UNIVERSIDAD PERUANA CAYETANO HEREDIA
FACULTAD DE MEDICINA ALBERTO HURTADO
DEPARTAMENTO ACADEMICO DE TECNOLOGÍA MÉDICA
PREGRADO EN TECNOLOGÍA MÉDICA
QUIMICA CLINICA GENERAL
GUIA DE PRACTICAS N° 12
DETERMINACION DE UREA, CREATININA Y ACIDO URICO
2022-I
LIMA-PERU
DETERMINACION DE UREA, CREATININA Y ACIDO URICO
1. Objetivos:
- Aplicar la teoría y desarrollar el manejo adecuado de la técnica para la determinación de
urea, creatinina y ácido úrico en muestras de suero y orina.
- Definir cuáles son las principales patologías que se presentan, investigar si tiene utilidad
clínica valores altos y/o valores bajos de urea, creatinina y ácido úrico
2- Marco Teórico:
COMPUESTOS NITROGENADOS NO PROTÉICOS
Los compuestos nitrogenados no proteicos (CNNP) son un conjunto de compuestos biológicos
que contienen nitrógeno en su estructura y que no constituyen proteínas. Estos en general son
de bajo peso molecular. Aunque son un sin número de moléculas las que se agrupan bajo este
término, para fines de esta práctica de laboratorio nos interesan: Urea, creatinina y ácido
úrico; estos tres metabolitos se excretan por vía renal por lo que sus valores plasmáticos nos
ayudan a medir función renal. En el caso de la urea como es sintetizada en hígado también es
indicadora del funcionamiento de este órgano.
DETERMINACION DE UREA
La urea es el principal producto final del catabolismo de las proteínas y aminoácidos, y se
genera en el hígado por el ciclo de la urea. A partir del hígado, la urea penetra en la sangre
desde donde se distribuye a todos los líquidos intra y extracelulares, puesto a que esta
sustancia puede difundir libremente a través de la mayoría de las membranas celulares. La
mayor parte de la urea acaba siendo excretada por los riñones, aunque también se excreta en
cantidades mínimas en la sudoración.
Los glomérulos filtran libremente la urea. Según el estado de hidratación y, por tanto, el flujo
de orina, entre un 40 y 80% de la urea filtrada es reabsorbida de forma pasiva con el agua,
sobre todo en los túbulos proximales.
Aunque la mayoría de las membranas celulares y las paredes capilares son totalmente
permeables a la urea, las nefronas renales pueden concentrar urea con una gradiente hasta 50
veces mayor que en el plasma.
Aunque la medición analítica de la urea (NH2–CO-NH2) aún se denomina convencionalmente
nitrógeno ureico en sangre (BUN), la determinación de la urea se practica en suero o plasma.
La concentración de nitrógeno ureico en sangre se expresa en mg/100mL.
El BUN refleja solo el contenido de nitrógeno de la urea (Peso molecular 28) y la medición de
urea refleja la totalidad de la molécula (Peso molecular 60), la urea es aproximadamente dos
veces (60/28 = 2,14) la de BUN. Por lo tanto, BUN 10 mg/dL es equivalente a urea 21,4 mg/dL.
La concentración de la urea varía bastante en los individuos normales y está influida por
factores tan diversos como: la ingesta dietética de proteínas y el estado de hidratación. Los
glucocorticoides tienen un efecto anti anabólico y las hormonas tiroideas un efecto catabólico
sobre la proteína, por lo que tienden a aumentar el valor del BUN. Los andrógenos y la
hormona de crecimiento tienen un efecto anabólico y, por tanto, reducen la formación de
urea.
La tasa de producción de urea es más variable que el de la creatinina y fluctúa durante todo el
día con relación al contenido de proteínas en los alimentos. La urea plasmática es una prueba
menos satisfactoria de la tasa de filtración glomerular que la creatinina, pero se usa
juntamente con la determinación de creatinina como prueba para conocer la función excretora
del riñón.
MÉTODOS REFERENCIALES
En el cuadro siguiente se resumen otros métodos utilizados:
Método Tipo de Análisis Uso Comentario
Nesslerización *Cuantitativo *Infrecuente *Inespecífico
*Punto final *Histórico *Reacción de tiempo
*Espectrofotométricamente *Prolongado
Enzimático acoplada: *Cuantitativo *Muy frecuente *Muy específico
Ureasa/Glutamato *Punto final *Rápido
Deshidrogenasa *Espectrofotométricamente
Diacetilmonoxima *Cuantitativo *Muy común *Cierta inespecificidad de
*Punto final reacción
*Colorimétrico *Reactivos peligroso
Electrodo ión- selectivo *Cuantitativo *Usado en investigación *Muy específico
*Enzimático científica
Método enzimático acoplado a GLDH (Glutamato deshidrogenasa)
http://www.pcmedical.mx/pdf/insertos/urea-uv-cinetica-aa-liquida-sp-4x200.pdf
El procedimiento Ureasa/GLDH, es el que se adapta más fácilmente a una amplia gama de
instrumentos, por esa razón, es el más usado y debe ser considerado el método de elección.
Fundamento:
La ureasa cataliza la hidrólisis de la urea para formar amonio y dióxido de carbono. El amonio
así producido se combina con 2-α cetoglutarato en presencia de nicotinamida – adenina-
dinucleótido reducido (NADH), siendo catalizada la reacción por el glutamato deshidrogenasa
(GLDH) para producir glutamato y NAD+ oxidado. Una cantidad equimolar de NADH sufre
oxidación durante la reacción y, por tanto, la disminución en absorbancia a 340 nm, debida a la
oxidación del NADH es directamente proporcional a la concentración de nitrógeno de urea en
la sangre de la muestra. Este método posee mayor especificidad que cualquier otro ensayo
para urea actualmente en uso.
No se observa interferencia por otros compuestos nitrogenados y, al realizarlo en forma
cinética con diluciones altas, tampoco se produce interferencias de bilirrubina, hemoglobina o
lípidos.
REACTIVOS
Reactivo A: solución conteniendo buffer Good pH 7,6, 2-oxoglutarato, ureasa y glutamato
deshidrogenasa (GLDH).
Reactivo B: solución conteniendo NADH.
Reactivo de trabajo: Cuatro partes del reactivo A y una parte del reactivo B. Estable en
refrigeracion por 30 dias. Lecturas de Absorbancia del blanco inferiores a 1.000 D. o. (a 340
nm) y turbidez son indicios de deterioro.
MUESTRA
Suero, plasma (heparina o EDTA)u orina.
En suero es estable de 7 dias de 20-25°C o de 2-10°C y 1 año a -20°C.
En orina es estable de 2 dias de 20-25°C, 7 dias de 2-10°C o 4 semanas a -20°C sin agregado de
conservantes.
PROCEDIMIEMTO
I) TECNICA CON REACTIVO UNICO
Llevar a cero el espectrofotómetro con agua destilada. En una cubeta mantenida a la
temperatura de 37°C colocar:
REACTIVO UNICO 1 ml
MUESTRA O CALIBRADOR 10 µL
Mezclar inmediatamente (sin invertir) y controlar el tiempo de reacción con un cronómetro. A
los 60 segundos exactos medir la absorbancia (Lectura1) a 340 nm y continuar la incubación.
Medir nuevamente la absorbancia (Lectura 2) a los 120 segundos.
II) TECNICA PARA ORINA
Se sigue la misma técnica que para suero o plasma utilizando orina diluida con agua o solución
fisiológica. Como el contenido de urea está generalmente relacionado con la densidad, es
conveniente diluir según el siguiente esquema:
Densidad hasta 1,015.................................... diluir 1/10
Densidad de 1,016 a 1,025............................ diluir 1/20
Densidad mayor de 1,025.............................. diluir 1/40
CÁLCULOS DE LOS RESULTADOS
Urea en sangre (mg/dL) = [Estándar mg/dL] x ΔA° Muestra
ΔA° Estándar
Unidades S.I. = Urea (mmol/L) = Urea (mg/dL) x 0,1665
Urea en orina (mg/dL) = [Estándar mg/dL] x ΔA° Muestra x F de dilución
ΔA° Estándar
Urea en orina (mg/24 horas) = (mg/dL) x Volumen ml
100
VALORES DE REFERENCIA
Suero, plasma: 13 - 43 mg/dL (2.1 – 7.1 mmol/L)
Orina de 24 horas: 26 – 43 g/24 horas (0.43 – 0.72 mol/24 horas)
Estos valores son a título orientativo. Es recomendable que cada laboratorio establezca sus
propios valores de referencia.
Expresión de los resultados como BUN (Nitrógeno ureico en sangre)
BUN mg/dL = urea mg/dL x 0,467
Linealidad: 300 mg/dL
Limite de detección: 3.83 mg/dL
INTERVALOS DE REFERENCIAS:
Los intervalos de referencia para el BUN sérico varían según el método. Estadísticamente se
observan valores más elevados en los hombres y en grupos etarios mayores. Para los adultos
estas diferencias carecen de importancia clínica.
Los niños pequeños tienen valores de urea en suero algo más bajos que los niños mayores y
que los adultos.
Las variaciones individuales en los valores de BUN también dependen de los hábitos dietéticos
del individuo, las personas con menor consumo de proteínas poseen una menor concentración
de urea en suero. Análogamente la excreción de urea por orina variará con la dieta.
Al aumento del BUN se le denomina azoemia y se ve en los siguientes casos:
o Causas Prerrenales: donde se altera la circulación renal. Choque quirúrgico, enfermedad de
Addison, Insuficiencia Cardiaca Derecha, Hemorragia de tubo digestivo con digestión de
sangre.
o Causas Renales: por disminución del Filtrado glomerular por más del 30 - 40% de lo normal.
o Causas Postrenales: obstrucción de vías urinarias, Hipertrofia prostática.
o Otras: Esteroides, Tirotoxicosis, aumento del metabolismo, aumento de proteínas y
Tetraciclinas.
Uremia: Azoemia + Insuficiencia renal.
Disminución del BUN: por Embarazo, Insuficiencia hepática, Dietas hipoproteicas,
malnutrición, Hiperhidratación, Anabólicos.
La relación BUN/ la Creatinina reconoce el estado del Paciente y debe ser en una relación
10:1. El Filtrado Glomerular está disminuido cuando es una relación 30:1.
DETERMINACIÓN DE CREATININA
EN SUERO Y ORINA POR EL MÉTODO DE JAFFE
GENERALIDADES
La creatinina es un metabolito, producto de la degradación de la creatina que se forma
endógenamente en el metabolismo muscular, es un compuesto sumamente difusible
cuya eliminación del organismo se efectúa a través del riñón y casi exclusivamente por
filtración. Por este motivo, el clearance de creatinina endógena (introducido por Miller
y Winkle en 1938) es uno de los métodos más frecuentemente utilizados como medida
de la filtración glomerular. Por lo tanto, es el riñón el que regula, como único órgano
excretor, el nivel de creatinina en la sangre. Si se restringe la función renal, aumenta
la creatinina en el plasma proporcionalmente a la lesión orgánica.
Como se forma en el organismo, los factores exógenos no pueden influir su nivel
sérico. Por este motivo la determinación simultánea de la creatinina en suero y orina
permite el cálculo del clearance o depuración de creatinina, y en suma estos
parámetros resultan importantes tanto en el diagnóstico como pronóstico de
nefropatías, obstrucciones urinarias y otras afecciones.
Los métodos empleados con más frecuencia para medir creatinina se basan en la
reacción de Jaffe.
FUNDAMENTO DEL MÉTODO
https://www.wiener-
lab.com.ar/VademecumDocumentos/Vademecum%20espanol/creatinina_cinetica_aa_liquida_sp.pdf
La creatinina reacciona con el picrato alcalino (reacción de Jaffe) sin
desproteinización, obteniéndose un cromógeno rojo que se mide a 500 nm.
El método de Jaffe cinético con compensación y con blanco de muestra, resultaría
comparable al método enzimático si se tienen en cuenta todas las indicaciones:
Prueba colorimétrica-cinética
Creatinina + acido pícrico complejo de ácido pícrico-creatinina
Solución alcalina
REACTIVO
Reactivo A: solución de ácido pícrico 12.7 mmol/L y lauril sulfato de sodio 8.4 mmol/L.
Reactivo B: solución de borato 53 mmol/L e hidróxido de sodio 970 mmol/L.
Reactivo de Trabajo: Mezclar cuatro partes de Reactivo A y una parte de Reactivo B.
Conservar en envase de plástico. Es estable una semana a temperatura ambiente.
MUESTRA
▪ Suero, plasma (con heparina o EDTA) u orina.
▪ Orina: obtener orina de 2 horas o de 24 horas. empleando un recipiente
perfectamente limpio y manteniendo en refrigerador (2-10°C) durante la
recolección.
▪ Medir la diuresis, tomar una alícuota y efectuar una dilución 1:50 de la misma en
agua destilada.
▪ En caso de que la diuresis sea de 2 horas; multiplicar el volumen medido por 12
para calcular la cantidad de creatinina eliminada durante 24 horas.
▪ Conservación: Suero o plasma 3 días de 2-10°C. Orina 4 días de 2-10°C sin
agregar conservantes.
PROCEDIMIEMTO
I) TECNICA CON REACTIVO UNICO
Llevar a cero el espectrofotómetro con agua destilada. En una cubeta mantenida a la
temperatura de 25°C colocar:
REACTIVO UNICO 1.2 ml
MUESTRA O CALIBRADOR 200 µL
Mezclar inmediatamente (sin invertir) y controlar el tiempo de reacción con un
cronómetro. A los 30 segundos exactos medir la absorbancia (Lectura 1) a 500 nm y
continuar la incubación. Medir nuevamente la absorbancia (Lectura 2) a los 5 minutos.
II) TECNICA PARA ORINA
Se sigue la misma técnica que para suero o plasma utilizando orina diluida 1/50 con
agua.
CÁLCULOS DE LOS RESULTADOS
Creatinina en suero (mg/dL) = [Calibrador mg/dL] x ΔA° Muestra
ΔA° Estándar
Creatinina en orina (mg/dL) = [Calibrador mg/dL] x ΔA° Muestra x 50
ΔA° Estándar
Creatinina en orina (mg/24 horas) = (mg/dL) x Volumen ml
100
VALORES DE REFERENCIA
Suero: V: 0.70 - 1.30 mg/dL
M: 0.60 – 1.10 mg/dL
Orina: V: 39 - 259 mg/dL
M: 26 - 217 mg/dL
Limite de detección: 4.5 mg/dL
Linealidad: 9.0 mg/dL
ÁCIDO ÚRICO
El ácido úrico es el producto final del catabolismo de las purinas (adenina y guanina)
provenientes del exterior con la alimentación (parte exógena) y del interior con el ácido
nucleico (parte endógena). Todas las purinas se transforman en xantina e hipoxantina;
después, la enzima xantina-oxidada las oxida y las convierte en ácido úrico.
En el hombre, a diferencia de todas las especies animales, le falta la enzima uricasa, y no
puede transformar el ácido úrico en alantoína. El ácido úrico es poco soluble en la sangre, se
encuentra en forma de urato monosódico y está ligado a proteínas (albúmina, alfa 1 y alfa 2
globulinas). La mayor parte del ácido úrico es eliminada por el riñón a través de un mecanismo
de filtración, reabsorción y excreción.
Su alteración puede estar relacionada con dietas ricas en purinas o con aumentada producción
endógena o con una reducida excreción. La determinación del nivel del ácido úrico está
indicada en el diagnóstico y monitoreo de algunos desórdenes metabólicos dietéticos: gota,
síndrome dismetabólico alimenticio, neoplasia linfomielo-proliferativa (como linfomas,
leucemias, policitemia), anemia hemolítica, enfermedad del riñón y pacientes en terapias
citostática o radioterapia.
Hay un aumento del Ácido Úrico en: trastorno Renal u Obstrucción urinaria.
MÉTODOS PARA LA DETERMINACION DE ACIDO URICO:
Método Tipo de análisis Principio Uso Comentario
Oxidación del ácido úrico a Suero
alantoína y CO2 reducción del orina Inespecífico,
Ácido Espectrofotométrico
ácido fosfotungstico a azul de pero
fosfotungstico
tungtegsno. ampliamente
usado
Oxidación del ácido úrico a Suero Base para
Uricasa Enzimático alantoína, H2O2 y CO2. orina métodos de
referencia
propuesto,
mayor
especificidad.
Colorimétrico Cuantificación de H2O2
Especificidad
producido, cuando se acopla a
variable,
una reacción indicadora
reacción de
NAD/NADH
NADH
ampliamente
usada.
Cromatografía Cromatográfico Cromatografía de fase suero Mayor
especificidad.
METODO ENZIMATICO COLORIMETRICO
Fundamento:
https://www.wiener-
lab.com.ar/VademecumDocumentos/Vademecum%20espanol/uricostat_enzimatico_aa_sp.pdf
El ácido úrico es oxidado por la acción de la uricasa, en alantoína y peróxido de hidrógeno. En
presencia de peroxidasa (POD) la mezcla de diclorofenol sulfonato (DCFS) y 4-aminoantipirina
(4-AA) se condensan por acción del peróxido de hidrógeno, formando una quinonaimina
coloreada proporcional a la concentración de ácido úrico en la muestra
uricasa
Ac. Úrico + H2O + O2 Alantoína + CO2 + H2O2
peroxidasa
2H2O2 + 4-aminoantipirina derivado quinónico coloreado + 4 H2O
+
3,5-Dicloro-2-Hidroxi-sulfonato
REACTIVOS
Reactivo A: viales conteniendo uricasa (UOD), peroxidasa (POD), 4-aminofenazona (4-AF) y
ferrocianuro de potasio.
B. Reactivo B: solución de diclorohidroxibenceno sulfónico (DHS) en buffer fosfatos pH 7,4.
Reactivo de trabajo: disolver el contenido de un vial de Reactivo A en un frasco de Reactivo
B. Enjuagar varias veces el vial con Reactivo B. Mezclar hasta disolución completa.
Homogeneizar y fechar. Desechar cuando las lecturas del Blanco sean superiores a 0,160 D.O.
o las lecturas del estándar sean anormalmente bajas
MUESTRA
Suero, plasma u orina.
Suero: Debe ser separado antes de 2 horas de la toma de muestra. Estable por 3 días de 20 a
25°C, 7 días de 2 a 10°C o 6 meses a -20°C sin agregado de conservantes.
Orina: pueden conservarse 4 días a 20-25°C a pH > 8. No refrigerar ni congelar.
PROCEDIMIENTO:
Previamente, atempere el reactivo. En tres tubos marcados B (blanco) E (estándar) y D
(desconocido)
REACTIVO BLANCO CALIB MUESTRA
(mL) (mL) (mL)
Muestra ------- ------ 0.02
Agua Destilada o 0.02 ------ -------
Desionizada
Calibrador -------- 0.02 -------
Reactivo de Trabajo 1.00 1.00 1.00
Mezclar e incubar por 5 min. a 37ºC o 20 minutos a temperatura ambiente (18 a 25°C). Retirar, enfriar
y leer en espectrofotómetro a 505 nm. O en fotocolorímetro con filtro verde (490-530 nm.), llevando
el aparato a cero con agua destilada.
En el caso de orina, diluya 1/10 con agua desionizada. En el cálculo, multiplique el resultado
por dicha dilución.
CALCULO DE LOS RESULTADOS:
Ácido úrico en suero (mg/dL) = [Calibrador mg/dL] x A° Muestra
A° Estándar
Acido úrico en orina (mg/dL) = [Calibrador mg/dL] x A° Muestra x 10
A° Estándar
Ácido úrico en orina (mg/24 horas) = (mg/dL) x Volumen ml
100
Valores normales:
Suero o plasma:
Hombres: 3,5-7,2 mg/dL
Mujeres: 2,6-6,0 mg/dL
Orina de 24 horas: 250-750 mg/24 horas
Linealidad: 20 mg/dL
Límite de detección: 0.04 mg/dL
CUESTIONARIO
1- Elabore un algoritmo en base a “Asociaciones clínicas” en las que se relacione Urea,
Creatinina y Acido úrico con respecto a patologías.
2- Mencione aspectos importantes a tener en cuenta en la determinación de la UREA,
CREATININA Y ACIDO URICO en la fase preanalítica, analítica y post-analítica.
Referencias Bibliográficas
• Murray, et. al: “Metabolismo de los nucleótidos de Purina y Pirimidina” Bioquímica de
Harper, 16. Edición. Editorial El Manual Moderno.
• Harrison et al. Principios de Medicina Interna. Decimocuarta edición. Editorial Mc Graw-Hill
Interamericana. Madrid 1998.
