Mayo 05, 2023

Electroforesis
MAPAS

April Alondra Aguirre García

María del Carmen Hernández Hernández.

Análisis Instrumental.
Parcial lll
 Electroforesis de
Proteínas
La separacion de peptidos o proteinas por
medio de su migracion a de estar en
contacto con su campo electromagnetico.

Se clasifica en base en el numero de de

propiedades intrinsecas.

Tipos de electroforesis

El campo eléctrico se aplica a

Es un análisis para medir las
disoluciones o suspensiones.
proteínas específicas en la
Las diferentes proteínas se
sangre. Con el análisis se
desplazan a velocidades
separan las proteínas en la
diferentes según sus cargas y
sangre según la carga
coeficientes de fricción
eléctrica.
respectivos.

Se basa en el desplazamiento Permite separar proteínas solubles

de las moléculas en un y de membrana en geles de
gradiente de pH. Las moléculas acrilamida en gradiente. En este
anfotéricas, como los tipo de electroforesis la carga de la
aminoácidos, se separan en un proteína influirá en su migración,
medio en el que existe una no se puede determinar de forma
diferencia de potencial y un certera la masa molecular.
gradiente de pH.

permite la separación de proteínas

en función de su masa molecular. En
este método, se incorpora el
detergente SDS en un tampón de
migración. El SDS imparte una carga
negativa neta a las proteínas,
enmascarando su carga intrínseca.
 Electroforesis ADN

La electroforesis en gel es una técnica utilizada para

separar fragmentos de ADN según su tamaño.

Las muestras de ADN se cargan en Cuando un gel se tiñe con un pigmento

pozos (ranuras) en un extremo de un gel que se une al ADN, los fragmentos de
y se aplica una corriente eléctrica para ADN pueden verse como bandas, las
arrastrarlas a través del gel. cuales representan un grupo de

fragmentos de ADN del mismo tamaño.

Los fragmentos tienen carga negativa, por lo que

se mueven hacia el electrodo positivo. Puesto
que todos los fragmentos de ADN tienen la
misma cantidad de carga por masa, los
fragmentos pequeños atraviesan el gel más
rápido que los grandes.

Un bloque de material similar a la gelatina. Los Cuando la agarosa se calienta en una solución
geles para separar ADN suelen estar hechos de un amortiguadora (agua mezclada con algunas sales) y
polisacárido llamado agarosa, que se consigue deja enfriar, se forma un gel sólido ligeramente
como hojuelas secas pulverizadas. blando.

A nivel molecular, el gel es una matriz de

moléculas de agarosa que se mantienen unidas por
puentes de hidrógeno y que forman pequeños
poros.
 Electroforeisis
Capilar
La electroforesis capilar (CE) es una técnica de separación basada en la diferente
velocidad de migración de las distintas especies cargadas bajo la acción de un
campo eléctrico. La separación se lleva a cabo en un capilar de sílice fundida de
diámetro muy pequeño

La separación por CE es muy rápida, se realiza La electroforesis capilar es una técnica

en menos de 5 minutos, con una analítica de separación que se basa en la
reproducibilidad que muestran un coeficiente diferente velocidad de desplazamiento que
de variación (CVs) < 2%, muchos investigadores tienen las distintas proteínas en el seno de un
consideran que su sensibilidad es 10 veces medio líquido, contenido en un tubo capilar,
mayor que la de la cromatografía líquida de al someterlas a la acción de un campo
alta performance. eléctrico.

La separación se lleva a cabo en un tubo La muestra, contenida en otro vial, se

capilar (diámetro interno, d.i., 10 - 75 μm; introduce por uno de los extremos del capilar
longitud 20 - 100 cm), generalmente hecho de reemplazando en el momento de la inyección
sílice fundida, que se llena con el tampón que uno de los viales de tampón por el vial de
constituye el medio de separación (BGE) a muestra y aplicando en él una pequeña
partir de los viales situados en los extremos sobrepresión o un pequeño voltaje.
del capilar.

La monitorización de la separación se lleva a El campo eléctrico necesario para llevar a

cabo en columna, es decir colocando un cabo la separación se consigue conectando
detector en un punto del capilar de análisis una fuente de alimentación de alto voltaje
situado generalmente antes del extremo de (10.000 - 30.000 voltios, corrientes de 5 - 100
salida de éste. Un ordenador se encarga del microamperios) a los extremos del capilar de
control de la instrumentación y de la separación a través de los viales de
adquisición y tratamiento de los datos tampón.medio de separación (BGE) a partir de
suministrados por el detector. los viales situados en los extremos del capilar.
 Electroforesis
2D
Electroforesis bidimensional. Las proteínas se separan en un
primer momento mediante enfoque isoeléctrico en un gel
cilíndrico. A continuación se extiende el gel horizontalmente
sobre un segundo gel, en forma de plancha, y las proteínas se
separan mediante electroforesis SDS-PAGE.

En la segunda dimensión, las proteínas son

Cada proteína avanza en el campo eléctrico
separadas de acuerdo a su peso molecular.
hasta alcanzar un valor de pH donde su
A partir de esta separación se genera un
carga neta es igual a cero (punto
patrón de proteínas que es digitalizado
isoeléctrico).
como una imagen mediante el escaneo del
gel.

En general, los métodos de preprocesamiento para imágenes 2DGE se pueden

clasificar en: métodos de reducción de ruido, normalización de intensidades, y
corrección de fondo [18], los que buscan mejorar los detalles de los puntos,
reducir el ruido y homogeneizar el fondo para facilitar la deteccion de las
proteinas. En la reducción de ruido, se pueden emplear filtros lineales o no
lineales.