PCR
(Reacción en cadena de la polimerasa)
Alumna : Osorio lino Nayeli
¿Qué es?
•Es una técnica que permite amplificar rápidamente
muestras pequeñas de DNA, es decir, aumentar su
cantidad de modo que sea suficiente para poder
analizarlas.
•Si se comienza con un fragmento de DNA del tamaño
de un gen la PCR puede utilizarse para formar
literalmente miles de millones de copias en solo unas
horas.
LOS NUCLEÓTIDOS:
• adenina (A)
Cebador: es una cadena de ácido • timina (T) La polimerasa es una enzima capaz de
nucleico o de una molécula • guanina (G) transcribir o replicar ácidos nucleicos, que
relacionada que sirve como • citosina (C) resultan cruciales en la división celular
son los cuatro elementos fundamentales del ADN que (ADN polimerasa) y en la transcripción del
punto de partida para la forman pares de bases (A con T y G con C) mediante ADN (ARN polimerasa).
replicación del ADN. enlaces químicos que unen las dos cadenas del ADN. Los
genes son segmentos pequeños de ADN que contienen
información genética específica.
TIPOS DE PCR
PCR in situ: permite la detección de ADN en el mismo lugar de la
muestra, sin tener que procesarla primero con técnicas de
laboratorio.
• PCR en tiempo real
• Permite cuantificar la cantidad de DNA o ARN presentes en
la muestra original, o para identificar con una muy alta
probabilidad, muestras de DNA especificas a partir de su
temperatura de fusión.
• PCR con transcriptasa inversa, Se unas un ARN como molde
inicial en vez de un DNA, y emplea una transcriptasa para
realizar la síntesis de un DNA complementario al ARN.
• PCR anidada:
• consigue amplificar muestras mínimas de ADN a
miles de millones de fragmentos. Es capaz por lo
tanto de detectar trazos minúsculos.
• TODOS LOS METODOS DE PCR CUMPLEN LA MISMA FUNCION
DESNATURALIZACIÓN:
El termociclador aumenta la
temperatura a más de 94°C. A
esta temperatura, se rompen
los enlaces de hidrógeno entre
pares de bases
complementarias que
mantienen unidas las dos
cadenas de ADN. Esto hace
que las dos hebras de los
fragmentos de ADN se
separen.
ALINEAMIENTO: durante este paso la temperatura EXTENSIÓN O ELONGACIÓN DE LA CADENA:
disminuye y está basada en la temperatura de fusión de los
primers (Tm) y puede estar entre 45 a 68°C. Las En esta etapa actúa la polimerasa, tomando el ADN
temperaturas de Tm se pueden optimizarse haciendo una molde para sintetizar la cadena complementaria y
PCR con gradiente de temperatura en 45°C e ir subiendo partiendo del cebador como soporte inicial necesario para
gradualmente cada 5 °C por debajo de la Tm calculada la síntesis de nuevo ADN.
EJEMPLO
GRACIAS
