FACULTAD DE CIENCIAS QUiMICAS AREA DE | QUIMICO FARMACEUTICO BIOLOGO | PARASTTOLOGEA CLINICAKy at” FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS PRACTICAS DE PARASITOLOGIA » GEB. MA. ELENA CRUZ G. Quimico Furmacentice BidlogoFACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS REGLAMENTO GENERAL DE LABORATORIOS Es responsabilidad de la administracion de cada laboratorio mantenerlo en condiciones adecuadas de Seguridad, Salud y Orden. Antes de iniciar las practicas, el maestro inspeccionara las condiciones fisicas del laboratorio y de encontrar situaciones que representen riesgo grave, debera reportar dicha situacin al Jefe de Laboratorio y/o asistente o auxiliar del mismo, para que sea corregida, en caso de que no exista la posibilidad de atencién inmediata, la practica sera suspendida. Bi durante la practica surgiera una condicién que ponga en riesgo grave la Seguridad y la Salud de las personas, equipos, materiales o instalaciones se procederé a suspender la practica debiendo ‘informa, de la situacion al Jefe de Laboratorio y/o asistente o auxiliar del mismo, elaborando por escrito el reporte correspondiente. Los alumnos solo podran trabajar en el horario asignado a su practica, registrado en el Departamento de Servicios Escolares, contando con Ia presencia del maestro titular. ausencia del maestro, la practica no podra ser realizada. En caso de feauerirse una (varias) sesién(es) extraordinaria(s), el maestro debera solicitar por escrito la autorizacion de la(s) misma(s) al Jefe de Laboratorio y/o asistente 0 auxiliar del mismo, y éste otorgara el Permiso de acuerdo con la disponibilidad de las instalaciones Se deber cumplir y respetar la calendarizacién de practicas fijada y autorizada por la Jefatura de Carrera. Asi mismo se deberan efectuae las practicas establecidas por sesién, permitiendose cuando sea necesario a juicio del maestro efectuar cambios en la programacion de las mismas, notificando por escrito al Jefe de Laboratorio y/o asistente o auxiliar, y éste otorgara la autorizacién de acuerdo con la disponibilidad del laboratorio. fz Maestro deberd cumplir con el uso del equipo de proteccién personal {E.P-P.) basico de Laboratorio; también es responsabilidad del macsie verificar que antes de iniciar la practica, todos los alumnos cucnten pantein pbe Basico: lentes de seguridad, bata larga de algodon, pantalén largo de algodén y zapato cerrado, debiendo encontrarse ef equipo en buenas condiciones. E alumno que no cumpla con los requisitos anteriores, no podra realizar la practica.10. ll. El maestro debera asegurarse de que los alumnos. utilicen adecuadamente el E.P.P. durante el desarrollo de la practica. El maestro Mlevara un registro de los alumnos que sean observados sin usar su E.P.P. 0 usandolo de manera inadecuada, cada registro contaré como una falta al Reglamento General de Laboratorios. La acumulacion de cuatro faltas al Reglamento General de Laboratorios, implica una suspensién de la prdctica para el alumno xy la no acreditacién de la misma. En lo referente al abastecimiento, consumo y desecho de reactivos o sustancias, se debera cumplir con las siguientes disposicione: A. Los reactivos son proporcionados por Ia Institucién, por lo que se pide a los administradores de laboratorios, maestros y alumnos, hacer uso racional de los mismos utilizando solo 1o necesario, evitando el desperdicio. 5. Cumplir con el procedimiento para el almacenaje y dispdsicion de Sustancias quimicas, el cual se encuentra publicado en los laboratorios de la Institucién e incluido en todos los manuales de practicas. ; El maestro deber& permanecer en el laboratorio durante todo desarrollo de la practica. Es necesario, por procedimientos de registro de asistencia, que el maestro permanezca en un lugar visible. Por razones de Seguridad y Orden esta prohibido en el Laboratorio: © Corer. Utilizar lenguaje obsceno o palabras altisonantes. Hacer bromas. Introducir radiograbadoras, audifonos 0 radios. Ingerir alimentos o bebidas. Fumar. Ingreso de personas ajenas a la institucién o al grupo que desarrolla la practica. * Uso de zapatos con tacones de altura superior a 4 cm o zapatos abiertos. * Cabello largo (las personas con esta caracteristica deberan recoger Su _cabello y sujetarlo adecuadamente, como medida de prevencion para evitar el contacto con el fuego o sustancias peligrosas), Uso de falda, shorts 0 bermuda. * En general, todo acto 0 conducta que incite al desorden. Cualquier violacion a lo establecido en éste punto se considera como una falta al Reglamento General de Laboratorios.12. 13. 14, 1s. 16. 17. 18. 19, 20. ‘Toda persona tiene la obligacién de reportar por escrito los actos y/o Condiciones inadecuadas al responsable inmediato superior, utiliswas Para ello el formato de "Informe de Actos y Condiciones" Todo alumno que sufra una lesion debera reportarla al maestro encargado de la practica y de no encontrarse éste, debera dirigirse con el Jefe de Laboratorio y/o asistente o auxiliar del rnismo. Tode empleado que sufra una lesion debera reportarla a su jefe inmediato, Todo accidente ocurrido en los laboratorios deberd ser atendido para Su control, por la primera persona capacitada enterada de la situacion Al término de la practica el maestro ser responsable de supervisar que los alumnos ordenen y limpien su lugar de trabajo, asegurando que el laboratorio sea entregado a la administracion del laboratorio, en las formato correspondiente. La persona qui 2 S¢ presente bajo el influjo del alcohol o drogas * que incurra en actos de violencia, dafio intencional a la propiedad © negligencia * tome objetos o valores sin autorizacion Jars TePortado de manera inmediata ante la H. Comisién de Honor y Justicia de la Junta Directiva de la Facultad de Ciencias Quimicas, quien tomara las acciones correspondientes al caso. El Reglamento General de Laboratorios en su totalidad, es aplicable a maestros y en general a todo el personal integrante de la Institucion Todo lo no contemplado en el Reglamento, serA validado por el Comité de Seguridad y Salud de la Institucion.INDICE Técnicas generates para el estudio de las Parasitosis Humanas.. Recoleccién y Preservacion de muestras fecales. Estudio Coproparasitoscbpico directo (protozoarios)... Concentracion por Técnica de Sedimentacion Simple... elt Diagnéstico Inmunolégico de Amibiasis invasora...... 213 Técnica de Ritchie modificada.... Técnica de flotacién de Sheater... Concentracién por Técnica de Faust.... Investigacion de Parasitos en Sangre. Estudio Coproparasitoscépico directo (helmintos) ..cscse-creseseeee 97 Recuento de huevos por diltcién de Stoll (modificada). 32 Método del Frotis grueso de Kato.......... 34 TECNICAS ESPECIALES Cultivo de Harada-Mori, Técnica de Graham... Método Macroscépico por tamizado....... Técnica de ZiehI-Neelsen modificada... Diagnéstico de Trichinelta spiralis en biopsia de méisculo 0 came de cerdo.....45 Control de Calidad en Parasitologia Diagnéstica... Preparacisn de Reactivos..TECNICAS GENERALES PARA EL ESTUDIO DE LAS PARASITOSIS HUMANAS INTRODUCCION (CoS Patasitos son organismos que viven y se nutren a expensas de otros de diferente especie a (es cuales pueden causar dafo, La forma de vida parasitaa ha tenido un crane éxito, pues pardetion Sine eandantes como los virus, fas bacterias, los hongos, las rickettsia, ete,’ coe cara tos, Sin embargo, dada su extensién, el estudio de cada una de estas former de vida han Constituido disciplinas diferentes. Tne fclualidad la parastologia estudia los pardsitos animales: protezoaros y helmintoe sguamerGes técnicas utiizadas en el diagnéstico de las parasttocis, se pueden eecicar de la siguiente forma: a) Técnicas macroseépicas ») Técnicas mictoseépicas ©) Pruebas inmunolégicas 4) Cultivos : ©) Técnicas especiales A. TECNICAS MACROSCOPICAS Una Guferme, se pueden encontrar también moco sangte y cantidades’ coneiderablee de telidos Srouisados patdsites en su forma adulta (visibles a simple vista) 6 potciones ae ee (como Proglstides de Taenia). El examen macrosc6pico de la muestra, debe procsaer siempre al estuaio Examen macroscépico por tamizado, Se coloca toda la evacuacién en una coladera 0 tamiz al chore de agua; ésta disuelve ‘apidamente la materia fecal y los pardsitos quedan en el tamis, 5.- TECNICAS MICROSCOPICAS. Pueden ser directas 6 previo tratamiento de la muestra DIRECTA.- Este tipo de examen tiene especial valor para el estudio de Pardsitos vivos, como fos trofezoltos de protezoarios méviies, huevos de helmintos y larvae de nematodes, ane se utiliza one Solucién isoténica que es inocua para éstas formas de! parasite La muestra asi preparade se sumerje en ia solucién fijadora (deSchaudinn, con alcohol Polvinilico, etc). Después de la fiiacién la muestra se tefrd. Existen muchos metodce ara tefir Srarata fecal. FI método de la Hematoxlina Férrica con sus muchas modifcacioree para Fate we, Patésitos que se puedan diagnosticar en sangre, se suelen utilzar dos técnicas: et frotis delgado y la gota gruesa El frotis delgado se realiza en la misma forma que para estudios hematolégicos. Permite una reateenciacion morfolégica fidedigna y una mas répida locaizacién de pardsiten dente @ hora ne los eritrocitos, $2,90'2 giuesa.. Da concentraciones do pardsitos mas elevadas que el fotis delgado. Es ati Guandlo escasean los parasitos 6 Ios trots delgados «> magesTécnicas de concentracién &: Principal propésito de emplear este tipo de técnicas es la separacién del pardsito (en sus Grersos estacios) del resto de Ia materia fecal. Existen varios métodos para lograr éste propésito, se estudiaran luego. C.- PRUEBAS INMUNOLOGICAS. Aunque la produceién de anticuerpes, no es muy importante en fa mayoria de las enfermedades porasitarias, los pardsitos que invaden tejides, si producen respuestas inmunolégicas pronunciadas. Los parasitos que sélo invaden el tubo digestivo, no estimulan la produccion de anticuerpos. Sees ealee antigénico de los parésitos comprende antigenos especificos de grupo -z00l6gico, Specie y estadio de desarrollo, Ademds, en sus cuerpos poseen antigenos somaticos que nunca entran en juego en la respuesta inmune, por quedar confinados éstos antigenos al interior del Parasito y no hacer contacto con el mecanismo inmuno-competente del huésped; en canbe lac seeanes ¥ excreciones de los pardsitos, expuisados a través de su boca, ano, etc, si Gesempefian un papel importante en la sensibilizacién del hudsped. Cuando el pardstio mers {helmintos) sus proteinas sufren desnaturalizacién y después son liberadas al medio intero del [uésped, asi los anticuerpos formados corresponden a antigenos modificados del pardeito tee aittiouerPos especifices en el suero del huésped, pueden ser demostiadoe “in vito" por ficnicas inmunclégicas como: aglutinacién, preciptacién, fjacion de complement, hemagiutinacién, anticuerpos luorescentes, etc. La hipersensibildad' se puede "por die ™anifiesto por pruebas intradérmicas. D.-CULTIVos Las técnicas de cuttvo, se utiizan para el establecimiento de un diagnéstico positive, cuando las demas técnicas no han dado resultado. E| cultvo ideal de pardsitos con propésitos practicos 0 de investigacién, se realiza on un medio libre de bacterias, Pare separar parasites de éstos contaminantes vives, se han utlizado tanto métodos fisicos como Guimicos. Asl, el lavado repetido de pardsitos en solucién isoténica ester! y atdvica, ha toride fe nsiderable éxito (método fisico). O se le suele adicionar al medio de cultivo antibisticos, como 'a penicilina 6 la estreptomicina (método quimico). Aciterencia de los culvos bacteriolégicos, a cantidad de indculo seré considerablemente mayor. Se inocula alrededor de 0.5 ml del material y se incuba a 37°C POs, Gub-cultivos se hacen a intewalos de 48 horas. A veces el cultvo original no dé resultado, pero los sub-cultivos pueden resultar positivos. E. TECNICAS ESPECIALES ‘itovechando clertas caracteristicas fisioldgicas inherentes a los pardsitos, se han desarrollado ‘Senicas especificas para diagnosticar la presencia de determinados parditos en una mucutea Por ejempio: + Técnica de Graham (cinta adhesiva) para ol diagnéstico de Enterovius vermicularis. ~ Cultivo de Harada - para el diagnéstico de Strongyloides stercoralis, _ Piueba del colorante (Sabin-Feldman) - para el diagnéstico de Toxoplasma gondil ~ Xenodiagnéstico - utilizado principalmente para Trypanosoma cruzi BIBLIOGRAFIA ~ Beaver, P.C. Jung, R.C. y E.W. Cupp. Parasitologia Clinica Salvat, 2da Edicién, México, D.F., 1904 ISBN 988-6927.51-4, : ~ Brown, H.W. y F.A, Neva, Parasitologia Clinica, 'nteramericana, Sa, edicién, México, D.F. 1986 ISBN 968.25-1034-1~ Schmidt, G.0. y L.S. Roberts Fundamentos de Parasitologia, C.E.C.S.A., 1a. edicién México, D.F. 1984, ISBN 968-26.0425-7ESTUDIO COPROPARASITOSCOPICO RECOLECCION Y PRESERVACION DE MUESTRAS FECALES. COMO RECOLECTAR LAS MUESTRAS: Las muestras de materia fecal 4. Deben recolectarse en recipientes limpios y de boca anche 2. Es esencial que los recipientes tengan tapas que cieney herméticamente, para evitar el derra- me y pérdida de humedad en la muestra, $- La muestra no debe estar contaminada con agua no-coniente, pues Puede contaner protozoa. 5. Todas las muestras fecales recientes, deberin manipularse con Mucho cuidado, puesto que Son una fuente potencial de bacterias, virus y parasites. Algunos medicamentos también intertioren en la deteccién de protozoarios intestinales como: ticos, (tetraciclinas, sulfamidas) antiparasitatios (metronida- 70)), antidiartéicos no absorbibles (bismut, kaolin) 2 En 3250s de amibiasis pueden recomendarse hasta seis muestras. Tres de ellas pueden recolec- {Rize después del catitico. En nifios muy pequefos, ancianos, mujeres ‘embarazadas 6 pacien- {es con diarrea y dolor abdominal los eatarticos estan contraindloeden ‘Tiempo de recoleccién Las muestras fecales deben ser recolectadas on dias separados, de sor posible en dias seguidos Sc aties de 3 muestras en un petiodo de no mas de 10 dias, series de cete or cn plazo de no mas de 14 dias, Tivo de muestra y tiempo critico para su andlisis, fatala deteccién de protozoarios, en sus estadios movies (rofazoitos), es ‘muy importante e! Fy andlisis de una muestra formada, no estan etco, en éstas condiciones los estadios moviles do nan sen Stat presentes. Sin embargo se recomionda analiza el mismo dia que ee colecta, Seiko Se" Sto posible se recomienda: agregarle un consewader 6 refligerria (en refrigeracion Gstas muestas pueden permanecer varios dias, a tomperaturas entre 3 y 6°, Conseracién de la muestra Para conserva las muestras por un tiempo mayor a los eitados anteriotmente ¥ prevenir que los41.-Formol, al 5.6 10% Se recomionda para Quistes de protozoarios (al 5%) y para laivas y Huevos de helmintos (al 10%), es preferible usar formalina caliente (60°C), La Formalina permite el examen dela Muestra en montaje himedo. No permite la coloracién de un frotis permanente 22M.Y.F, Fe Merthiolate (imerosal) «iodo formaldehido (M.Y.F.) @s un buen presewador-colorante, para ‘a mayor parte de las clases y etapas de pardsitos hallados en heces. Las muestias ec dhcer Tengen montaje hiimedo temporal sin necesidad de otra coloracién. Sin embargo un frotis colo~ reado permanente permitiria un andlisis mas preciso, 3. Fijador de Schaudinn Este fjador ha sido concebido para ser utiizado con muestras recientes 6 material provenien- ie de la mucosa intestinal. La muestra es fjada sobre una laminilla, para su posterior colons. i6n (tile trofozoitos y quistes) : 42 APN. El empleo de la solucién fjadora de alcohol polivinilico (APV) es sumamante recomendada co. Tro, medio para preservar quistes y trofozoitos, particularmente util en muestras fquidas Ee. une combinacién de un fjador y una resina hiposoluble. Con ef material preservaco con ADV Se pueden realizar frotis coloreados permanentes, Ver seccion de Reactivos BIBLIOGRAFIA ~ Shore Garcia L. y LR. Ash, Diagnéstico Rarasitolégico, Médica Panamericana, 2a, Edicién, Buenos Aires, Argentina 1987. ISBN 950.06-1962-8 ~ Brown, HW. y F.A. Neva, Parasitologia Clinica, Interamericana, Sa. Edicién, México, D-F. 1986 ISBN 983-25-1034-1PRACTICA No.4 “ ESTUDIO COPROPARASITOSCOPICO DIRECTO « tanto: 2) Uhz Solucion isoténica, que nos permits observa al protazoario en movimiento (tofozoitos) y ) Una solucion colorant, que nos facitar la observacion morfoldpics en a Material: - Portaobjetos = Cubreobjetos, - Aplicadores = Microscopio ~ Guantes de latex act olucién salina fisiolégicat (NaCI 0.85%) _ Solucién de Lugol*2 (Md, en agua destilada) diluida {ambien se recomienda una solucién de azul de metileno, en buffer de acetatos*3 (Gilutda) 6 sotu- ©i6n de eosina o azul de cresilo billante al 1% Seen Coloearén, en un portaobjetos limpio, una gota de NaCl 0.85% ¥ otfa de la solucién Colorante (Lugol, Azul de metileno, etc.), por separado. 2- Se toma, con un aplicador de madera, una pequeha porcisn de la muestra, (tomada de la zona Pannatsresante del espécimen) y se esparce en las dos gotas que ya heres enn el Portaobjetos, SA Sslas proparaciones, soles coloca un cubreobjetos. El espesor de las, sera tal que no impida la lectura de letras comientes de un periédico a su teese ‘4 Observacién microscépica, con objetives de 40x y 10xSerine . SGREGAR UNA REQUEKA MUESTAR OF =o : MATERIA FECAL CON UN APLICADOR cuBmin con UNA LAM ~ DE 22.4 22 mm > 12 EN LA SOLUCION SatiNA € = ¥ LUEGO EW LA COTA DE LuGoL NOMOGENEIZAR PERFECTAMENTE oesenvan com EL MicRoscopro > Disposicién final de los desechos: dasccetuccion ripida y efectiva de desechos parsstoligicos es de suma importancia. Los desechos pueden ser tratados de las siguientes manaes, ) }- bes desechos se pueden incinerar 6 esterilzar 2- Se pueden sumergir durante horas en algin desinfectante como hipoctotito de sodio (§ gm 6 glutaraldehido (20 gf) REPORTE: 1+ Dibuje, cada uno de tos protezoarios observados én ésta Préctica, en los estadios de quiste y {tofozoite, utilizando para ello a bibliografia 2 Haga una descripcién morfolégica de los parssilos que haya dib BIBLIOGRAFIA: Seaver, PC. Jung, R.C. y EW. Cupp. Parasitologia Clinica, Salvat, 2a, edicién, México D.F, 1994 ISBN 968.6997 61.6 ujado, en la pregunta 4,D D PROTOZOARIOS INTESTINALES MAS COMUNEs: Entamoeba histolytica Trofozcito 10-50y Quiste 10-334 Quistes 5-20u lodamoeba butsehit Endotimay, nana Quiste Trofozoito Quiste Trofozoito S14. 6-20 5-18. 6-15. Dientamoeba fragilis Blastocystis hominis Trofozoito 5-12.Giardia lamblia Chilomastix mesnili Balantidium coli Trichomonas hominis TROFOZOITO: 6-20, 5-15y QUISTE: El quiste nunca se ha observado 710.DIVERSAS ESTRUCTURAS NO-PARASITARIAS ENCONTRADAS EN HECES: 0060 DISTINTAS CELULAS DE LEVADURA MACROFAGO CON NUCLEO MAGROFAGOS DETERIORADGS f oO @ LEuCocITos POLO MORFONUCLEARES GRANOS DE POLEN CRISTALES DE CHARCOT-LEYDEN (PRODUCTOS DE DEGRADACION DE LOS EOSINOFILOS, COMUNES EN AMIBIASIS)PRACTICA No. 2 ESTUDIO COPROPARASITOSCOPICO POR CONCENTRACION TECNICA DE SEDIMENTACION SIMPLE Fiztincipal propésito de emplear Técnicas de concentracion, para el estudio do los pardsitos en 22086, €5 la separacién de los huevos, quistes 6 larvas del reste de ta metve fecal; formada por bacterias, alimentos no digeridos, células muertas, ete Existen dos métodos principales de concentracién: 2) por sedimentacién ) por flotacién ‘Sedimentacién: En su forma més simple, ésta Técnica se leva a abo, suspendiendo las heces una ma carTiente y permitiendo que se verfique fa sedimentacion en forma ratinl 6 tyes usando Protozoarios, huevos é larvas presentes, sin embargo la preparacion coniene nee, deyeccién Flotacién: En ésta Técnica se ulliza un medio lauido de suspension, que es més denco que los slammer ti? E108 suben ala superficie del recipiente donde pueden sor nseociace se elementos fecalos mas pesados se irén al fondo. En ésta_prictica emplearemos una Técnica de concentracién por sedimentacién, ta Sedimentacién simple, Esta técnica presenta las ventajas de sue 3o Saulsa Muy poca distorsién en la morfolagia de los elementos parasitarios 3% Se detectan huevos de helmintos, que son demasiado pesadne para detectarse por métodos sangre (Schistosomas) todos los demds son hermatroditas, 05 estadios larvarios esporocistos, redias, carcarias, suelen encontarse en fos hospederos intermediarios (caracoles acuétions), Los huevecillos no-desarrollados constan del Gvuio fecundado, células vitelines yuna membrana sienna Con cubierta, Su forma y tamafo son bastante constants para cada especie: La cubierta MATERIAL: = Portaobjetos ~ Cubreobjetos ~ Aplicadores ~ Microscopic a REACTIVos: ~ Solucién salina fisiolégica (NaCI 0.85%) : + Solucién de Lugo! (VK, en agua destilada) diluide TECNICA Y DISPOSICION FINAL DE DESECHOS: Ver Practica No. 1 REPORTE: Se reportardn los pardsitos y estadios observados, en cada una de tas muestras y correspondientes de la siguiente forma: 1.- Se observan Huevos de. —________é No se observan Huevos de helmintos 2- Se observan Quistes de, ———________6 No se observan Quistes de protozoarios 3.- So observan Trofezoitos de : 6 No se observan Trofozoitos de protozoarios DIBUJos: Eas glibulos serén de los parisitos, en los estadios encontrados, tomados de consulta bibliografica. * Nombre del pardsito observado (Género-especie) BIBLIOGRAFIA: ~ Beaver, P.C. Jung, RC. y EW. Cupp. Parasitologia Clinica, Salvat 2a. edicién, México, D.F., 1994 ISBN 986.6927-51, ~ Brown, H.W. y FA. Neva, Parasitologia Clinica, Interamericana, 5a. edicién, México, D.F., 1986, ISBN 968.25-1034-1HELMINTOs: Huevecillos mas comunes: ve 50-60,. Ascaris lumbricoides Trichuris trichiura Enterobius vermicularis 30-47 72-861 30-40, Hymenolepis nana Hymenolepis diminuta Taenia sp . 225 x 16 . Cy A CF 64-76 Larvas rabditoides de: Uneinarid A: Strongyloides stercoralis (Necator americanus) B: UncinariasEnterobius vermicularis (adultos) A:Macho (245 mm.) B:Hembra (8a 13 m m)METODO DE DILUCION DE STOLL MODIFICADO (RECUENTO DE HUEVOS) PRACTICA No.9 3} Bara determinar la intensidad de ta parastosie, en una decisién de posible quimioterapia. 2) En la evaluacién de la eficacia de las drogas administradac, £05 tinlcos parésitos humanos para tos cusles es posible correlacionar la produccién de huevos con fa carga de gusanos adultos son: Ascaris lumbricoides, Trichutis ticking y las uncinarias (Necator americanus, y Ancylostoma duodenale}. MATERIAL: - Aplicadores de madera - Cubreobjetos No, 22 x 40 : = Microscopio -Portaobjetos ~ Pipeta de 0.5 ml (1/100) 6 de 1.0 mi (1/100) ~ Tubo de centrifuga de 15 ml (graduado) REACTIVOs: + Hidréido de sodio 0.1 N TECNICA: Se proporcionara en tubo de centrifuga de 15 ml graduado, con 1 ml de muestra problerna, 1° Agregue NaOH 0.1N hasta fa marca de 15 mi Fomezcle Por Inversén, con el tapén puesto, hasta que el contenido del tubo adquiera un aspecto homogéneo. 8° Extraiga répidamente 0.15 mi de fa suspensién. A quiansfiera ol material @ un portaobjotos, colocandolo en el centro del mismo (extendigndota un poco hacia los lados), Ge poloaue ol cubreobjetos de 22 x 40.mm sobre Ia muestra, con cuidado, para evtar derrames. Brae aime los huevos de toda la preparacion,utiizando el objotio de 10x y en ence near iio el de 40x. CALCULOs: Huevosig de heces= Nx 100x F ‘en dénde: “actor de correccién, segtin fa consistencia de la muestra: 1.5 materia fecal formada 2 materia fecal, semi-formada 3 _ materia fecal semi-iquida 100= dilucién de la muestra Fisten célculos aproximados para el nimero de gusanes presentes: Numero de gusanos presentes= x Huevos/a de haces 100 x2 #f huevos producides por la hembra de ta especie aidia 32en dénde: 100= promedio de excrecién diaria de un adulto en gramos 2° Se multiplica por dos considerando el ntimero de machos igual al nimero de hembras @ ‘omitir esta muttiplicacién obtendremos el némero ). Las hembras de Uncinari ‘alrededor de(9000_hevecilios al dia: la de Ascaris lumbrecies produce ures 20/000 prea de chants ichiura aproximadamente-5,000 Hor) Ascaris lumbricoldes.- La presencia de hasta un gusano es potencialmente peligrosa debido a 'os habitos de migracion del pardsito, lo que puede producir manitestaciones elinons ears REPORTE: 1.- Especie(s) encontrada(s) en la muestra 2.- Resultados obtenidos (incluir edlculos) : 8) Huevosig de heces b) el nimero aproximado de gusanos presentes, . 3. Conclusiones BIBLIOGRAFIA: ~ Shore area, L. y L.R. Ash Diagnéstico Parasitolégico, Médica Panamericana, 2a. edicién, Buenos Aires, Argentina, 1987 ISBN 950-06-1962.8 ~ Brown, H.W. y F.A. Neva Parasitologia Ctinica, Interamericana, 5a. edicién México, O.F. 1985 ISBN 968-25-1034-1 33METODO DEL FROTIS GRUESO DE KATO PRACTICA No.10 El procedimiento del frotis grueso cublerto de celofén, que se conoce como la Técnica del frotis espeso de Kato, fué originalmente desarrollado en Japén, por Kato y Miura, para estudios de ‘encuestas. = Se recomienda para el examen de Huevos de helminios, pudiendo ser un método cualitativo 6 cuantitativo, No es adecuado para estudiar lavas 6 protazoarios. {2 slicerina utlizada, ocasiona la répida aclaracién de 1a materia fecal, permitiende ina mejor observacién de los Huevos de helmintos (dentro de un tiempo limite). MATERIAL: = Portaobjetos ~ Cubreobjetos de celotén (humedecido en una solucién de verde de mataquita y glicerol durante 24 horas o més), = Tepén de hule : = Microscopio - Aplicadores . REACTIVos: ~ Solucién de verde de malaquita - Glicerol {como colorante de contraste) TECNICA: 1 Para que ésta Técnica sea cuantitativa, se pesardn SOmg de materia fecal y se colocarén en un portaobjetos. En la técnica cualitativa, se colocard una cantidad aproximada, 2+ Cubrir la muestra con un cubreobjetos de celofén (humedecible) previamente remojado en una ‘solucién de verde de malaquita-glicerol. 3. Presionar ta preparacién con un tapén de hule para extenderla uniformemente. ‘4 Dejar la preparacién a temperatura ambiente durante una hora é de 20 a 30 minutos a tompe- ratura entre 34 y 40°C, (El exceso de reposo previo a la observacién causard la aclaracion de los huevecillos también), 8 Realizar la observacién microscépica con objetivo de 10x y en caso necesario con 40x. 8: Si se pesé la muestra, contar os huevos que se encuentren en toda la preparacién y rmuttipli- car el total por 20" Nota: El factor 20, proviene de ésta formula: 50 mg de muestra——— 1 huevo 1000 mag (tg)- ——-X x= 1000X1 = 20 50 Después se muitiplica por otro ndimero de acuerdo a la consistencia de la muestra: # de huevos X Factor 20 X 1 (muestra sélida) ## de huevos X Factcr 20 X 2 (muestra semi: # de huevos X Factor 20 X 3 (muestra fiquida) lida)