Biología de los Microorganismos

Programa Licenciatura Ciencias Naturales y Educación ambiental

BIODEGRADACIÓN DE PLÁSTICOS

Marilyn Vannessa Barreto Vargas, código: 201421299, Jenny Paola Forero Mateus, código:
201220423, Xiomara Alejandra Maldonado Sora, código: 201720836, Mónica Lucia Murcia
Sepúlveda, código: 201620515

Contenido
1.1 ¿Qué son los plásticos?.......................................................................................................2
1.2 Tipos de plásticos............................................................................................................... 2
1.3 ¿Qué es la biodegradación de plásticos?..............................................................................3
1.3.1 Biodegradación aeróbica..............................................................................................4
1.3.2 Biodegradación anaeróbica..........................................................................................4
1.3.3 Mecanismo de biodegradación.....................................................................................4
2. Antecedentes.................................................................................................................... 4
2.1 Artículo 1. Microbial and Enzymatic Degradation of Synthetic Plastics...............................4
2.1.1 Microorganismos degradadores.......................................................................................6
2.1.2 Conclusiones................................................................................................................... 8
2.2 Artículo 2. Preliminary study of plastic biodegradation by marine bacteria.........................8
2.2.1 Enriquecimiento selectivo de las poblaciones microbianas marinas...................................8
2.2.2 Resultados...................................................................................................................... 8
2.2.3 Análisis espectroscópico de PETE mediante FTIR............................................................9
2.2.4 Caracterización preliminar de cepas bacterianas utilizadas en el estudio..........................9
2.2.5 Conclusiones.................................................................................................................10
2.3 Artículo 3: Biodegradación de plástico con larvas del coleóptero tenebrio molitor como un
aporte interdisciplinar a la biotecnología ambiental................................................................11
2.3.1 Metodología.................................................................................................................. 11
2.3.2Resultados..................................................................................................................... 12
2.3.2.1 Caracterización Biológica sobre el crecimiento y desarrollo del coleóptero Tenebrio
molitor.............................................................................................................................. 12
2.3.2.2 Bioensayo de biodegradación de plástico con larvas de Tenebrio milito....................13
2.3.3 Conclusiones................................................................................................................. 14
2.4 Artículo 4. Biodegradación de politenos por bacterias aisladas del suelo............................15
2.4.1 Resultados.................................................................................................................... 15
2.4.2 Detección de microorganismos degradantes del polietileno..........................................15
2.4.3 Degradación del polietileno pretratado.......................................................................16
2.4.4 Conclusión.................................................................................................................... 16
3. REFERENCIAS............................................................................................................16

1. Introducción
Los plásticos de carácter sintético han sido considerados a lo largo de la historia como fundamentales
para el estilo de vida que llevamos hasta en la actualidad, pero esto ha sido considerado como una
gran preocupación para el medio ambiente y la salud humana, puesto que estos producen una gran
acumulación y por sus componentes, una difícil degradación. Los petropolímeros que son netamente
derivados del petróleo; tales como el polietileno (PE), el tereftalato de polietileno (PET), el
poliuretano (PU), el poliestireno (PS), el polipropileno (PP) y el cloruro de polivinilo (PVC), son en
extremo recalcitrantes a las vías naturales de biodegradación. al observar la necesidad en el mundo de
disminuir el impacto producido por los plásticos se ha pensado en buscar la manera en la cual algunos
microorganismos que presentan la capacidad para degradar los petropolímeros en diferentes
condiciones como in vitro, contribuyan en estos procesos con el fin de contribuir en la disminución de
la contaminación y de las situaciones que se dan alrededor de esta problemática.
En algunos casos, la velocidad de biodegradación de los polímeros depende de diferentes factores,
como pueden ser las estructuras químicas, los pesos moleculares, los grados de cristalinidad, etc. Los
polímeros son conocidos como grandes moléculas que poseen tanto cristales regulares (región
cristalina), como grupos irregulares (región amorfa); esta última proporciona a los polímeros
flexibilidad. Ahora bien, los polímeros altamente cristalinos, como en el caso del polietileno que
presenta una cristalinidad del 95%, son muy rígidos y poseen poca capacidad para resistir impactos.
Por su parte, los plásticos basados en el PET, poseen un alto grado de cristalinidad del 30 al 50%, la
cual es una de las primeras razones de su baja tasa de degradación microbiana, aunque se prevé que
tarda un poco más de 50 años en ser degradado totalmente de manera natural, y cientos de años si este
es desechado en el océano, debido a su menor temperatura y la disponibilidad de oxígeno.

1.1 ¿Qué son los plásticos?

Los plásticos son materiales que contienen como ingrediente esencial una o más sustancias
poliméricas de alto peso molecular. A ciertas temperaturas se vuelven fluidos, lo que permite
procesarlos y transformarlos hasta alcanzar un estado final sólido. El plástico es un polímero sintético.
Consiste en carbono, hidrógeno, silicio, oxígeno, cloruro y nitrógeno. Se deriva de diferentes fuentes
como el petróleo, el carbón y el gas natural. Los plásticos se utilizan ampliamente debido a su
estabilidad y durabilidad. Son de diferentes tipos como polietileno (PE), poli (tereftalato de etileno)
(PET), nylon, polipropileno (PP), poliestireno (PS), cloruro de polivinilo (PVC) y poliuretano (PUR)
(Fatimah, 2017).

1.2 Tipos de plásticos

Los residuos plásticos han llegado a invadir diversos lugares en los que han causado múltiples
afectaciones, por ende, se hace importante comprender en términos generales los plásticos. Por tanto,
en la (Tabla N°1) se pretende explicar brevemente los códigos y características de los plásticos, donde
se evidencian los siete tipos de plásticos que se han catalogado a nivel mundial, con el propósito de
facilitar la actividad del reciclaje.

Tabla 1: Tipos de plásticos catalogados a nivel mundial (Alvarez, D; Botache,L.2020)

 CÓDIGO DE PROPIEDADES APLICACIONES
RECICLADO

1. PETE Polietileno tereftalato: (PET, PETE), Es frecuente encontrarlo en botellas de

también conocido como poliéster. Es un refresco especialmente agua, envase de
tipo de plástico transparente, tiene productos perecederos como mantequilla,
buenas propiedades como barrera al gas salsas y comida precocinada para horno.
y la humedad, dureza y resistencia al
color.

2. HDPE Polietileno de alta densidad: Tiene Se encuentra en botellas de leche, zumo,

resistencia al ataque químico y a la cosméticos, detergentes y bolsas de
humedad, contempla permeabilidad al envase.
gas y presenta facilidad al ser
procesado.

3. PVC Cloruro de polivinilo: PVC Presenta El rígido se usa en botellas y todo tipo de
una excelente resistencia al ataque envase transparente, tuberías, carpintería y
químico, exposición solar, calor, buen construcción. El flexible se usa en bolsas
aislante, y gran resistencia mecánica. de sangre y accesorios de oficina, tubos de
También es favorable por su aplicación en medicina, recubrimiento de
transparencia y facilidad de mezclado cables, pavimentos sintéticos, pinturas y
con otros componentes, además lo hay recubrimientos. En general, aplicaciones
flexible y rígido en función de las que requieran de buenas propiedades
aplicaciones a la que se destina. aislantes y resistencia al calor.

4. LDPE Polietileno de baja densidad: Es Tapas flexibles para envase, todo tipo de
resistente, su transparencia es media, bolsas para comida, y fundas de ropa.
presenta flexibilidad, barrera a la
humedad, facilidad de procesado y
sellado.

5. PP Polipropileno: Presenta buena Tiene aplicaciones tanto flexibles como

resistencia química, alto punto de fusión rígidas que requieren resistencia al calor,
y por tanto resistencia al calor, alta como componentes para automoción, y
dureza, y buena barrera a la humedad. contenedores de líquidos calientes.

6. PS Poliestireno: Este tipo de plástico En sus aplicaciones se puede encontrar en

puede ser rígido o expandido, presenta expandido: en envase de protección,
alta transparencia, además tiene bandejas, vasos desechables, y aislante en
propiedades aislantes y facilidad del construcción. En rígido: se puede
procesado. También tiene un punto de encontrar en tapas y contenedores como
fusión relativamente bajo y frágil. cajas de CD, vajilla y cubertería de
desechables, en envases de yogur, y
huevos.

7. OTROS Utilizados para materiales distintos a los Se puede presentar en todo tipo de
anteriores, suelen ser mezclas complejas aplicaciones.
de difícil recuperación.

1.3 ¿Qué es la biodegradación de plásticos?

La biodegradación se define como cualquier cambio físico o químico en un material causado por la
actividad biológica. Microorganismos como bacterias, hongos y actinomicetos están involucrados en
la degradación de plásticos tanto naturales como sintéticos. Los plásticos generalmente se
biodegradan aeróbicamente en la naturaleza, anaeróbicamente en sedimentos y vertederos y, en parte,
aeróbicamente en compost y suelo. El dióxido de carbono y el agua se producen durante la
biodegradación aeróbica, mientras que la biodegradación anaeróbica produce dióxido de carbono,
agua y metano (Fatimah, 2017).

1.3.1 Biodegradación aeróbica

También conocida como respiración aeróbica, la biodegradación aeróbica es una parte importante de
la atenuación natural de los contaminantes en muchos sitios de desechos peligrosos. Los microbios
aeróbicos utilizan oxígeno como aceptor de electrones y descomponen los productos químicos
orgánicos en compuestos orgánicos más pequeños.

C plástico + O 2 → CO 2 + H 2 O + C residual + Biomasa

1.3.2 Biodegradación anaeróbica

La biodegradación anaeróbica es la descomposición de contaminantes orgánicos por microorganismos
cuando no hay oxígeno presente. También es un componente importante de la atenuación natural de
contaminantes en sitios de desechos peligrosos. Algunas bacterias anaeróbicas usan nitrato, sulfato,
hierro, manganeso y dióxido de carbono como sus aceptores de electrones, para descomponer las
sustancias químicas orgánicas en compuestos más pequeños.

C plástico → CH 4 + CO 2 + H 2 O + C residual + Biomasa

Los microorganismos son incapaces de transportar los polímeros directamente a través de sus
membranas celulares externas, hacia las células donde tienen lugar la mayoría de los procesos
bioquímicos, ya que las moléculas del polímero son largas y no solubles en agua. Para utilizar dichos
materiales como fuente de carbono y energía, los microbios desarrollaron una estrategia en la que
excretan enzimas extracelulares que despolimerizan los polímeros fuera de las células (Fatimah,
2017).

1.3.3 Mecanismo de biodegradación

La biodegradación de polímeros implica los siguientes pasos:
1. Adhesión del microorganismo a la superficie del polímero.
2. Crecimiento del microorganismo, utilizando el polímero como fuente de carbono.
3. Última degradación del polímero.

Los microorganismos pueden adherirse a la superficie de un polímero, siempre que este último sea
hidrófilo. Una vez que el organismo se adhiere a la superficie, puede crecer utilizando el polímero
como fuente de carbono. En la etapa de degradación primaria, las enzimas extracelulares secretadas
por el organismo provocan la escisión de la cadena principal, dando lugar a la formación de
fragmentos de bajo peso molecular, como oligómeros, dímeros o monómeros. Estos compuestos de
bajo peso molecular son utilizados además por los microbios como fuentes de carbono y energía. Los
oligómeros pequeños también pueden difundirse en el organismo y asimilarse en su entorno interno
(Fatimah, 2017)

2. Antecedentes
2.1 Artículo 1. Microbial and Enzymatic Degradation of Synthetic Plastics
Los plásticos derivados del petróleo tienen muchas características deseables. Son ligeros y tienen
propiedades químicas y físicas muy estables, lo que los hace muy duraderos. Los métodos de
producción están bien establecidos y tienen una gran capacidad, lo que se traduce en un coste muy
bajo. En consecuencia, se han hecho omnipresentes en la economía mundial (Hidalgo, et al.,2012).
Sin embargo, la acumulación de residuos de petroplásticos en el medio ambiente es ahora un
importante problema mundial porque estos materiales son recalcitrantes a los procesos naturales de
biodegradación. Como resultado de su acumulación masiva en los sistemas de residuos municipales,
las partículas de plástico de tamaño micro y nano son ahora omnipresentes en los ecosistemas
terrestres y acuáticos (Álvarez, et al.,2019). En 2016 se fabricaron unos 335 millones de toneladas de
plásticos en todo el mundo (Plastics Europe,2017). Los plásticos sintéticos como el tereftalato de
polietileno (PET), el polietileno (PE), el poliuretano (PUR), el poliestireno (PS), el polipropileno (PP)
y el cloruro de polivinilo (PVC) se han utilizado ampliamente en una amplia gama de aplicaciones
industriales y domésticas (Shah et al.,2008).
La contaminación ambiental por residuos plásticos se registró por primera vez en la década de 1970
(Carpenter y Smith,1972). La creciente cantidad de residuos plásticos se ha convertido en una
preocupación mundial. A pesar de los crecientes esfuerzos por reducir los residuos de plástico
mediante la recogida selectiva y el reciclaje, una cantidad considerable de residuos sólidos de plástico
sigue depositándose en los vertederos. De toda la producción de plástico en 2017 (8.300 millones de
toneladas), tras el reciclaje, la incineración (recuperación de energía) de los residuos y el cálculo de
los plásticos en uso en el ámbito doméstico; alrededor del 60% han quedado en el medio ambiente,
incluyendo el 95% en los vertederos y el 5% en los océanos y otras zonas terrestres. Los residuos
plásticos en el medio ambiente se degradan en la naturaleza por despolimerización foto, bio y termo-
oxidativa, así como por fricción (Browne et al., 2011).
Aunque la biodegradación de estos plásticos es factible en el medio natural, puede llevar largos
periodos de tiempo: de 50 a más de 100 años (Tabla 1).

TABLE 1 | Selected properties of major synthetic thermoplastic polymers (Ojeda,2013).

Polymer Density (g/L) Crystallinity (%) Life span (years)
PET 1.35 0–50 450
LDPE 0.91–0.93 50 10–600
HDPE 0.94–0.97 70 >600
PS 1.03–1.09 0 50–80
PP 0.90–0.91 50 10–600
PVC 1.35–1.45 0 50–150
PET, Polyethylene terephthalate; LDPE, Low density polyethylene; HDPE, High density
polyethylene; PS, Polystyrene; PP, Polypropylene; PVC, Polyvinyl chloride.

Basándose en las vías de degradación, estos plásticos sintéticos se han dividido en dos grupos, los
plásticos con una columna vertebral de carbono y los plásticos con heteroátomos en la cadena
principal. Los plásticos PE, PS, PP y PVC tienen una columna vertebral formada únicamente por
átomos de carbono (Figura 1). El PET y el PU tienen heteroátomos en la cadena principal (Figura 1).
Se han producido varios poliésteres alifáticos biodegradables, como el polihidroxialcanoato (PHA) y
el ácido poliláctico (PLA), que pueden utilizarse como alternativas a algunos petroplásticos (Tokiwa
et al.,2009; Bhatia et al.,2019 a,b). Los polihidroxialcanoatos (PHAs) han surgido como una opción
sostenible debido a su putativa alta biodegradabilidad en diferentes ambientes, biocompatibilidad,
diversidad química, su fabricación a partir de recursos de carbono renovables, y la liberación de
productos no contaminantes y no tóxicos después de la degradación (Bhatia et al.,2019a,b).
La degradación de los plásticos por medios microbianos y/o enzimáticos (Figura 2) es una estrategia
prometedora para despolimerizar los petroplásticos de desecho en monómeros para su reciclaje, o
mineralizarlos en dióxido de carbono, agua y nueva biomasa, con la producción concomitante de
bioproductos de mayor valor (Grima et al.,2000; Montazer et al.,2019, 2020a). Biodegradación de los
plásticos implica la excreción de enzimas extracelulares por parte del microorganismo, la fijación de
la enzima a la superficie del plástico, la hidrólisis a intermediarios poliméricos cortos, que finalmente
son asimilados por las células microbianas como fuente de carbono para liberar CO2. A pesar de que
estos plásticos representan sustancias químicas no naturales, en los últimos años se han identificado
varios microorganismos capaces de metabolizar estos polímeros. Se sabe que más de 90
microorganismos, incluyendo bacterias y hongos, degradan los plásticos
derivados del petróleo (Jumaah,2017) sobre todo en condiciones in vitro.

Figura 1. Structuresof major commercial synthetic polymers. Figura 2. The general

mechanism for biological degradation of plastics under aerobic conditions.

2.1.1 Microorganismos degradadores

Polietileno: El PE está compuesto por una cadena lineal de carbonos unidos por enlaces de hidrógeno
(Figura 1). El PE suele tener una estructura semicristalina y es extremadamente resistente a la
biodegradación. En función de los distintos procesos de fabricación y, por consiguiente, de las
distintas disposiciones de las cadenas lineales, los polímeros de PE pueden tener distintas densidades
y estructuras tridimensionales y físicas, polietileno de bajo peso molecular (LMWPE), polietileno
lineal de baja densidad polietileno (LLDPE), polietileno de baja densidad (LDPE) y polietileno de alta
densidad (HDPE).
La biodegradación de los residuos plásticos de PE por aislados microbianos ha sido un tema
importante de investigación (Nowak et al.,2011; Kyaw et al.,2012; Gajendiran et al.,2016;Sen y
Raut,2016).
Se han aislado microorganismos capaces de hidrolizar el PE en el suelo, el agua de mar, el compost y
los lodos activados (Montazer et al.,2020 a). Se han encontrado bacterias en el intestino del gusano de
la cera mayor, Galleria melonella, capaces de hidrolizar polietileno (PE) (Yang et al.,2014; Bombelli
et al.,2017; Cassone et al., 2020).
Mecanismo de degradación del PE
La biodegradación aeróbica del PE por parte de las bacterias se produce en cuatro etapas: (1)
Biodeterioro, que se define como la formación de grupos carbonilo por la acción de enzimas
oxidativas liberadas por los microorganismos o inducidas por agentes exteriores, como la exposición a
la luz solar (ultravioleta). La oxidación posterior reduce el número de grupos carbonilos y genera
ácidos carboxílicos;
(2) Biofragmentación, que implica la hidrólisis y/o fragmentación de las cadenas de carbono del
polímero y la liberación de productos intermedios, mediada por enzimas secretadas por los
microorganismos; (3) Bioasimilación, por la que los pequeños fragmentos de hidrocarburos liberados
por la biofragmentación son tomados y metabolizados por bacterias u hongos; y (4) Mineralización,
transferencia de los productos de hidrólisis dentro de la pared celular, conversión intracelular de los
productos de hidrólisis en biomasa microbiana con la consiguiente liberación de dióxido de carbono y
agua excretada fuera de la célula. Aunque varios grupos han informado sobre el biodeterioro y la
biofragmentación (Albertsson y Karlsson,1990; Ammala et al.,2011), los estudios sobre la
bioasimilación y la mineralización completa del PE son muy limitados (Yang et al., 2014;Sen y
Raut,2016;Montazer et al.,2019).
Poliestireno: El poliestireno (PS) ha sido el plástico más abundante producido en todo el mundo y
fabricado en gran medida en materiales de embalaje para alimentos y vajilla desechable (Plastics
Europe,2017). Al igual que otros plásticos sintéticos, el PS se utiliza ampliamente por sus buenas
propiedades mecánicas y su coste relativamente bajo. El PS se utiliza habitualmente en espumas de
embalaje, envases de alimentos, materiales de construcción (aislamiento), cajas de casetes, discos
compactos, vasos desechables, platos y cubiertos. En 2013 se produjeron aproximadamente 21
millones de toneladas de PS en todo el mundo (Yang et al.,2015a,b). El PS se ha agrupado en cuatro
tipos de productos basados en sus diferentes aplicaciones, poliestireno de uso general
(GPPS)/poliestireno orientado (OPS), poliestireno de alto impacto (HIPS), espuma de PS y espuma de
poliestireno expandido (EPS) (Ho et al.,2018). Los PS son polímeros extremadamente estables con
un alto peso molecular y un fuerte carácter hidrofóbico, lo que hace que estos polímeros sean
altamente resistentes a la biodegradación (Albertsson y Karlsson, 1993; Ho et al.,2018). La columna
vertebral de carbono-carbono en el PS es altamente resistente a la escisión enzimática por el proceso
de oxidación-reducción (Goldman,2010).
Se ha demostrado la biodegradación del PS por varios microbios y/o enzimas microbianas (Tabla 2).
Los materiales de PS utilizados en estos estudios van desde el PS puro o el PS modificado hasta el PS
mezclado con otros polímeros. Una cepa pura de P. aeruginosa degradó el PS modificado (Shimpi et
al.,2012), y se investigó la especie Curvularia para la degradación del PS atáctico, sin ningún
pretratamiento (Motta et al.,2009). Los PS modificados utilizados han sido compuestos de PS/PLA, y
mezclas de PS/PLA/montorillonita modificada orgánicamente (OMMT) (minerales filosilicatos
blandos que suelen formarse en cristales microscópicos, formando arcillas) (Shimpi et al.,2012). Se ha
demostrado que las cepas puras del actinomiceto Rhodococcus ruber degradan tres formas de PS, las
escamas de PS estándar puro, el polvo de PS y las placas de microtitulación de 96 pocillos ELISA
producidas a partir de PS puro (Mor y Sivan,2008; Santo et al.,2013).
Polipropileno: El polipropileno (PP), expresado como CnH2n, es también el polímero de
hidrocarburo lineal más utilizado entre los polímeros sintéticos. El PP tiene un grupo metilo en lugar
de uno de los hidrógenos presentes en el PE en cada dos carbonos, lo que da lugar a la presencia de de
tres formas estereoisoméricas: atáctico, isotáctico y sindiotáctico (Baker y Mead, 2002). Este
polímero fue sintetizado por primera vez por J. Paul Hogan y Robert L. Banks en 1951 con propileno
como monómero (Stinson,1987). También se han utilizado catalizadores de metaloceno para su
síntesis. Sus propiedades son similares a las del polietileno, pero es ligeramente más duro y resistente
al calor y tiene una gran resistencia química El polipropileno es el segundo plástico básico más
producido (después del polietileno) y se utiliza a menudo en el envasado y el etiquetado. Estos
plásticos tienen diversas aplicaciones, como el envasado de alimentos, los textiles, los equipos de
laboratorio y los componentes de automoción.
Se han publicado muy pocos estudios sobre la biodegradación del PP (Tabla 2). Se ha informado de
que las bacterias de los géneros Pseudomonas y Vibrio, y el hongo Aspergillus niger degradan el PP
(Cacciari et al.,1993). La mayoría de los estudios se han llevado a cabo utilizando PP pretratado. Las
técnicas de pretratamiento incluyen la irradiación γ (Iwamoto y Tokiwa,1994), la irradiación UV
(Huang et al.,2005; Kaczmarek et al.,2005; Sameh et al.,2006), o el tratamiento térmico (Ramis et
al.,2004) y han demostrado que reducen la hidrofobicidad del polímero o introducen grupos como
C=O o -OH, que son más susceptibles a la degradación. Se ha observado la formación de nuevos
grupos (carbonilo e hidroxilo) y una disminución de la viscosidad durante el proceso de degradación
(Iwamoto y Tokiwa,1994; Sameh et al.,2006).
Tabla 2. Microorganisms capable of recalcitrant petro-plastics degradation.
2.1.2 Conclusiones
La biodegradación de los polímeros derivados del petróleo ha sido un área innovadora de
investigación enfocada a solucionar la contaminación por plásticos en el medio ambiente. En esta
revisión se han analizado los microorganismos y las enzimas de los que se ha informado para
biodegradar estos polímeros sintéticos. Se ha observado que muchas cepas de Pseudomonas y
Bacillus degradan compuestos complejos y recalcitrantes, como los hidrocarburos poliaromáticos, y
se han asociado a la degradación parcial de una amplia gama de petroplásticos, como el PE, el PS, el
PP, el PVC, el PET y el PU basado en ésteres. También se ha descubierto que los microbios
intestinales de los insectos despolimerizan los polímeros de PE, PS y PVC. Se han identificado y
estudiado intensamente las enzimas específicamente asociadas a la despolimerización del PET y del
PU basado en ésteres, mientras que aún no se han identificado y caracterizado las enzimas que
despolimerizan eficazmente el PE, el PP, el PS y el PVC.

2.2 Artículo 2. Preliminary study of plastic biodegradation by marine bacteria.

Los plásticos son compuestos xenobióticos muy contaminantes en ambientes acuáticos, cuya
resistencia al ataque microbiano y a otros factores ambientales hace que sean extremadamente
persistentes. El objetivo de este trabajo, es el estudio de microorganismos potencialmente
degradadores de polímeros plásticos, en muestras de agua procedentes del puerto de Santa Cruz de
Tenerife. Para ello, se ha utilizado una técnica de enriquecimiento en medio de sales marinas,
suplementado con plástico granulado y en láminas, y extracto de levadura a baja concentración. De
los 5 plásticos utilizados en la etapa de enriquecimiento (Polietileno tereftalato, PETE; Polietileno de
alta densidad, HDPE; Polietileno de baja densidad, LDPE; Poliestireno, PE; Polipropileno, PP), la
mayor pérdida de peso, después de 32 días de incubación, fue observada en el PETE. La
biodegradación de este plástico, estudiada en medios frescos inoculados a partir de los cultivos de
enriquecimiento, no mostró, después de 45 días de incubación, diferencias significativas en la pérdida
de peso de las láminas, ni se observaron alteraciones mediante espectroscopía infrarroja transformada
de Fourier (FTIR), y microscopía de fuerza atómica (AFM). Así mismo, se detectó una débil actividad
biológica asociada a la formación de biopelículas en los cultivos, pero sin diferencias significativas
respecto a los controles. Al final de la incubación, los cultivos presentaban una población mixta
formada por bacilos Gram- y Gram + esporulados.
2.2.1 Enriquecimiento selectivo de las poblaciones microbianas marinas.
Con el fin de seleccionar aquellas poblaciones de microorganismos marinos potencialmente
degradadoras de plásticos, se realizaron dos cultivos de enriquecimiento sucesivos, utilizando como
inóculo los microorganismos recogidos mediante filtración (filtros Millipore de nitrocelulosa de 0,45
μm) de la muestra de agua de mar (apartado 4.1). Este proceso se repitió 5 veces, filtrando alícuotas
de 1 L para cada uno de los plásticos ensayados.

Los filtros conteniendo los microorganismos retenidos, se añadieron a matraces de 500 ml de

capacidad conteniendo 200 ml de medio de cultivo de sales marinas (Sigma-Aldrich), suplementado
con extracto de levadura (0,1%), plástico granulado (0,3%) y una lámina del mismo plástico (apartado
4.2). Como controles se utilizaron los mismos medios de cultivo sin inocular. Todos los matraces,
cultivos y controles, fueron incubados en agitación (125 rpm) a 28 ºC, durante 13 días. Transcurrido
este periodo, se procedió a transferir alícuotas de 20 ml de cada cultivo, así como las láminas de
plástico de cada uno de ellos, a medios frescos, idénticos a los utilizados inicialmente. En este
segundo periodo de enriquecimiento, la incubación se prolongó durante 19 días.

2.2.2 Resultados
Tras un periodo total de enriquecimiento de 32 días en presencia de diferentes tipos de plásticos, las
láminas fueron retiradas de los cultivos y de sus respectivos controles, lavadas y sometidas a análisis
gravimétrico y espectroscópico (FTIR).

Tabla 1. Pérdida de peso de las láminas de plástico en la etapa de enriquecimiento.

2.2.3 Análisis espectroscópico de PETE mediante FTIR

La espectroscopía FTIR es una técnica muy útil para evaluar los cambios químicos producidos sobre
polímeros plásticos como consecuencia de la actividad microbiana, poniendo de relieve alteraciones
sobre enlaces de hidrógeno y grupos funcionales terminales, así como otras reacciones de degradación
(Milstein et. al., 1994; Mohamed et al.,, 2007; Singh and Sharma, 2008; Elashmawi et al., 2008).
Figura 1. Espectros FTIR de láminas de PETE de los controles (C7, C8, C9) y cultivos (R1, R2, R3),
después de 45 días de incubación.

2.2.4 Caracterización preliminar de cepas bacterianas utilizadas en el estudio

En las placas utilizadas para los recuentos finales, se observó la presencia de, al menos, 5 tipos de
colonias diferentes, que fueron sometidas a una caracterización preliminar.
Dos de estas cepas (C1 y C2) presentaban colonias semejantes, de forma circular, borde entero y
superficie cremosa, con la diferencia de que las colonias de la cepa C1 eran crateriformes, mientras
que las de la cepa C2 eran elevadas. Tras ser sometidas a tinción de Gram y de endosporas, ambas
bacterias se revelaron como bacilos Gram + formadores de endosporas (Tabla 2, Figura 2) por lo que,
presuntamente, se trata de bacterias del género Bacillus.

Tabla 2: Morfología y resultados de las tinciones realizadas.

 Figura 2: Tinciones de Gram y endosporas de las cepas C1 y C2.

2.2.5 Conclusiones.
1. Para estudiar el potencial biodegradador de poblaciones marinas, se llevaron a cabo cultivos de
enriquecimiento con diferentes tipos de plástico, de los que el PETE fue el que experimentó una
mayor pérdida de peso (-0,187%).

2. El estudio posterior de la biodegradación de PETE en cultivos incubados durante 45 días, no reveló

pérdidas de peso significativas entre los cultivos (-0,2278 %) y sus respectivos controles no
inoculados (-0,1291 %). Los análisis cualitativos mediante técnicas espectroscópicas (FTIR) y
microscópicas (AFM), tampoco mostraron evidencias de un ataque microbiano relevante (Peraza,
2017).

2.3 Artículo 3: Biodegradación de plástico con larvas del coleóptero tenebrio molitor como un
aporte interdisciplinar a la biotecnología ambiental.
La contaminación ambiental ha sido un factor ocasionado por el hombre, en las numerosas y variadas
formas de contaminación como lo menciona Domínguez (2015) quien expone que ciertos
contaminantes que se encuentran en el ambiente han sido producto del desarrollo antropogénico, a
base de procesos industriales, agrícolas, clínicos, etc. Estos productos que han sido construidos en pro
del humano y que sin duda en su momento han sido beneficiosos para la sociedad, a largo plazo han
generado ciertas consecuencias para el ambiente, debido al alto consumo que el mismo ser humano ha
ejercido sobre ellos. Con relación a lo anterior,se dice importante mencionar que la cantidad de
plástico que se arroja a los océanos está aumentando y causando grandes daños; se estima que
alrededor de 10 millones de toneladas de plástico acaban en los océanos cada año. Dichos desechos
están formados por pequeños fragmentos de plástico, que aparecen suspendidos debajo de la
superficie del mar y que terminan afectando a los organismos que en este habitan, ya que en su
mayoría son ingeridos por los animales, incluso por seres microscópicos como el plancton, pues los
organismos acuáticos, confunden las partículas de plástico con alimento. Así, por ejemplo, las
tortugas no pueden distinguir entre bolsas de plástico y medusas, que son parte de su dieta. Las bolsas
de plástico, una vez que se consumen, causan bloqueos internos y generalmente causan la muerte. A
su vez, fragmentos de plástico más grandes también pueden dañar los sistemas digestivos de las aves
marinas y las ballenas, y ser potencialmente fatales. De esta manera, la basura que llega al mar, en
especial las de tipo plástico, están matando a más de un millón de aves marinas y unos 100.000
mamíferos y tortugas marinas cada año. El material plástico afecta a la fauna de dos maneras
importantes: cuando las criaturas se enredan en él y cuando lo ingieren. Cabe resaltar, que el ser
humano al estar en la cúspide de la pirámide trófica no está exento de los peligros que comporta esta
grave contaminación.

En este sentido en el desarrollo de este artículo los autores proponen, analizar el proceso de
biodegradación de plástico, a partir de las larvas del coleóptero Tenebrio molitor como aporte a la
enseñanza Biotecnología Ambiental mediante una Guía Práctica - Virtual de Laboratorio. Con la que
pretenden aprovechar el mecanismo que se le ha descubierto a este coleóptero para degradar plástico y
de esta manera generar una alternativa innovadora para la enseñanza de la Biología, cabe resaltar que
esta propuesta se validó en un contexto educativo universitario en la asignatura de Sistemas
Microbianos de la Universidad Pedagógica Nacional (en adelante UPN).

2.3.1 Metodología
Para la elaboración que se llevó a cabo en este proyecto recurrieron a un enfoque metodológico mixto
de tipo paralelo simultáneo; donde este se entiende como el más alto grado de integración o
combinación entre los enfoques cualitativos y cuantitativos, donde la recolección de estos datos se
analiza de modo complementario. Se realizó en diferentes etapas: 1; caracterización biológica de
tenebrio molitor realizada a partir de diferentes referentes bibliográficos con los que buscaron
identificar los estadios de crecimiento y desarrollo de Tenebrio molitor, además de conocer las
características morfológicas que representan cada estadio. 2 Crías de la larvas de Tenebrio molitor :
La cría se inició con 220 larvas de Tenebrio molitor que consumían como dieta regular salvado de
trigo, trozos de papa y zanahoria y 3 Un bioensayo de Biodegradación de Plástico con Larvas del
Coleóptero Tenebrio molitor, donde realizaron una colecta de los individuos obtenidos en la fase de
cría y caracterización, a estos organismos se les tomaron peso y medida; los cuales fueron individuos
divididos en cinco muestras de 25 a 30 individuos con diferentes dietas, siendo dos muestras de
poliestireno (Icopor), dos muestras de polietileno de baja densidad (bolsa plástica) y una muestra de
control a la cual se le suministró trozos de papa y zanahoria. Además de la elaboración de guías de
laboratorio tanto virtuales como prácticas para la posible evidencia de la biodegradación de plásticos
con las larvas de coleóptero Tenebrio molitor.

2.3.2Resultados

2.3.2.1 Caracterización Biológica sobre el crecimiento y desarrollo del coleóptero Tenebrio

molitor.
Caracterización biológica sobre el crecimiento y desarrollo del coleóptero Tenebrio molitor

IMAGEN DESCRIPCIÓN DEL PROCESO

En un inicio se obtuvieron 220 larvas
provenientes de una microempresa dedicada a la
producción y comercialización de alimento vivo
denominada Ranucha. Los 220 individuos de T.
molitor se adquirieron el 8 octubre de 2019 y
permitieron iniciar la caracterización biológica,
la cual se encontraba respaldada desde algunos
referentes bibliográficos para así comprender el
proceso del ciclo de vida de estos organismos.

Posteriormente, las larvas se depositaron en una

vidriera de 10 x 10, y se dejaron en un espacio
que contaba con una temperatura promedio de
23.2 °C máx. y 19.3°C min y una humedad
promedio de 52.62 % máx. 48.37% min. A estos
220 individuos se le suministro de alimento
salvado de trigo, papa y zanahoria y un
suministro de agua a partir de algodones
húmedos. Cabe resaltar, que la vidriera donde se
encontraban los organismos se cubrió con una
bolsa de color negro para evitar la exposición a
la luz, por ende, se deduce que el tiempo de
fotoperiodo fue nulo.

Luego de tres semanas aproximadamente se

evidenciaron diferencias en los organismos
depositados en la vidriera, se presentaron
cambios de mudas y se observaron larvas que
habían pasado a pupas. De esta manera, se inició
la observación con la finalidad de comprender el
crecimiento y desarrollo de este organismo. Este
seguimiento se llevó a cabo durante el 28 de
octubre de 2019 hasta el 22 de noviembre del
mismo año. Cabe resaltar que se retomó el
proceso el 19 de febrero del 2020 donde se
realizó la observación y comparación con
algunas fuentes bibliográficas, a partir de las
cuales se identificaron los estadios de
crecimiento y desarrollo de Tenebrio molitor,
reconociendo así que este organismo realiza un
proceso de metamorfosis completa pues pasa por
el estadio de huevo, larva, pupa y adulto con
cambio de mudas en su estado larval.
2.3.2.2 Bioensayo de biodegradación de plástico con larvas de Tenebrio milito

1. 2.

3
4

5
2.3.3 Conclusiones

Durante el proceso de bioensayo realizado por un periodo de tiempo de (2) meses, se logra determinar
que los dos tipos de plástico; poliestireno y polietileno de baja densidad seleccionados para esta
investigación, fueron biodegradados, pero el poliestireno (Icopor) presentó una mayor proporción
debido a que fue mayor el sustrato consumido de este que del polietileno de baja densidad (bolsa
plástica). Siendo el porcentaje de productividad específica para la muestra uno y dos de Icopor de 5%
y 8% a diferencia de las muestras tres y cuatro de la bolsa plástica las cuales presentaron un
porcentaje de productividad específica de 0.5% y 1.5%.

El porcentaje de biodegradación se vio afectado, debido al consumo que se presentaba entre las larvas
de las muestras, ya que al disminuir la cantidad de larvas disminuyó el consumo de plástico. Para el
caso, de la muestra uno de Icopor que inició con 25 organismos y finalizó con 3 se obtuvo un
consumo de 0.1g a diferencia de la muestra 2 que contaba con mayor cantidad de organismos, dado
que inicio con 30 individuos y finalizó con 7, en lo cual se obtuvo un consumo de 0.16g. De igual
manera, para el caso de las muestras tres y cuatro de la bolsa plástica, que iniciaron con 25 y 30
organismos y terminaron con 9 y 7 individuos, se obtuvo un consumo de 0.01g y 0.02g. Sin embargo,
en las muestras de bolsa plástica se evidenció que hubo mayor consumo en el tratamiento cuatro,
aunque había menor número de organismos por lo cual se concluye que las variables inciden en el
consumo de este tipo de plástico.

2.4 Artículo 4. Biodegradación de politenos por bacterias aisladas del suelo

Este estudio habla acerca del aislamiento, identificación, cribado y degradación del polietileno
pretratado por microorganismos obtenidos del suelo. Se recuperaron un total de 15 bacterias de
diferentes áreas. El cribado adicional de microorganismos degradantes de polietileno se realizó
mediante el método de zona de eliminación fuera de15 bacterias sólo 3 mostraron los resultados
positivos y se identificaron como Staphylococcus sp (P1A), Pseudomonas sp. (P1B) y Bacillus sp.
(P1C). Un total de tres aislamientos fueron usados P1A, P1B, PIC y un Consorcio PID (P1A + P1B +
P1C) para la degradación de polietileno de 10 y 40 micrones. Bacillus sp. (PIC) mostró 42,5%
seguido de Staphylococcus sp. (P1A) 20% Pseudomonas sp. (P1B) 7.5% y consorcio (PID) 5% de
degradación por pérdida de peso en 40 días. El polietileno juega un papel importante en el envasado
de productos, material alimentario, medicamentos y bolsas de basura, etc., pero su degradación se está
convirtiendo en una gran amenaza y causa vital de la contaminación ambiental. Hay varios métodos
de degradación de polietileno disponibles, pero el método ecológico y aceptable es el uso de
microbios. A partir de este este estudio se concluye que Bacillus sp puede actuar como solución al
problema causado por el polietileno en la naturaleza y se especula que los microbios tienen suficiente
potencial para degradar el plástico a su debido tiempo.

2.4.1 Resultados
Se recuperaron un total de 15 bacterias de diferentes áreas. Las áreas seleccionadas fueron surtidor de
gasolina, hospital y área local

2.4.2 Detección de microorganismos degradantes del polietileno

Cribado primario
En este procedimiento, el método de zona de aclaramiento fue observado por tinción con azul de
Coomassiee donde las concentraciones de 0,5de PEG se utilizó en medios mínimos que contienen
sales de amonio y potasio. De 15 bacterias, 8 mostraron resultados positivos. Entre estas bacterias, 5
eran de la gasolina. bomba, 2 del hospital y 1 del área local

Cribado secundario
En este proceso la zona de despeje fue observada poragregando 1.0 concentraciones de PEG seguido
de tinción conAzul Coomassiee. De 8 solo 3 aislamientos de bomba de gasolinamostraron un
aclaramiento máximo y fueron designados como: P1A, P1B y PIC

2.4.3 Degradación del polietileno pretratado

Las tiras de polietileno pesadas inicialmente se transfirieron amatraz y todos los matraces se
mantuvieron en agitador pordías. Después de la duración respectiva de agitación, el polietilenose
recogieron las tiras y luego se extrajo el peso final.A partir de los datos recopilados, la pérdida de
peso de los plásticos secalculado como se muestra en la tabla 3.El estudio anterior ha cubierto una
gran preocupación en aquellosmicroorganismo que muestra el máximo y el mínimodegradación del
polietileno.
2.4.4 Conclusión
Los resultados de este trabajo se compararon con estudios de investigación anteriores realizados por
Sowmya, etal (2014) en los que informaron que Bacillus cereus fue capaz de crecer en un medio
mínimo que contenía polietileno como única fuente de carbono. Esto mostró su capacidad para
utilizar el polietileno como fuente de carbono y degradar el polietileno. La degradación del polietileno
fue llevada a cabo por Bacillus cereus, que fue aislado del suelo del vertedero. La degradación
adicional fue supervisada por el tamizaje que fue seguido por la pérdida de peso. En el procedimiento
de Screening, Augusta et al. (1993), informaron que la zona de limpieza alrededor de la colonia se
debe a enzimas hidrolizadoras extracelulares secretadas por el organismo objetivo en medio de agar
de poliéster en suspensión.

3. REFERENCIAS

Álvarez, C., Cairós, C., López, J., Mazzetti, E., Hernández, C., González, J., et al. (2019).
Microplastic debris in beaches of Tenerife (Canary Islands, Spain). Mar. Pollut. Bull. 146,
26–32. doi: 10.1016/ j.marpolbul.2019.05.064

Browne, M. A., Crump, P., Niven, S. J., Teuten, E., Tonkin, A., Galloway, T., et al. (2011).
Accumulation of microplastic on shorelines worldwide: sources and sinks. Environ. Sci.
Technol. 45, 9175–9179. doi: 10.1021/es201811s

Carpenter, E. J., and Smith, K. L. Jr. (1972). Plastics on the Sargasso Sea surface. Science 175, 1240–
1241. doi: 10.1126/science.175.4027.1240

Fatimah Alshehrei, "Biodegradación de plástico sintético y natural por microorganismos". Revista de

microbiología aplicada y ambiental, vol. 5, no. 1 (2017): 8-19. doi: 10.12691 / jaem-5-1-2
.
Hidalgo-Ruz, V., Gutow, L., Thompson, R. C., and Thiel, M. (2012). Microplastics in the marine
environment: a review of the methods used for identification and quantification. Environ. Sci.
Technol. 46, 3060–3075. doi: 10.1021/es203 1505

Jumaah, O. S. (2017). Screening of plastic degrading bacteria from dumped soil area. IOSR J.
Environ. Sci. Toxicol. Food Technol. 11, 93–98. doi: 10.9790/2402- 1105029398
Peraza, A. M. (2017). Preliminary study of plastic biodegradation by marine bacteria. 29.
Plastics Europe. (2017). Plastics – The Facts 2017: An Analysis of European Plastics Production,
Demand and Waste Data 2017. Brussels: Plastics Europe.

Tokiwa, Y., Calabia, B. P., Ugwu, C. U., and Aiba, S. (2009). Biodegradability of plastics. Int. J. Mol.
Sci. 10, 3722–3742. doi: 10.3390/ijms10093722

Alvarez,D.y Botache L (2020) BIODEGRADACIÓN DE PLÁSTICO CON LARVAS DEL

COLEÓPTERO Tenebrio molitor como aporte interdisciplinar a la biotecnología ambiental