característica 1
Las enzimas son PROTEÍNAS, esta selección se debe a su complejidad estructural, permitiendo
cumplir eficientemente con la especificidad que se requiere para catalizar las miles de reacciones
distintas que suceden en los organismos vivos. Actualmente se sabe que algunas moléculas de RNA
tienen también función catalítica, principalmente autocatalítica; estas moléculas son conocidas ahora
como Ribozimas.
Las ribozimas mejor conocidas son los intrones, cuya función es el autoprocesamiento del RNA
transcrito (mRNA) y la subunidad de RNA de la ribonucleasa P de Escherichia coli, enzima cuya
acción catalítica reside en la subunidad compuesta por RNA; la función de esta enzima es procesar el
extremo 5’ de los tRNAs. Estos catalizadores, comparten muchas características con las enzimas
convencionales: especificidad de sustrato, especificidad de acción, cinética de saturación hiperbólica,
estructura tridimensional, requieren de iones metálicos (Mg 2+), no forman subproductos, pueden ser
inhibidas; pero a diferencia de las proteínas, no son moléculas con la suficiente diversidad estructural.
Actualmente el estudio de las Ribozimas es una materia separada de la Enzimología, tan solo para
finalizar diremos que las podemos considerar como fósiles moleculares.
Son moléculas altamente específicas, para cada reacción de la célula, existe una enzima determinada que
la cataliza, si el catalizador no está presente, no se llevará a cabo la reacción; esto nos indica que las
2 enzimas también cumplen un rol muy importante en la regulación del metabolismo.
La especificidad puede ser considerada desde dos puntos de vista:
1°Especificidad de acción: las enzimas son específicas para determinada actividad catalítica; así por
ejemplo la hexoquinasa tiene como sustrato a la glucosa, pero su acción sobre la misma es fosforilarla en el
carbono 6, en tanto que la glucosa oxidasa, enzima que también tiene como sustrato a la glucosa, la oxida.
2°Especificidad de sustrato: Las enzimas son específicas para el sustrato de la reacción que catalizan,
tienen la capacidad de reconocerlo; este reconocimiento es tan fino que inclusive puede diferenciar entre un
isómero “L” de un “D” (estereoespecificidad). Esto se debe a que la unión del sustrato con la enzima es a
través de varios puntos, 3 por lo menos; por ejemplo la mayoría de enzimas que actúan en el metabolismo
de los aminoácidos sólo pueden procesar a los isómeros de tipo “L”.
Aunque existen enzimas que pueden procesar a más de un sustrato, la xantino deshidrogenasa, tiene dos
sustratos naturales, la xantina y la hipoxantina e incluso puede oxidar a sustratos artificiales como el
aldehido fórmico, mostrando especificidad de acción mas no de sustrato.
Las endopeptidasas pepsina, tripsina y quimotripsina, muestran especificidad sobre determinados enlaces
peptídicos, mientras que subtilisina, proteasa de Bacillus subtilis, hidroliza la mayoría de enlaces
peptídicos.
Las enzimas no modifican la constante de equilibrio (Keq) de las reacciones que
3 catalizan, tan solo permiten alcanzar el equilibrio en un tiempo más corto; esto se debe
a que el catalizador a pesar de que participa en la reacción, no participa en el balance
energético de la misma, es decir, en los estados iniciales y finales; por lo tanto, no
modifica la Energía libre (ΔG) de la reacción, que al ser una función de estado no
depende del camino. La enzima al no modificar la Energía libre de la reacción en
condiciones estándar, consecuentemente no modificará la constante de equilibrio.
Como el catalizador disminuye la Energía de activación de las reacciones, éstas se hacen
más rápidas, determinando un aumento en la constante de velocidad (k1); si tenemos en
cuenta que en una reacción ocurre:
k1
S P y que Keq = [P] = K1
k2 [S] K2
El que aumente “k1” por acción de la enzima, implica que la misma enzima debe aumentar
también “ k2” para que no varíe la constante de equilibrio.
TRANSCURSO DE UNA REACCIÓN A TRAVÉS DEL TIEMPO
Concentración
Tiempo
Las enzimas son altamente eficientes, pues aumentan la velocidad de las reacciones
4 entre 108 a 1012 veces.
Si comparamos el tiempo en el que ocurre la transformación siguiente:
H2O + CO2 → CO3 H2
• Sin catalizador: aproximadamente 6 horas
• Con catalizador químico como el platino coloidal: cerca de una hora
• Con anhidrasa carbónica, la enzima propia de esta reacción: 0,001 segundos o
menos
podemos darnos cuenta de esta eficiencia.
5 Trabajan en condiciones moderadas de pH, temperatura y presión, compatibles
con la vida, disminuyendo de esta forma el consumo de energía.
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Las enzimas, pasan por una serie de formas de transición intermediarias, durante la catálisis,
pero salen de las reacciones tal como ingresaron; es decir, no forman subproductos, esto
permite que sean útiles varias veces; asimismo, en un proceso industrial (por ejemplo al utilizar
un reactor enzimático tipo batch), esto facilita la purificación del producto, ya que hay menos
contaminantes y los residuos enzimáticos por ser de naturaleza macromolecular, pueden ser
eliminados por métodos sencillos.
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Las enzimas deben su excelente capacidad catalítica a que DISMINUYEN fuertemente la
Energía de activación (Ea) de las reacciones que catalizan, por ejemplo la catalasa disminuye
la Ea necesaria para descomponer el H2O2 desde 18 Kcal/mol hasta el valor de 1; asimismo, si
comparamos la capacidad catalítica del pH ácido vs la actividad de invertasa para hidrolizar a la
sacarosa, esta es grande, el pH baja la Ea hasta el valor de 25 Kcal/mol en tanto que la enzima
baja Ea hasta 7.
PERFIL ENERGÉTICO DE UNA REACCIÓN CATALIZADA POR
UNA ENZIMA (azul) y UNA REACCIÓN NO CATALIZADA (rojo)
“Ea” corresponde a la Energía de activación y se define
como la energía que se debe suministrar a un mol de
moléculas de reactante para que alcancen un estado
energético de transición tal, que les permita
transformarse en su producto correspondiente.
Para que cualquier reacción química ocurra,
necesariamente se debe vencer esa barrera energética (Ea);
esto se puede conseguir, aumentando la temperatura, la
presión o aumentando varias veces la concentración del
reactante por ejemplo; pero como esto no se puede hacer
dentro de la célula, es que es imprescindible la presencia
de la enzima para que ocurra la reacción, vencer esa
menor Energía de activación es mucho más fácil, bastaría
con un pequeño aumento en la concentración del
reactante, tal como ocurre en las células.
¿Cómo es que trabajan las enzimas?
Para una reacción de un solo reactante y un solo producto, es de suponer que la catálisis ocurra a través
del paso por varios estados transicionales que serían como mínimo los siguientes:
E+S ES EP E+P
Esto implica que el perfil energético de la reacción cambiaría a como se muestra en la siguiente figura,
en donde podemos observar ahora tres picos de Energía de activación.
Si consideramos que la mayoría de reacciones que ocurren en la naturaleza tienen más de un sustrato y
más de un producto, el perfil energético se hará más complejo pues mostrará más intermediarios.
Perfil energético mínimo para una
reacción enzimática de un solo sustrato y
un solo producto; T1* corresponde al
estado de transición de la formación del
complejo ES, T2* es el complejo activado
en el estado de transición de la reacción
global y T3* es el estado de transición de
la formación del complejo EP cuando la
reacción tiene lugar en la dirección de
producto a reactante.
Antiguamente se pensaba que las enzimas
evolucionaban modificando su estructura para facilitar
la unión con su sustrato, esto energéticamente
hablando, implicaría una gran caída de la energía libre
cuando se forma el complejo ES; los estudios
termodinámicos actuales han demostrado que el nivel
energético de este complejo no debe ser muy bajo pues
la reacción caería en un pozo energético del cual sería
muy difícil salir; esto quiere decir que la enzima no
necesariamente debe buscar una mayor afinidad por
su sustrato durante su evolución.
TERMINOLOGÍA ENZIMÁTICA
* SUSTRATO: Es el reaccionante de la reacción y pueden ser, 1, 2 o más sustratos (lo
mas común es que sean 1 o 2). De acuerdo a esto se nombraran como A, B, C, D etc.
* PRODUCTO: Es el resultado de la transformación del sustrato y pueden ser, 1, 2 o más
productos (lo más común es 1 o 2) . Se designarán como P, Q, R, S, etc.
WILLIAM WALLACE CLELAND
Nació en 1930 en Baltimore Maryland
Su investigación se centró en el mecanismo y la cinética
enzimáticas, especialmente de enzimas de múltiples sustratos
UNI, BI, TER, CUAD
En la última parte de su carrera contribuyo a los estudios
sobre el uso de los efectos de los isótopos cinéticos como
herramienta para dilucidar los mecanismos de la catálisis
enzimática
TERMINOLOGÍA ENZIMÁTICA
• SITIO DE UNIÓN: Lugar de la enzima que interacciona con el sustrato; el modelo
vigente es el de Encaje inducido (Koshland). Tanto la enzima como el sustrato
cambian de conformación en el proceso.
• Por lo menos hay 3 interacciones entre la enzima y el sustrato.
• Se realiza a través de enlaces débiles para que el proceso sea rápido: interacciones
eléctricas e hidrofóbicas, puentes de hidrógeno y fuerzas de Van der Walls
• La enzima es en promedio 100 veces más grande que el sustrato
SITIO DE UNIÓN DEL SUSTRATO: Es el lugar de la enzima donde tiene lugar la unión
del sustrato o sustratos es decir, el lugar de reconocimiento del sustrato; si tomamos en
cuenta que la mayoría de enzimas tienen un tamaño entre 30 y 50 kD y que la masa
molecular media de la mayoría de sustratos oscila entre 0,2 y 0,4 kD, por la diferencia de
tamaños, la unión se da en un punto privilegiado de la proteína (aproximadamente la enzima
es cien veces más grande que el sustrato). Hay reacciones donde el sustrato es de mayor
tamaño que la enzima.
Para explicar la selección que hace la enzima para interactuar con su sustrato, el químico
Emil FISCHER en 1890 propuso el famoso modelo de “llave - cerradura” donde la llave es
el sustrato y la cerradura la enzima, esto implicaba la existencia de una complementariedad
de forma entre estos dos; esta propuesta era muy estática y no explicaba apropiadamente la
catálisis, tal como se la concibe en la actualidad. Muchos años después, en 1958 Daniel
KOSHLAND propone el modelo de encaje – inducido, el cual supone que durante el
proceso de unión, tanto la enzima como el sustrato sufren cambios conformacionales los
cuales en definitiva, explican la catálisis enzimática, Este también se conoce como modelo
de guante – mano.
TERMINOLOGÍA ENZIMÁTICA
* CENTRO ACTIVO O CENTRO CATALÍTICO: Lugar de la enzima donde se lleva a cabo la
catálisis, generalmente se encuentra en el fondo del sitio de unión
• Participan 2, 3 o más aminoácidos, los cuales no son contiguos.
• El centro catalítico de quimotripsina, enzima pancreática que hidroliza proteínas de
la dieta a nivel intestinal, tiene una triada catalítica conformada por ASP, HIS y SER.
TERMINOLOGÍA ENZIMÁTICA
*COFACTOR: Algunas enzimas, cerca del 50%, requieren de una molécula distinta a aminoácidos para
realizar su actividad, esto en proteínas se llama grupo prostético; pero en enzimas se llama cofactor
• El cofactor se une a la enzima a través de enlace covalente, es una unión muy fuerte.
• El cofactor es indispensable en la catálisis y puede ser un ión metálico (Fe 2+, Fe3+, Zn2+, Mg2+, Cu+,
Mn2+, Co3+; o la forma activa de una vitamina del complejo B.
VITAMINA COFACTOR FUNCIÓN
BIOTINA Biotina Carboxilar
TIAMINA TPP (tiamina pirofosfato) Descarboxilar
AC. PANTOTÉNICO Co A (Coenzima A) Transfiere grupos acilo
NIACINA NAD+ y NADP+ Transferencia de H
RIBOFLAVINA FMN y FAD Transferencia de H
PIRIDOXINA Piridoxal fosfato Transferir grupos de aa
ÁCIDO FÓLICO THF (tetrahidrofolato) Transferir grupos de 1 C
COBALAMINA Deoxiadenosil cobalamina Isomerizaciones
AC. PANTOTÉNICO Co A (Coenzima A) Transfiere grupos acilo
TERMINOLOGÍA ENZIMÁTICA
* COENZIMA: Es un cofactor enzimático que se une levemente a la enzima, a través de interacciones
eléctricas, hidrofóbicas y puentes de hidrógeno, es decir, no covalentemente.
• Es también indispensable en la catálisis pero se desprende de la enzima y es compartido por varias
enzimas distintas. En este grupo están, el NAD+, el NADP+, el Co A y el Co Q .
En el dibujo, MDH enzima
Malato deshidrogenasa y GAPDH
enzima Gliceraldehido 3 fosfato
deshidrogenasa, comparten al
coenzima; la primera lo requiere
reducido, como NADH + H+ y la
segunda oxidado, como NAD+
TERMINOLOGÍA ENZIMÁTICA
*ZIMÓGENO: o pro enzima, es un precursor inactivo de la enzima; tienen
zimógeno las enzimas que se sintetizan en una célula, pero trabajan fuera de
ella. Un ejemplo son las enzimas pancreáticas de la digestión.
• El zimógeno tiene cubierto su sitio de unión al sustrato, con un trozo adicional
de cadena peptídica; al activarse, lo pierde
TERMINOLOGÍA ENZIMÁTICA
*ENZIMAS MARCADORAS: Son enzimas que se localizan exclusivamente en determinados
tejidos u órganos; su presencia aumenta en sangre cuando hay daño en el tejido. De esta
manera se tiene un método accesible y fácil para detectar falla en ese tejido u órgano.
ENZIMA ÓRGANO O ENFERMEDAD
Fosfatasa ácida Carcinoma de próstata
Fosfatasa alcalina Enfermedades hepáticas y óseas
Amilasa Enfermedades pancreáticas
Transaminasa glutámico pirúvica (TGP) Enfermedades hepáticas
Transaminasa glutámico oxálacética (TGO) Hepatopatías y cardiopatías
Lactato deshidrogenasa Hígado, corazón, eritrocito
Creatino kinasa (CK) Corazón, músculo y cerebro
Aldolasa Hepatopatías
Gamma glutamil transpeptidasa Hepatopatías
Aldolasa Músculo, corazón
Arginasa Hepatopatías
Elastasa Enfermedades del colágeno
Plasmina Coagulopatías
Pseudocolinesterasa Intoxicaciones hepáticas (fumigaciones)
Lipasa Páncreas
Existen también enzimas marcadoras de estructuras subcelulares, lo cual es muy útil en los procesos
de purificación enzimática
TABLA: Enzimas marcadoras de estructuras subcelulares.
Componente subcelular Enzima marcadora
Núcleo RNA polimerasa
Cloroplasto Ribulosa bifosfato carboxilasa
Membrana externa mitocondrial Monoamino oxidasa
Membrana mitocondrial interna Citocromo oxidasa
Matriz mitocondrial Glutamato deshidrogenasa
Lisosoma Fosfatasa ácida
Peroxisoma Catalasa
Retículo endoplásmico Glucosa 6 fosfatasa
Membrana plasmática 5’ nucleotidasa
Citosol Lactato deshidrogenasa
TERMINOLOGÍA ENZIMÁTICA
* ISOENZIMAS: Son isómeros de una misma enzima, que catalizan la misma reacción
pero se diferencian entre si por la distinta afinidad en el sentido de la misma;
catalizan reacciones reversibles
• Están conformadas por varias cadenas peptídicas, cada una de las cuales tiene su
propio centro catalítico, es decir, son proteínas oligoméricas. Las cadenas que las
conforman solo pueden ser de dos tipos distintos.
• Cada tipo es codificado por un gen distinto, es decir solo habrán dos genes
codificadores; estos genes son activados de distinta forma en los diferentes tejidos.
• Un ejemplo es la enzima Lactato deshidrogenasa que cataliza la siguiente reacción:
LACTATO PIRUVATO
• Está conformada por 4 cadenas peptídicas, cuyos tipos solo pueden ser “H” o “M”;
la cadena H tiene afinidad por la reacción de izquierda a derecha mientras que la
M, de derecha a izquierda.
• M viene de músculo y H de corazón (en ingles)
REACCIONES ACOPLADAS
El ensayo cinético de una enzima puede no mostrar cambios
fácilmente detectables a medida que la reacción procede, por lo cual,
muchas veces se acopla la reacción a otra en la cual ocurren cambios
convenientes de ser medidos; esto exige colocar en el ensayo, una
cantidad suficiente de la segunda enzima así como de los sustratos de
las dos reacciones que no son producidos durante la catálisis.
En este principio se basan casi todas las determinaciones bioquímicas
que se realizan en el laboratorio clínico, el cual le da a la
determinación una alta especificidad por un lado y una fácil y rápida
medición por otro.
EJERCICIO CAPÍTULO I
Indique las reacciones acopladas que participan en una
determinación de Transaminasa glutámico oxalacética
(TGO) en suero sanguíneo, en la cual se mezclan, la muestra
de suero con aspartato, alfa cetoglutarato, NADH y un
exceso de malato deshidrogenasa; explique el fundamento de
la medición.
