Introducción a la histología y

técnicas histológicas básicas

La histología tambien llamada anatomía microscópica es el estudio de las estructuras
microscópicas de los tejidos y órganos del cuerpo.
No se centra simplemente en su estructura microscópica del cuerpo, si no que tambien
sus aspectos funcionales. Se relaciona con los campos de la biología celular,
bioquímica, fisiología, embriología, anatomía macroscópica y anatomía patológica.

División de la histología
General Específica

Tejido epitelial Aparatos y sistemas

Tejido muscular

Tejido nervioso

Tejido conectivo

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 La microscopia óptica (para visualizar preparados histológicos) y la microscopia
virtual (para visualizar muestras microscópicas digitalizadas en la pantalla de una
computadora o dispositivo móvil) son los métodos que se enseñan con mayor
frecuencia en los cursos de histología para la exploración de células, tejidos y órganos.

Biosias: Células juntas → Formol Citologia: Células separadas →

Alcohol 96%
Escisionales

Incisionales

Por sacabocado

Por aguja de corte

Técnica histológica
Fijador: Formol
Formol al 10% para los tejidos

Primeras 4hrs después de extraerlo para fijar

24 hrs en formol para cortar

💡 Formol + Hemoglobina = Hemogleina (color cafe)

Microscopia óptica
Preparación de los tejidos

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 Entre las etapas necesarias para preparar tejidos se encuentran:

1. Fijación

2. Deshidratación y aclarado

3. Inclusión

4. Corte

5. Montaje y tinción de cortes

Fijación: Mantiene su arquitectura normal. Los agentes de fijación más utilizados en

microscopia óptica son el formol y la solución de Bouin.

Deshidratación y aclarado: Después de la fijación la muestra se lava (primero con

alcohol de 50% y después paso a paso, hasta lllegar a alcohol al 100%) y se
deshidrata. Posteriormente se trata con xileno (miscibles en alcohol y parafinas), este
proceso recibe el nombre de aclarado, dado que el xileno hace que el tejido se vuelva
transparente.

Inclusión: Los tejidos se incluyen en un medio adecuado y después se seccionan en

cortes finos. En microscopia óptica el medio de inclusión más habitual es la parafina.
Se coloca el tejido en parafina fundida hasta que quede totalmente infiltrado y después
se introduce en un pequeño recipiente (recubierto con parafina fundida) y se deja que
se endurezca hasta formar un bloque de parafina que contiene dicho tejido.

Corte: Los bloques de tejido endurecidos se recortan para retirar el exceso de material
de inclusión y después se montan para proceder a su corte en un micrótomo (en el cual
se obtienen cortes finos del bloque). El grosor de corte es de aproximadamente 5-10
µm y cada corte se monta sobre un portaobjetos de vidrio.

Montaje y tinción: Los cortes de parafina se montan en portaobjetos de vidrio y

después se tiñen con colorantes hidrosolubles que permiten la diferenciación de los
diversos componentes celulares. Primero es necesario retirar la parafina de los cortes
montados, después de lo cual se rehidrata y se tiñe al tejido. Una vez realizada la
tinción, se vuelve a deshidratar el corte de manera que el cubreobjetos pueda fijarse de
forma permanente mediante el empleo de un medio de montaje adecuado.

Los colorantes pueden agruparse en las tres clases siguientes:

Componentes ácidos y básicos

Colorantes especializados

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 Sales metálicas

Los colorantes utilizados habitualmente son la hematoxilina y eosina (H y E)

Hematoxilina Eosina

Es una base, que se une Es un ácido que se unen a

preferentemente a los componentes del citoplasma tienen
componentes ácidos como el ADN un pH básico
y ARN
Se tiñen de color rosa
Se tiñen de azul
Son acidófilos
Son básofilos

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 En la H y E, los núcleos son ricos en ácidos y por
lo tanto se tiñen de azul. Las regiones básicas del
El tricrómico de Masson tiñe de azul oscuro
citoplasma adquieren una coloración rosa.
los núcleos, de azul claro el colágeno y de
rosa o rojo el citoplasma

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 La tinción argéntica tiñe de negro las fibras
reticulares (fibras de colágeno de tipo III)

La tinción elástica de Weigert tiñe las fibras

elásticas de color azul.

La hematoxilina férrica tiñe de negro las

estriaciones cruzadas y los nucleos de las
células musculares estriadas y también los
eritrocitos
El reactivo del ácido peryódico de Schiff (tinción
PAS) tiñe las moléculas ricas en glucógeno y los
hidratos de carbono de un color magenta.

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 Las tinciones de Wright y Giemsa se utilizan para Las tinciones de Wright y Giemsa se utilizan
la tinción diferencial de las células sanguíneas. para la tinción diferencial de las células
Los eritrocitos y gránulos eosinófilos se tiñen de sanguíneas. Los nucleos de los leucocitos y
rosa. los granilos básofilos lo hacen de morado y el
citoplasma de los monocitos y los linfocitos se
tiñe de azul.

Microscopio óptico

Los microscopios compuestos están

formados por una configuración
específica de lentes que permiten
alcanzar un gran aumento y buena
resolución de los tejidos visualizados.

Dado que los microscopios ópticos

actuales emplean configuraciones
especificas de lentes para aumentar una
imagen, se conocen como microscopios
compuestos.

Lente condensadora

Aumento de 4, 10 y 40 veces

Técnicas de visualización avanzadas

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 Histoquímica

Es un método de tinción de tejidos que aporta información relativa a la

presencia y la localización de las macromoléculas intercelulares y
extracelulares.

Se aplica en tejidos congelados

Utiliza el reactivo ácido peryódico de Schiff (PAS) que forma un precipitado

color morado con moléculas ricas en glucógeno e hidratos de carbono.

Se aplica en tejidos congelados y puede utilizarse tanto en la microscopia

óptica como en la electrónica.

Inmunocitoquímica

Utiliza anticuerpos y antianticuerpos marcados con fluorocromos para

proporcionar una localización intracelular y extracelular de las macromoléculas
más precisa que la histoquímica.

Necesita el desarrollo de un anticuerpo contra la macromolécula en concreto

que se desea localizar y el marcado del anticuerpo con un colorante
fluoresente, como por ejemplo la fluoresceína o rodamina.

Se conocen dos metodos comunes de marcaje con anticuerpos directo e

indirecto.

Puede utilizarse con muestras para microscopia electrónica mediante el

marcaje del anticuerpo con ferritina.

Directo Indirecto

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 En el método directo, el El procedimiento indirecto se prepara un
anticuerpo que reconoce segundo anticuerpo con marca fluorescente
la macromolécula se contra el anticuerpo primario específico de la
marca con un colorante macromolécula de interés. Una vez el
fluorescente. Se deja, anticuerpo primario ha reaccionado con el
entonces, que reaccione antígeno, se lava la preparación para eliminar el
con la macromolécula y se anticuerpo no unido. Seguidamente se añade el
visualiza el complejo anticuerpo marcado y se hace reaccionar con el
resultante con un complejo original antígeno-anticuerpo, para
microscopio de formar un complejo secundario visible por
fluorescencia. microscopia por fluorescencia.

Autorradiografía

Es un método que utiliza la incorporación de isótopos radiactivos en

macromoléculas, que después se visualizan con el revelado de una lámina
emulsionada.

Utilizada para buscar e investigar una secuencia de acontecimientos

temporales.

En lugar de sellar el tejido con un cubreobjetos se aplica sobre este una capa
fina de emulsión fotográfica.

El tejido se aloja en una caja oscura varios días o semanas, durante los cuales
las partículas emitidas desde el isótopo radiactivo exponen la emulsión en los
puntos de las células en los que se encuentra el isótopo.

Se revela la emulsión y se fija mediante técnicas fotográficas, y se dejan

pequeños granos de plata sobre las partes expuestas de dicha emulsión. A
continuación se tapa la muestra con un cubreobjetos y se observa al
microscopio óptico.

Microscopia electrónica
El empleo de electrones como fuente luminosa en microscopia electrónica permite
lograr un aumento y una resolución muy superiores a los de la microscopia óptica.

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 En los microscopios eléctronicos, unos electroimanes se encargan de enfocar un haz
de electrones.

Microscopio electrónico de Microscopio electrónico de barrido

transmisión
Proporciona una imagen en tres
Utiliza cortes mucho más finos que la dimensiones de la muestra.
microscopia óptica y necesita
La muestra que se desea analizar se
técnicas de precipitación de metales
prepara de un modo especial, de
pesados, en vez de colorantes
manera que permite el depósito de
hidrosolubles, para visualizar los
una fina capa de un metal pesado,
tejidos.
por ejemplo oro o pladio, en su
Se emplean fijadores especiales superficie.
como soluciones tamponadas de
glutaraldehído, paraformaldehído,
tetróxido de osmio y permanganato
de potasio.

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