CGS LABORATORIO CLÍNICO Y BIOMÉDICO –

MICROBIOLOGÍA CLÍNICA

UD3: Preparación de medios para el cultivo de

microorganismos.

CONTENIDO

1. Componentes de un medio de cultivo.

2. Tipos de medios: generales, diferenciales, selectivos y enriquecidos, entre otros.
3. Preparación de medios de cultivo: líquidos, sólidos y semisólidos en tubo (agar
inclinado). Medios en placa.
4. Medios de cultivo utilizados habitualmente en el laboratorio de microbiología.

BIBLIOGRAFÍA

- Microbiología Clínica – Editorial Arán.

- Microbiología Clínica – Editorial Síntesis.
- Microbiología Clínica – Editorial McGrawHill.

1. COMPONENTES DE UN MEDIO DE CULTIVO.

El MEDIO DE CULTIVO es el sustrato que contiene los nutrientes necesarios para el crecimiento
de los microorganismos.
De una forma muy general podemos decir que los medios de cultivo se componen de una fuente
de carbono (azúcares principalmente), una fuente de nitrógeno (proteínas parcialmente
hidrolizadas, peptonas), otros componentes como Na, K, vitaminas… y amortiguadores del pH
(fosfatos disódicos y monosódicos).
Cada microorganismo precisa para su cultivo de unos requerimientos específicos: un aporte de
nutrientes, una osmolaridad y un pH adecuado (determinados por le medio de cultivo empleado),
junto a la incubación a una temperatura óptima, un grado de humedad determinado, la presencia
o ausencia de oxígeno y de luz y la ausencia de otros microorganismos competidores en el
medio. Modificando estos factores podemos favorecer el crecimiento de unos microorganismos
al mismo tiempo que dificultamos el de otros.
Los COMPONENTES más comunes de los medios de cultivo son:
- AGAR: principal constituyente de los medios de cultivo y responsable de su consistencia.
Se extrae de algas rojas. Se comercializa en forma de polvo o gránulos, con diferentes
purezas. No funde hasta los 100ºC y una vez licuado no solidifica hasta los 45ºC.
- PEPTONA: obtenido mediante la hidrólisis ácida o enzimática (tripsina, papaína,
pepsina) de proteína animal (hígado, músculo, sangre, leche) o vegetal (soja, maíz,
melazas de remolacha o caña). Su composición es variable y depende del material de
partida y del proceso de obtención.
- CARNE: hígado y corazón de buey preferentemente antes que cerebro, bazo y placenta
de ternera.
- EXTRACTO DE CARNE: contiene bases orgánicas solubles, productos de degradación
de proteínas, vitaminas y minerales.

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 - EXTRACTO DE LEVADURA: obtenido a partir de la levadura del pan, vino y cerveza, es
fuente de aminoácidos y vitaminas del complejo B.
- CARBOHIDRATOS o AZÚCARES: se emplean para promover el crecimiento y para
determinar si los microorganismos pueden producir ácido (fermentación) y gas a partir
de ellos.
- CLORURO SÓDICO (NaCl): para mantener el equilibrio osmótico. Pueden utilizarse
también cloruro cálcico y sulfato de magnesio.
- SANGRE: debe ser desfibrinada para evitar la formación de coágulos y debe ser sangre
sin citrato.
- PLASMA: se emplea para demostrar la actividad coagulasa.
- SUERO: obtenido a partir de la sangre sin anticoagulante una vez se ha formado el
coágulo de hematíes y factores de coagulación.
- BILIS: contiene ácidos biliares como compuestos conjugados con aminoácidos
pigmentos como la bilirrubina y la biliverdina.
- SALES BILIARES: extraídas de la bilis, inhibe el crecimiento de organismos
grampositivos y de esporas sin afectar a las enterobacterias.
- INDICADORES: empleados para realizar comprobación visual del pH y otros cambios
producidos durante el crecimiento bacteriano, como indicadores REDOX.

2. TIPOS DE MEDIOS: GENERALES, DIFERENCIALES, SELECTIVOS Y

ENRIQUECIDOS, ENTRE OTROS.

Los MEDIOS DE CULTIVO se pueden clasificar en función de su COMPOSICIÓN en:

- MEDIOS DEFINIDOS: aquellos cuya composición química exacta es conocida. Suelen
ser medios líquidos donde se disuelven en agua destilada sustancias químicas puras
orgánicas e inorgánicas. Se emplean principalmente en INVESTIGACIÓN. Son más
caros y costosos de preparar.
- MEDIOS COMPLEJOS O NO DEFINIDOS: aquellos en los que se desconoce su
composición exacta, cualitativa y cuantitativa, por lo que son susceptibles de variaciones
entre una elaboración y otra. Suelen ser medios muy ricos en nutrientes y más
económicos.
- MEDIOS SEMISINTÉTICOS: son una mezcla entre los complejos y los definidos. En su
composición tienen moléculas naturales hidrolizadas. Se suelen emplear para el cultivo
de microorganismos exigentes para los que la elaboración de un medio definido resulta
cara o compleja.

En función de su CONSISTENCIA se clasifican en:

- LÍQUIDOS: también llamados caldos, se emplean para el crecimiento de bacterias que
se encuentran en pequeña proporción en la muestra y permiten determinar sus
propiedades metabólicas. No tienen agente gelificante por lo que los microorganismos
crecen por todo el medio. Estaría especialmente indicado para aumentar el rendimiento
del cultivo cuando se sospecha infección monomicrobiana e muestras con baja carga
bacteriana (bacteriemias) siendo necesarios subcultivos posteriores en medios sólidos o
para aumentar el estudio de micobacterias.
- SEMISÓLIDOS: para determinar la movilidad de microorganismos, observándose la
línea de inoculación difuminada en los móviles, y para determinar los requerimientos de
oxígeno del microorganismo.

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 - SÓLIDOS: son los más empleados ya que permiten aislar un microorganismo y
determinar propiedades del mismo. Son de elección en infecciones polimicrobianas ya
que permiten diferenciar los distintos tipos de colonias. El crecimiento del
microorganismo se produce en la superficie del medio.

En función de su UTILIDAD se clasifican en:

- DE ENRIQUECIMIENTO: suelen ser líquidos y buscan favorecer el crecimiento de
microorganismos minoritarios en una muestra inhibiendo parcialmente el de los
mayoritarios – caldo selenito, tioglicolato, agua de peptona alcalina, caldo de corazón-
cerebro…
- MEDIOS NO SELECTIVOS O GENERALES: favorecen el crecimiento de la mayoría de
los microorganismos – agar sangre, agar Mueller-Hinton, agar chocolate, agar Brucella…
- MEDIOS SELECTIVOS: son mayoritariamente sólidos, inhiben el crecimiento de ciertos
microorganismos por la adición de antibióticos y antisépticos y el empleo de un pH o una
osmolaridad extrema, seleccionando aquellos que puedan crecer en estas condiciones
– agar MacConkey, agar Thayer Martin, agar CNA, agar BCYE, medio Lowestein, agar
Skirrow, medio NNN, medio Diamond…
- MEDIOS DIFERENCIALES: contienen colorantes o indicadores que facilitan la
diferenciación de los microorganismos en función de su reacción con estas sustancias
presentes en el medio (producción de ácido sulfhídrico, de gas, la coloración que
adquieren…) – medio Kliger, agar Salmonella-Shigella, agar XLD, agar Chromagar, agar
CLED, medios cromogénicos para BLEE y carbapenemasas…

La mayoría de los medios se agrupan en varias de estas categorías, por ejemplo, el agar
McConkey es un medio sólido, no definido o complejo, selectivo (bacilos gramnegativos),
diferencial (diferencia entre bacilos fermentadores de la lactosa y los que no lo son).

3. PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO: LÍQUIDOS, SÓLIDOS Y SEMISÓLIDOS

EN TUBO (AGAR INCLINADO). MEDIOS EN PLACA.

La consistencia en el medio viene dada por el empleo de sustancias solidificantes en su

elaboración, generalmente agar (1,5-2% en medios sólidos y 0,7% en medios semisólidos).
Los medios líquidos y semisólidos se suelen preparar en TUBO ya que de esta manera se facilita
la visualización del crecimiento o de la movilidad del microorganismo. El medio de AGAR
INCLINADO es un medio semisólido o sólido que se deja enfriar inclinado, de manera que el área
del agar sobre la que se puede sembrar en superficie sea mayor. Cuando se deja enfriar en recto
se obtiene un AGAR EN TUBO RECTO. Sin embargo, la mayoría de los medios sólidos se
dispensan en PLACA PETRI, ya que la superficie de siembra es mayor.
La mayoría de los medios se comercializan bien listos para su uso, bien a partir d esus
componentes por separado, o bien en polvo deshidratado para su preparación por simple
rehidratación. A la hora de preparar el medio de cultivo se debe:
1. Seguir las instrucciones del fabricante que se especifican en el etiquetado del producto.
2. Verificar que el polvo deshidratado no se evidencian alteraciones químicas (grumos,
coloración no uniforme…), estando el recipiente que lo contiene herméticamente
cerrado.
3. Calcular por anticipado la cantidad de medio deshidratado y de agua destilada que se va
a requerir.
4. Utilizar una báscula calibrada y material de laboratorio aforado previamente lavado y
enjuagado con agua destilada.
5. Emplear siempre agua destilada o desmineralizada.

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 6. En el caso de medios que contienen agar hay que disolver agitando y calentando a la
vez.
7. Una vez reconstituido el medio, verificar el tiempo y la temperatura de esterilización que
se deben aplicar para eliminar microorganismos contaminantes (normalmente en
autoclave a 120ºC durante 15 minutos, en caso de medios con sustancias termolábiles
se usa filtración con membranas con diámetro de poro de 0,2 a 0,45 m).
8. Los medios de cultivo en tubo se fraccionan antes de esterilizar y se introducen en
autoclave tapados con algodón graso y papel de aluminio.
9. Los medios de cultivo en placa se suelen esterilizar en recipientes grandes con tapón de
plástico o algodón graso y posteriormente ya esterilizados cuando la temperatura baja a
45ºC fraccionarlo en placas.
10. Almacenar en lugar fresco, alejado de fuentes del calor, cerrado y protegido de la
humedad y la luz solar (en bolsas de plástico microporoso – celofán). En el caso de las
placas se invierten, de tal forma que la superficie de apoyo es la tapa de la placa,
11. A temperatura ambiente se puede guardar un máximo de dos semanas y refrigerado
hasta incluso seis meses. No se puede congelar ya que la estructura del gel se alteraría
(cristalización) inutilizándolo.

4. MEDIOS DE CULTIVO UTILIZADOS HABITUALMENTE EN EL LABORATORIO DE

MICROBIOLOGÍA.

4.1. AGAR SANGRE:

Es un medio no selectivo y diferencial, enriquecido con sangre (desfibrinada) de cordero, en el

que crecen la mayoría de las bacterias y levaduras. Permite la diferenciación de bacterias en
función de si su hemólisis es total (-hemólisis) como Streptococcus pyogenes y
Staphylococcus aereus que producen un halo transparente, parcial (-hemólisis) como
Streptococcus pneumoniae y Enterococcus faecium que producen un halo verdoso, o ausente
(-hemólisis) como Streptococcus salivarius.
En la preparación de este agar la sangre se añade al final, después de la esterilización y una vez
que se haya enfriado hasta los 45-50ºC, para evitar la lisis de glóbulos rojos por la temperatura
alcanzada en la esterilización (120ºC).
COMPOSICIÓN (por litro de agua destilada) – pH 7,3 +/- 0,2:
- Infusión de músculo corazón: 375 g.
- Peptona: 10 g.
- NaCl: 5 g.
- Agar: 15 g.

4.2. AGAR CHOCOLATE:

Es un medio no selectivo, enriquecido con los factores V (NAD) y X (Hemina) liberados por la
lisis de los glóbulos rojos de la sangre mediante calentamiento. La lisis se produce cuando se
añade el agar base fundido a la sangre.
Se emplea sobre todo para el crecimiento de aquellas bacterias exigentes, Haemophilus y
Neisseria, ya que precisan de estos dos factores y por ello no pueden crecer en agar sangre, ya
que en él los glóbulos rojos no están lisados. Pero al ser no selectivo, en él crecen otras bacterias
como Streptococcus, Staphylococcus, bacilos gramnegativos…
(Nota: fenómeno de SATELISMO: crecimiento de Haemophilus y Neisseria en agar sangre aprovechándose
de la hemólisis de glóbulos rojos que producen otras bacterias).

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COMPOSICIÓN (por litro de agua destilada) – pH 7,3 +/- 0,2:
- Peptona de carne: 5 g.
- Tripteína: 12 g.
- Extracto de levadura: 5 g.
- Extracto de corazón: 3 g.
- Almidón soluble: 1 g.
- NaCl: 5 g.
- Agar: 15 g.
- Sangre desfibrinada: 50 ml.

4.3. AGAR McCONKEY:

Es un medio selectivo y diferencial, que contiene sales biliares y cristal violeta como
inhibidores del crecimiento de bacterias grampositivas, dejando crecer exclusivamente a bacilos
gramnegativos.
Permite diferenciar los bacilos fermentadores de la lactosa de aquellos que no lo son, gracias
al indicador de pH, rojo neutro. La fermentación de la lactosa produce acidificación del medio,
haciendo que precipiten las sales biliares y que le indicador de pH vire a rojo, por lo que las
colonias y el propio medio adquieren una coloración rosa. Los bacilos no fermentadores de
lactosa dejan el medio de color amarillento.
(Nota: previene el efecto dinámico del Proteus spp. que en otros medios invade toda la placa impidiendo el
aislamiento de otras bacterias – efecto SWARMING).
COMPOSICIÓN (por litro de agua destilada) – pH 7,1 +/- 0,2:
- Peptona: 17 g.
- Pluripeptona: 3 g.
- Lactosa: 10 g.
- Mezcla de sales biliares: 1,5 g.
- NaCl: 5 g.
- Agar: 13,5 g.
- Rojo neutro: 0,03 g.
- Cristal violeta: 0,001 g.

4.4. AGAR CNA (Columbia-Ácido Nalidíxico-Colistina):

Su nombre hace referencia a los antimicrobianos (ácido nalidíxico y colistina) que lleva
incorporados, para impedir el crecimiento de bacterias gramnegativas, por lo tanto, es un medio
selectivo para grampositivos y diferencial, ya que también contiene sangre de cordero, pudiendo
diferenciarse en él las bacterias en función de su hemólisis.
Se emplea para aislar cocos grampositivos en muestras donde pueden estar presentes gran
variedad de bacterias.
COMPOSICIÓN (por litro de agua destilada) – pH 7,3 +/- 0,2:
- Digerido pancreático de caseína: 12 g.
- Digerido péptico de tejido animal: 5 g.
- Extracto de levadura: 3 g.
- Extracto de carne bovina: 3 g.
- Almidón de maíz: 1 g.
- NaCl: 5 g.
- Agar: 13,5 g.
- Colestina: 10 mg.

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 - Ácido nalidíxico: 10 mg.
- Sangre desfibrinada: 5%.

4.5. AGAR THAYER MARTIN:

Es un medio selectivo que se emplea fundamentalmente para Neisseria gonorhoeae, pero

también puede crecer en él Neisseria meningitidis.
Es un agar chocolate adicionado de antimicrobianos (vancomicina, colistina, anfotericina,
nistatina o trimetoprim) que dificultan el crecimiento de otras bacterias y levaduras que puedan
acompañar a las Neisserias, que crecen formando colonias grises.
COMPOSICIÓN (por litro de agua destilada) – pH 7,1 +/- 0,2:
- Digestión pancreática de caseína: 7,5 g.
- Peptona: 7,5 g.
- Almidón: 1 g.
- Fosfato monopotasio: 1 g.
- Fosfato dipotasio: 4 g.
- NaCl: 5 g.
- Agar: 12 g.
- Hemoglobina: 10 g.
- Inhibidor VCN (Vancomicina 300 g/ml, Colistina 750 g/ml y Nistatina 1.250 UI/ml): 10
ml.
- Complemento enriquecimiento (Vitamina B12, L-Glutamina, Adenina, PABA, L-Cistina,
NAD, Glucosa…): 10 ml.

4.6. AGAR CLED (Cystine-Lactose-Electrolyte-Deficient):

Se emplea mucho para el cultivo de orina.

Contiene azul de bromotimol como indicador de pH, el cual vira a amarillo cuando el pH baja
debido a la fermentación de la lactosa. Está enriquecido con cistina para favorecer el crecimiento
de enterobacterias (causantes de infecciones del tracto urinario). Al ser un medio deficiente de
electrolitos dificulta el movimiento expansivo de Proteus spp. haciendo más fácil el aislamiento
del resto de bacterias.
COMPOSICIÓN (por litro de agua destilada) – pH 7,3 +/- 0,2:
- Digerido pancreático de gelatina: 4 g.
- Digerido pancreático de caseína: 4 g.
- Extracto de carne bovina: 3 g.
- Lactosa: 10 g.
- L-cistina: 0,128 g.
- Azul de bromotimol: 0,02 g.
- Agar: 15 g.

4.7. AGAR SALMONELLA-SHIGELLA (SS) Y AGAR HEKTOEN:

Diseñados para el aislamiento y diferenciación de las colonias de Salmonella spp. y Shigella

spp., causantes de diarreas.

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Contienen sales biliares y verde brillante que inhiben el desarrollo de bacterias grampositivas,
el de la mayoría de los coliformes (muy abundantes en heces), así como el desarrollo invasor de
Proteus spp. También contienen lactosa (ambas se comportan como no fermentadoras dejando
una coloración transparente amarillenta en SS y azul verdoso en Hektoen) y tiosulfato de sodio
(en bacterias productoras de ácido sulfhídrico, como son la Salmonella spp. y Shigella spp.,
permite la formación de sulfuro de hierro, evidenciándose como un punto negro en las colonias).

COMPOSICIÓN AGAR SS (por litro de agua destilada) – pH 7 +/- 0,2:

- Pluripeptona: 5 g.
- Extracto de carne: 5 g.
- Mezcla de sales biliares: 8,5 g.
- Lactosa: 10 g.
- Citrato de sodio: 8,5 g.
- Tiosulfato de sodio: 8,5 g.
- Citrato férrico: 1 g.
- Agar: 13,5 g.
- Verde brillante: 0,00033 g.
- Rojo neutro: 0,025 g.

COMPOSICIÓN AGAR HEKTOEN (por litro de agua destilada) – pH 7 +/- 0,2:

- Peptona: 12 g.
- Extracto de levadura: 3 g.
- Sales biliares: 9 g.
- Lactosa: 12 g.
- Sacarosa: 12 g.
- Salicilina: 2 g.
- NaCl: 5 g.
- Tiosulfato sódico: 5 g.
- Citrato férrico amónico: 1,5 g.
- Agar: 14 g.
- Azul de bromotimol: 0,065 g.
- Fucsina ácida: 0,1 g.

4.8. AGAR SKIRROW Y AGAR BUTZLER:

Son medios selectivos para aislar Campylobacter spp. a partir de muestras de heces (causante
de diarreas).
Son medios enriquecidos con sangre que, además de aportar nutrientes, destruye los radicales
tóxicos producidos durante la exposición al aire. Contienen antimicrobianos para inhibir el
crecimiento de bacterias grampositivas (vancomicina en el agar Skirrow y bacitracina y cefalotina
en el agar Butzler), numerosos gramnegativos (polimixina B en el agar Skirrow y colistina y
novobicina en el agar Butzler), y hongos (cicloheximida en el agar Butzler).

COMPOSICIÓN AGAR SKIRROW (por litro de agua destilada) – pH 7 +/- 0,2:

- Infusión de músculo cardíaco: 2 g.
- Digerido pancreático de caseína: 13 g.
- Extracto de levadura: 5 g.
- NaCl: 5 g.
- Vancomicina: 0,01 g.
- Trimetoprim: 0,005 g.
- Polimixina B: 2.500 UI.

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 - Agar: 15 g.
- Sangre de caballo lisada: 7%.

COMPOSICIÓN AGAR BUTZLER (por litro de agua destilada) – pH 7 +/- 0,2:

- Extracto de carne: 10 g.
- Peptona: 10 g.
- NaCl: 5 g.
- Novobicina: 0,005 g.
- Bacitracina: 25.000 UI.
- Colistina: 10.000 UI.
- Cefazolina: 0,015 g.
- Cicloheximida: 0,05 g.
- Agar: 12 g.
- Sangre de caballo: 7%.

4.9. AGAR MUELLER-HINTON:

Es el medio universalmente aceptado para testar la sensibilidad de una bacteria a antibióticos,

se debe a que:
- Es un medio no selectivo y no diferencial que permite el crecimiento de la mayoría de los
microorganismos.
- Contiene almidón, con capacidad de absorber las toxinas liberadas por las bacterias
evitando que interfieran con los antibióticos.
- Facilita la difusión de los antibióticos debido a que su contenido en inhibidores de algunos
antimicrobianos, como las sulfamidas, el trimetoprim y las tetraciclinas, es muy bajo.
- Se elabora con nutrientes (infusión de carne y peptona ácida de caseína) seleccionados
para dar la mayor transparencia posible al medio.
- Presenta buena reproducibilidad en las pruebas de sensibilidad a antibacterianos.
Cuando se enrique en sangre de carnero se convierte en un medio adecuado para la realización
de pruebas de sensibilidad a Streptococcus spp. y otros grampositivos exigentes.
COMPOSICIÓN (por litro de agua destilada) – pH 7,3 +/- 0,2:
- Infusión de carne: 300 g.
- Peptona ácida de caseína: 17,5 g.
- Almidón: 1,5 g.
- Agar: 15 g.

4.10. AGAR BRUCELLA:

Es un medio diseñado para el aislamiento y crecimiento de Brucella spp., bacteria anaerobia

causante de la brucelosis, trasmitida por contacto directo con animales infectados o por ingestión
de su carne o productos lácteos.
Se emplea una versión suplementada con hemina y vitamina K1, como medio de aislamiento
de bacterias anaerobias exigentes, como Bacteroides spp., Clostridium spp., Fusobacterium spp.
y Porphyromonas spp.
COMPOSICIÓN (por litro de agua destilada) – pH 7,2 +/- 0,2:
- Tripteína: 10 g.
- Peptona de carne: 10 g.
- Glucosa: 1 g.

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 - Extracto de levadura: 2 g.
- NaCl: 5 g.
- Bisulfito de sodio: 0,1 g.
- Hemina: 0,005g.
- Vitamina K1: 0,01 g.
- Agar: 15 g.
- Sangre: 5%.

4.11. AGAR BACTEROIDES BILIS ESCULINA (BBE):

Es un medio selectivo y diferencial, destinado al aislamiento e identificación presuntiva de

bacterias del género Bacteroides spp., bacteria anaerobia habitualmente resistente a diversos
antibacterianos.
Permite el crecimiento de la mayoría de los anaerobios estrictos, pero en el caso de Bacteroides
spp., al hidrolizar la esculina a glucosa y esculetina, permite que la esculetina reaccione con una
sal férrica presente en el medio para producir el complejo marrón/negro característico que facilita
su diferenciación.
COMPOSICIÓN (por litro de agua destilada) – pH 7 +/- 0,2
- Digerido pancreático de caseína: 14,5 g.
- Digerido papaico de harina de soja: 5 g.
- NaCl: 5 g.
- Esculina: 1 g.
- Citrato férrico de amonio: 0,5 g.
- Bilis de buey: 15 g.
- Hemina: 0,01 g.
- Amikacina: 0,075 g.
- Agar: 14 g.
- Factores de crecimiento: 1,8 g.

4.12. AGAR SABORAUD:

Medio general para hongos debido a su pH ácido (5,6). Puede hacerse selectivo con
cloranfenicol y gentamicina para inhibir el crecimiento de bacterias, y con cicloheximida
(actidiona) como inhibidor de ciertos hongos, facilitando el crecimiento de cándidas y
dermatofitos.
COMPOSICIÓN (por litro de agua destilada) – pH 5,6 +/- 0,2
- Digerido pancreático de caseína: 5 g.
- Peptona de tejido digestivo: 5 g.
- Dextrosa: 40 g.
- Cloranfenicol: 0,5 g.
- Actidiona (cicloheximida): 0,05 g.
- Agar: 15 g.

4.13. CALDO TIOGLICOLATO:

Permite el crecimiento de cualquier tipo de microorganismo. Se emplea para comprobar la

esterilidad de los antibióticos, alimentos, prótesis y muestras de cualquier tipo.

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Es un medio semisólido nutritivo a base de extracto de levadura, caseína, L-cistina para
favorecer el crecimiento de enterobacterias (coliformes) y agar para favorecer el crecimiento de
anaerobios, pues reduce la entrada de oxígeno. La dextrosa promueve el crecimiento más
rápido de microorganismos.
El tioglicolato sódico disminuye el potencial de óxido-reducción del medio y neutraliza el efecto
antibacteriano de los conservantes mercuriales que pueda llevar la muestra. La resazurina
indica el estado de oxidación o anaerobiosis.
COMPOSICIÓN (por litro de agua destilada) – pH 7,1 +/- 0,2
- Extracto de levadura: 5 g.
- Caseína: 15 g.
- Dextrosa: 5,5 g.
- NaCl: 2,5 g.
- L-cistina: 0,5 g.
- Tioglicolato sódico: 0,5 g.
- Agar: 0,75 g.
- Resazurina: 0,001 g.

4.14. AGAR KLIGER:

Medio de cultivo frecuentemente empleado para la detección de enterobacterias en función de

la fermentación de lactosa y la glucosa y la producción de ácido sulfhídrico y gas.
En la parte alta del tubo queda la lactosa y en el fondo la glucosa, lo que permite diferenciar
aquellos microorganismos fermentadores de la lactosa de los que solo fermentan la glucosa. El
rojo fenol es el indicador de pH, dando una coloración amarilla cuando el medio se acidifica
(fermentación del azúcar).
Los microorganismos que solo fermentan la glucosa la consumen rápidamente y una vez agotada
comienzan a consumir los péptidos produciendo la alcalinización del medio (parte superior
alcalina rosa).
Los microorganismos que fermentan la lactosa y la glucosa comienzan consumiendo la glucosa
libre, y una vez agotada, desarrollan la maquinaria enzimática necesaria para la fermentación de
la lactosa, acidificando el medio hasta dejarlo todo amarillo.
El tiosulfato de sodio actúa como sustrato de la respiración anaerobia, dando lugar a la
producción de ácido sulfhídrico. El citrato de hierro y amonio aporta iones de hierro que se van
a combinar con el ácido sulfhídrico para formar sulfuro de hierro, de color negro.

VISUALIZACIÓN INTERPRETACIÓN

Parte superior ácida y fondo ácido Fermenta la lactosa y la glucosa

Parte superior alcalina y fondo ácido Fermenta solo la glucosa

Parte superior alcalina y fondo alcalino No fermenta azúcares

Presencia de burbujas o ruptura del medio Producción de gas

Ennegrecimiento del medio Producción de ácido sulfhídrico

COMPOSICIÓN (por litro de agua destilada) – pH 7,3 +/- 0,2

- Peptona de carne: 13 g.

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 - NaCl: 5 g.
- Lactosa: 10 g.
- Tripteína: 10 g.
- Glucosa: 1 g.
- Citrato de hierro y amonio: 0,5 g.
- Tiosulfato de sodio: 0,3 g.
- Rojo fenol: 0,025 g.
- Agar: 15 g.

4.15. AGAR NOVY-McNEAL-NICOLLE (NNN):

Medio bifásico que consta, por una parte, de agar sangre muy nutritivo que permite el
crecimiento de protozoos flagelados (Leishmania y Trypanosoma), y por otra parte, de una
solución líquida. Las muestras son inoculadas e incubadas en la fase líquida del medio, lo que
favorece el desarrollo del parásito en su forma extracelular o promastigote (como si estuviera en
el vector, mosquito para Leishmania y mosca o chinche para Trypanosoma).

4.16. OTROS MEDIOS DE CULTIVO:

Existen medios elaborados en función de los requerimientos específicos del microorganismo,

haciéndose más selectivos:

Staphylococcus Medio Baird Parker

Agar manitol salado

Medio Chapman

Agar Dnasa

Neisseria Agar chocolate + suplemento VX

Thayer Martin

Medio New York city

Bordetella Medio Bordet Gengou (en cámara húmeda)

Bacteroides Agar/caldo Scheler

Agar SNVS

Medio KVBA

Medio BBE

Clostridium Agar TSN

Agar CCF

Agar/caldo Scheler

Medio reforzado para Clostridium

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 Micobacterias Agar Lowestein Jensen

Agar Lowestein piruvato

Medio Colestos

Medio líquido MGIT

 Para el aislamiento de microorganismos halotolerantes (microorganismos no halófilos

capaces de crecer tanto en ausencia como en presencia de sal) como Staphylococcus
spp., y Vibrio spp., se pueden emplear medios con elevadas concentraciones de sales.
 Para el aislamiento de Mycobacterium se emplean medios con inhibidores de la flora
acompañante (verde de malaquita) y suplementados con glicerina y agregado de huevo
para favorecer el crecimiento de micobacterias. Los medios Lowestein son los únicos
con base de huevo y eso hace que sean esterilizados mediante tindalización.
 Para el aislamiento de Clostridium difficile se emplean medios selectivos como el CCF
con cicloserina y cefoxitina como antibacterianos para inhibir el crecimiento de la
microbiota intestinal y rojo neutro como indicador.
 El medio BCYE es un medio suplementado con L-cistina y pirofosfato férrico que permite
el crecimiento y enriquecimiento de especies de Legionella. Cuando se le añade
polimixina B, vancomicina y anisomicina es selectivo para Legionella y Nocardia, ya
que inhibe bacterias gramnegativas, grampositivas y levaduras respectivamente.
 Para aumentar la sensibilidad en la detección de Shigella spp., se emplean medios
como el XLD que lleva xilosa como azúcar, ya que prácticamente todas las endobacterias
lo fermentan a excepción de Shigella. Además, lleva lisina que evita que Salmonella
fermente la xilosa, facilitando su diferenciación.
 El medio Diamond favorece el crecimiento y multiplicación de Trichomonas vaginalis.
La incorporación de agar al medio limita a la porción superior del tubo a la mayoría de
los microorganismos contaminantes, mientras que ayuda a mantener las condiciones
microaerófilas en el fondo del tubo donde se encuentra Trichomonas.
 Los medios para hemocultivo favorecen el crecimiento de bacterias presentes en la
sangre. Se utilizan para detectar bacteriemia. Existen dos tipos: para bacterias aerobias
y para bacterias anaerobias.
 También hay medios diseñados para seleccionar a aquellas bacterias resistentes a una
familia de antibióticos, de manera general, cuando en el medio crecen todas las
bacterias resistentes a un antibiótico sin especificar qué mecanismo de resistencia es
responsable de dicha resistencia, o de manera específica cuando se pretende que solo
crezcan aquellas bacterias que expresan un mecanismo de resistencia concreto. Son
poco sensibles y pueden dar falsos positivos. Se emplean como método de screening
con la intención de detectar aquellas sospechosas sobre las que realizar pruebas más
sensibles. Suelen ser medios cromogénicos como el medio para BLEE, el medio CARBA
o el de MRSA.

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