ESCUELA INDUSTRIAL SUPERIOR
PEDRO DOMINGO MURILLO
DETERMINACION DE PROTEINA POR METODO DE
KJELDAHL
OBJETIVO
¤ Determinar el porcentaje de nitrógeno presente en una muestra Karachi blanco por el
método kjeldahl y mediante factor de corrección Calcular el porcentaje de proteínas de la
misma.
FUNDAMENTO TEORICO
Neutralización:
Tienen lugar cuando un ácido reacciona totalmente con una base, produciendo sal y agua.
Sólo hay un único caso donde no se forma agua en la reacción, se trata de la combinación
de óxido de un no metal, con un óxido de un metal.
ACIDO + BASE -> SAL + AGUA
HCl + NaOH -> NaCl + H2O Proceso
de neutralización :
Se da entre los iones hidróxido de una base y los iones hidrógeno de un ácido, para formar
moléculas de agua.
Reacción:
La reacción neutralizante de un ácido con una base siempre producirá una agua y una sal,
ya que los iones hidrógeno y los iones hidróxido proceden de un ácido y de una base. Las
reacciones de neutralización generalmente son exotérmicas, es decir, desprenden energía
en forma de calor.
según el carácter de acido y de la base reaccionante se disminuyen en 4 casos.
¤ Acido fuerte + base fuerte
¤ Acido débil + base fuerte
¤ Acido fuerte + base débil
¤ Acido débil + base débil
Método kjeldahl:
El método mas comúnmente utilizado para la determinación de nitrógeno orgánico es el
llamado método kjeldahl que se basa en una volumetría Acido-base.
El procedimiento es directo el material necesario es muy simple (aparato de destilación
kjeldahl) . Es el método estándar para la determinación del contenido proteico en cereales,
cárnicos, lácteos y materiales biológicos , en el método kjeldahl la muestra se descompone
en caliente medio sulfúrico en presencia de un agente reductor catalizador también suele
adicionarse una sal neutra para aumentar el punto de ebullición de la disolución de
H2SO4 de esta forma que aumenta la temperatura de trabajo con lo cual se favorece la
descomposición . El tratamiento transforma el Nitrógeno de la muestra en NH4 la
posterior adición de una base fuerte libera el NH4 que es arrastrado hasta un frasco
colector por destilación en corriente de vapor.
Digestión:
Se produce la descomposición del Nitrógeno que contiene las muestras orgánicas
utilizando una solución de acido concentrado.
Esto se obtiene haciendo hervir la muestra en una concentración de acido sulfúrico
(H2SO4) el resultado es una solución de sulfato de amonio.
NH2 + mH2SO4 -> C92 + (NH4)2 SO4 + SO2
Proteína Calor
Destilación:
Se libera Amonio el cual es retenido en una solución con una cantidad conocida de acido
bórico inicialmente se realiza una destilación con vapor por el método de arrastre de
vapor de agua mediante la cual acelere la obtención del destilado.
(NH4)2SO4 + 2NaOH -> 2NH3 + NaOH + 2H2O
NH2 + H2BO3(Acido bórico )-> NH4 + H2BO3 (Ion Borato )
Titulación:
Para valorar finalmente la cantidad de amonio presente en la muestra destilada con una
solución NaOH y fenolftaleína.
El ion borato ( proporcional a la cantidad de Nitrógeno ) es titulado con HCl (H2SO4)
estandarizado.
FUNDAMENTO PRACTICO
MATERIALES REACTIVOS CANTIDAD
Bureta Acido sulfúrico (H2S04) 4-5 ml
Matraz kjeldahl Hidróxido de sodio 2-3 ml
(NaOH)
Matraz aforado Acido clorhídrico 15 ml
Matraz Erlenmeyer Indicador fenolftaleína 3 – 4 gotas
Pinza mariposa Muestra sólida de Karachi 0.2 gramos
blanco
Soporte universal
Pipeta
Equipo de destilación
Vaso precipitado
Varilla de vidrio
Vidrio de reloj
Hornilla
PROCEDIMIENTO
A) PREPARACION DE LA MUESTRA B) DIGESTION
INICIO
INICIO
Armamos el balón kjeldahl
Conseguir la con la hornilla.
muestra
Introducimos la muestra
Lavar la muestra de Karachi blanco al
balón con 4-5 ml de
Cortar en pedazos
pequeños Encender la campana extractora
de gases.
Dejar secar a temperatura ambiente
durante 48 horas. Encendemos la hornilla a una
temperatura de 25-30 °C
durante 15 horas.
Moler en un mortero hasta que la
muestra este en polvo fino.
Verificar cada 15min
durante las 15h.hasta que
la muestra este en NH4.
C)DESTILACION D)
TITULACION INICIO
Armar el equipo de
destilación.
Añadir al matraz kjeldahl 2-3ml de
INICIO
Se añadió al destilado 4-5 ml
de HCl
Se agregó a la misma 3-4 gotas de
indicador fenolftaleína
En el matraz Erlenmeyer añadir Se tituló con la solución
10ml de HCl y agua. NaOH
Posterior a ello se conectará al equipo Se hiso la prueba con un indicador de
de destilación previamente armado. Ph para saber si la titulación estaba
correcta
Encender la hornilla con mucho Anotar el volumen
cuidado gastado (Vg) y realizar los
cálculos correspondientes .
Verificar que no haya ninguna fuga
de vapor o algún problema en la
destilación
Comienza la destilación
DATOS Y CALCULOS
RESULTADOS:
RECOMENDACIONES:
• Se recomienda añadir de forma correcta la muestra a analizar preferentemente no
debe chocar con las paredes del matraz kjeldahl ya que esto podrá ocasionar en el
momento de la digestión la misma se pueda romper.
• En la preparación de la muestra esta debe secarse a temperatura ambiente si le
sometemos a una presión para que seque la misma se puede quedar sin proteínas
y el laboratorio tendría sentido.
• Si el laboratorio que realizamos se hiso en un ambiente cerrado este debe contar
con una campana extractora de gases ya que el olor que sale al momento de la
digestión es toxico para la salud.
• Nunca esta demás el cuidado y limpieza que debemos tener con los materiales así
también con los reactivos.
