ejemplo de cortes de una naranja y un corpúsculo renal:
histologicos tan solo poseen dos, cada muestra de tejido debe Se ilustran cortes en diferentes planos a través de una naranja,
estar cortada en rebanadas muy finas y es de esta manera que hay que tener en cuenta que cada superficie de corte de la naranja
la muestra tridimensional del tejido se obtienen cortes exhibe diversos tamaños y patrones de superficie según la
bidimensionales. orientación del corte, por ende al examinar
Las lineas de puntos dibujadas sobre la
naranja entera indican el plano de corte
que se correlaciona con cada superficie
seccionada. De igual manera los diferentes
cortes en el a través del corpúsculo el cual
también es una estructura esférica, exhibe
diferencias en su aspecto siendo estos el
reflejo del plano de corte.
un corte dado es importante ser capaz de
reconstruir mentalmente la organización
de su estructura y de sus componentes,
también se muestra un corpúsculo renal
como aparecería en diferentes planos de
corte.
@MEDICAAPUNTES Ejemplo de cortes de una naranja y un
corpúsculo renal
Uso correcto del microscopio óptico incidente es útil para objetivos como el metal, los cuales no
transmiten luz.
Es necesario que los trayectos de las haces de iluminación y de Esta técnica es una de las claves de la buena microscopia y
observación estén centrados y tengan un ajuste correcto esta incorporada en el diseño de prácticamente todos los
para que de esta forma tengan un ajuste sustancial al microscopios modernos se deben seguir los siguientes pasos de
reconocimiento de detalles de la muestra. ajuste para conseguir una buena iluminación Kohler.
ILUMINACIÓN KOHLER: Se enfoca la muestra
La iluminación Köhler fue la primera descrita por August se cierra el diafragma de campo.
Köhler en 1893, y aun es la aceptada como el método de Se enfoca el condensador moviendolo hacia arriba o
iluminación en los microscopios modernos. La iluminación hacia abajo hasta que el contorno de su diafragma de
Köhler elimina la iluminación dispareja en el campo de campo aparezca bien nítido.
observación para que todas las partes de la fuente de luz
Se centra el diafragma de campo hasta que el haz
contribuyan a la iluminación del espécimen. Existen dos tipos
luminosos cubra todo el campo observado.
de iluminación Köhler, un método en el cual la luz es
transmitida a través del espécimen y otro método cuando la Se retira el ocular y se observa la pupila de salida del
luz es reflejada desde el espécimen. La iluminación Köhler objetivo.
transmitida es usada para especimenes transparentes o El resultado de este ajuste es un mejor equilibrio entre la
semitransparentes, mientras que la iluminación Köhler resolución y el contraste.
Ocular
Cámara tubular Diagrama de un microscopio óptico típico
opcional
Tubo
Objetivo
Lente condensador auxiliar
Platina
Diafragma del condensador
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Condensador
Ajuste de la platina
Ajuste de
Diafragma de campo foco
Fuente luminosa
Otros sistemas ópticos
Además del microscopio óptico, se aplican otros sistemas
Microscopio de Interferencia:
óptico en algunos casos para aumentar el contraste sin teñir Permite la cuantificación de la masa tisular.
una muestra, mientras que otros están diseñados para
visualizar estructuras mediante el uso de técnicas especificas Microscopio de Interferencia diferencial:
como inmunofluorescencia. Presenta una utilidad especial para valorar las propiedades de las
superficies de las células y otras muestras biológicas.
Microscopio de contraste de fase:
Permite el examen de células y tejidos no teñidos y es Microscopio de campo oscuro:
especialmente útil para estudiar células vivas; aprovecha las La lente objetivo no capta luz directa proveniente de la fuente
pequeñas diferencias en el indice e refracción que hay en luminosa; solo la luz refractada por la estructura de la muestra
diferentes partes de la muestra de células o tejidos. Las partes penetra en el objetivo. Este microscopio esta equipado con un
oscuras de la imagen corresponden a las regiones densas de la condensador especial que ilumina el preparado con mucha
muestra; las claras corresponden a las menos densas. intensidad y de forma oblicua. En las imágenes de campo oscuro
pueden detectarse partículas individuales más pequeñas debido al
mayor contraste obtenido. Es útil en el examen de
Microscopio de polarización
autorradiografia, en que los gránulos de plata revelados aparecen
blancos en un fondo oscuro. Este microscopio es una simple modificación de un microscopio
óptico de campo claro en el cual un filtro de polarización llamado
Microscopio de fluorescencia: polarizador se coloca entre la fuente de luz y la muestra y un
Aprovecho la capacidad de ciertas moléculas de fluorescer bajo la segundo filtro llamado analizador que se instala entre el objetivo y
luz ultravioleta; una molécula que fluoresce emite luz de longitud el observador los cuales pueden rotarse y la diferencia entre sus
de onda dentro del espectro visible cuando se expone a una fuente grados de rotación se utiliza para determinar el grado por el cual
UV. Este microscopio se utiliza para la detección molecular con afecta el haz de luz polarizador.
fluerescencia natural como la vitamina A y algunos
neurotransmisores, en otros casos se usa para examinar la BIBLIOGRAFÍA:
fluorescencia secundaria como en la detección de antígenos o Atlas de histología de Ross
anticuerpos de los procedimientos de inmunocitoquimica. Otra
técnica es inyectar moléculas fluorescentes especificas en un
animal o directamente en las células y se utilizan como
marcadores. Estos métodos han sido útiles en el estudio de
uniones intercelulares, en la localización de trayectos de fibras
nerviosas en neurobiología y en la detección de marcadores
fluorescentes del crecimiento de los tejidos mineralizados.
Microscopio ultravioleta:
Utiliza lentes de cuarzo con una fuente de luz ultravioleta, la
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imagen de este microscopio depende de la absorción de la luz UV
por las moléculas en la muestra, este equipo puede llegar a una
resolución de 0,1 µm. Los resultados, se registran de forma
fotográfica ya que la muestra no se puede inspeccionar
directamente a través de la lente ocular ya que la luz UV no es
visible y lesiona el ojo. Este microscopio es útil para la detección
de ácidos nucleicos y proteínas que contienen ciertos
aminoácidos.
Microscopio confocal de barrido:
Este microscopio combina componentes de un microscopio óptico
de campo claro con un sistema de barrido para diseccionar
muestras opticamente; permite la visualización de una muestra
biológica en tres dimensiones, Las dos lentes de este microscopio
están alineadas de tal manera que enfoca la luz que proviene del
punto focal de un lente hasta el punto focal del otro. La abertura
del detector solo permite que pase la luz "en foco" hacia el
dispositivo foto multiplicador mientras que la luz "fuera de foco"
tiene bloqueada la luz al detector. Este sistema tiene la capacidad
de resolución de 0,2 a 0,5 µm con una claridad excepcional de un
corte fino de una muestra simple por rechazar la luz fuera de
foco. Al usar solo la profundidad estrecha de la imagen que tiene
el foco, permite crear imágenes múltiples de diferentes
profundidades dentro de la muestra, permitiendo diseccionar capa
por capa todo el espesor de la muestra.
