Automatizacin en Microbiologa Clnica
PhD (c ). Juan Agapito Panta
Atutomatizacin y mtodos rpidos
Estudia la mejora de los mtodos
Aislamiento Deteccin precoz La caracterizacin (identificacin) y La enumeracin de los microorganismos y sus productos
En muestras
Clnicas De alimentos Industriales y ambientales
Mtodos
Automatizados Deteccin de crecimiento
Turbidez Metabolitos radiactivos Impedeancia elctrica Bioluminiscencia
Rpidos
Identificacin
Colorimetria Cromatografa para Ag y metabolitos Mtodos inmunolgicos
Antibiograma
Para identificacin y diagnstico Sistemas manuales Sistemas mecanizados Sistemas inmunolgicos Sistemas moleculares Otras tcnicas
Turbidez
Por densidad ptica Por nefelometra o dispersin de la luz Como indicador de crecimiento y desarrollo Determinar si existe microorganismos en muestras Medicamentos estriles Orinas (deteccin de infeccin clnicamente significativa) Indicador de crecimiento En presencia de inhibidores especficos Sensibilidad a Antibiticos Formato cubetas microdilucin Agitador incubador
Mtodos radiactivos
Produccin de metabolitos radiactivos Un ejemplo Biotec
Produccin de CO2 radiactivo gaseoso Por microorganismos que metabolizan sustancias marcadas con 14 C : glucosa, aminocidos y alcoholes
Hemocultivos
Se analiza produccin de 14C
Impedancia elctrica
Se mide los cambios de impedancia
Las variaciones en el flujo de corriente elctrica que atraviesa el medio en el cual se esta incubando la muestras
Rpido y automtico
Control contnuo Primer signo de variacin No requiere manipulacin
manual ni tcnica (industria alimentaria)
Bioluminiscencia
Basado en luciernagas (reaccin qumica)
Conversin del sutrato luciferina en oxiluciferina y luz Catalizada por la enzima luciferasa con energa proveniente de la desfosforilacon de ATP
Luminmetro (similar al fotmetro)
Mide la luz generada por esta reaccin
Cantidad de luz producida
Es directamente proporcional al ATP presente
Bioluminiscencia
Gen Reporter Deteccin de viabilidad del crecimiento bacteriano por bioluminescencia (Luciferasa) Tambin se ha observado variacin de la intensidad de luz producida por cepas sensibles y resistentes
TM4
luciferina
FTON
ATP
Colorimetra
Pruebas bioqumicas convencionales Cambios de color de los indicadores de pH Presencia de productos finales del metabolismo Clula fotoelctrica Mide cambios de color Combinacin colorimetra + nefelometra Combinacin identificacin + antibiograma
Un ejemplo VITEK
Automatizacin total / rapidez 2-6 hrs Cartuchos o placas
30-45 micropocillos con sustratos
Varios cartuchos
Gram negativos 90 especies Gram positivos 49 especies Anaerobios 80 especies Neisseria y Haemophylus 30 especies
Antibiogramas MIC varias configuraciones Varios modelos
Cromatografa
Diagnstico de enfermedad infecciosa
Mediante identificacin de constituyente antignico Mediante identificacin de productos del metabolismo bacteriano
Cromatografa en fase gaseosa
Anaerobios
Comatografia lquida de alta performancia (HPLC)
Identificacin inmunolgica
Anticuerpos monoclonales Mtodos automatizados
Contrainmunoelectroforsis Nefelometra RIA (Radioinmunoanalisis) ELISA
Ampliamente utilizado Para detectar Ag- Ab Para virus, bacterias, hongos y parsitos
Rpidos
Para identificacin y diagnstico
Multiples pasos
Identificacin convencional Cdigo numrico
Sistema unitario
Ms rpido
API 20E (Enterobacteriaceae)
20 pruebas bioquimicas
Sustancias deshidratadas En 5 8 h prfil de cifras
Biochemical reactions:
API 20E
Enterobacteriaceae + 18-24 h Generate profile #
Biochemical reactions: ENTEROTUBE II 12 tests O/N MICRO-ID & MICRO-ID Listeria* 15 tests 4h
Identificacin automatizada
VITEK (2 6 h) 300 especies clnicas Biolog Microplacas Cataboliza 95 fuentes de C Tetrazolium: indicador de actividad microbiana BBL cristalTM Gram positivo ID Kit
121 G + Entericos y no fermentadores, identificacion de bact Gram aerobias y bacilos gram negativos no fermentadores de glucosa
BIOLOG
Kits inmunolgicos rpidos
Ms tiles cuando
No es posible cultivar (Treponema) Es peligroso (Rickttsias) Es demasiado complejo (Mycobacterium)
Fcil de usar Rpidos Sensibles Especificos
Ejemplos de deteccin de Ag
Estreptococo grupo A en frotis farngeo
Culturette Group A Strep ID kit, Directige
Virus sincitial respiratorio en frotis nasofarngeo VHS (Virus Herpes Simple) en 1-2 minutos En LCR Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae
Bactigen, Directigen
Detectar y confirmar Staphylococcus aureus
Staphaurex en 30 segundos
Ejemplos de detccin de Ac.
Ac. contra VIH
SUDS HIV-1 en 10 minutos
Ac. contra Helicobacter pylori en suero
Quick Vue H pylori Test en 7 minutos LINK H. PYLORI en 5 minuto LINK2 H. PYLORI en 1 minuto
Inmunocromatografia
Microesferas latex
coloreadas (azul)
Ligadas a sustancia (250)
Ag o Ac (Ac Listeria)
Reaccionan con muestra
complejo Ag-Ac migracin lateral
Ac inmovilizado
retiene complejo Ag-Ac evidencia lnea de color
TUBO INDICADOR DE CRECIMIENTO MYCOBACTERIANO (MGIT)
Lectura 7 10 das No radiomtrico No requiere de equipos automatizados Requiere espacio limitado para la incubacin Puede usarse para pruebas de ADN y bioquimicas.
METODOS RADIOMETRICOS (SISTEMABACTEC SEMIAUTOMATIZADO)
Detecta automticamente el crecimiento micobacteriano midiendo la cantidad de 14CO2 producido por la metabolizacin de sustratos (cidos grasos) marcados con 14C
MEDIOS DE CULTIVO BIFASICO NO RADIOMETRICOS (MB-SEPTI-CHECK)
Medio bifsico suplementado : - Chocolate - Lowestein Jeensen - Middlebrook La identificacin es visual sobre el medio slido. Puede observarse pigmento y morfologa
Caldo 7H12
BACTEC 9000
MGIT (Mycobacteria growth indicator tube, B&D) Automatizado Fluorimtrico (Noradiomtrico) Resultados en 5 das a 10 das
