DEMANDE BIOCHIMIQUE EN OXYGYNE (DBO)n,
Mthode oxymtrique.
Rfrence AFNOR : NF EN 1899-1 Date : mai 1998
Matriel
u Fioles cniques de DBO5 avec leur bouchon.
u Barreau aimant
u Etuve thermostate 20 C
u Fiole jauge de 1 L
u Pipettes jauges et gradues (1 mL et 5 mL)
u Sonde oxymtrique calibre
u Solutions salines C, F, M et P
u NaOH 0,5 mol/L ou HCl 0,5 mol/L.
u Solution contrle d'acide glutamique 150 mg/L et de glucose 150 mg/L
u Suspension d'E. coli de concentration Cs = 1,0.103 E.coli/mL
u Solution d'allyl-thio-ure
u Eau dminralise
u Bassine avec solution d'hypochlorite de sodium 3 Chl (833 mL d'eau de Javel 36
Chl dans 10 L d'eau du robinet)
Mode opratoire
n Echantillon : eau pour laquelle on cherche dterminer la DBO5
n Eau d'ensemencement : cette eau doit contenir des microorganismes, utiliser :
n ERU dcante ou filtre avec DCO < 300 mgO2/L
n suspension d'E. coli de concentration Cs = 1,0.103 E.coli/mL
n Solutions salines : 4 solutions apportant les sels minraux
n Eau de dilution : mlange des dilutions des solutions salines au 1/1000. Cette eau doit contenir 8 mg/L
d'O2 20 C
n Eau de dilution ensemence : eau de dilution contenant un volume d'eau d'ensemencement
n Solution d'essai : eau de dilution ensemence + chantillon
n Solution contrle : solution talon d'acide glutamique 150 mg/L et de glucose 150 mg/L dont la
DBO5 doit tre de 225+-20 mgO2/L.
n Tmoin de respiration endogne : contient tous les ractifs sauf l'chantillon
n Tmoin de nitrification : contient tous les ractifs sauf l'allyl thio-ure
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DEMANDE BIOCHIMIQUE EN OXYGYNE (DBO)n,
Mthode oxymtrique.
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PRPARATION DE LEAU DE DILUTION
Pour chaque litre deau de dilution : 1 litre deau du robinet ajouter :
1 mL de solution de FeCl3, 6 H2O 0,25 g/L (F),
1 mL de solution de sulfate de magnsium heptahydrat 22,5 g/L (M)
1 mL de tampon phosphate (P) (8,5 g KH2PO4 + 21,75 g K2HPO4 + 33,4 g de Na2HPO4, 7 H2O + 1,7 g NH4Cl
dans 1 L).
Remarque : du CaCl2 27,5 g/L (C) est inutile avec une eau 35F.
Amener et maintenir la solution obtenue 20C et larer jusqu ce quelle contienne au moins 8 mg/
L doxygne dissous.
La laisser ensuite au repos pendant 1 heure environ, en rcipient dbouch.
Ajouter ensuite 5 20 mL deau densemencement (5 mL pour la suspension d'E. coli de concentration
Cs = 1,0.103 E.coli/mL ) par litre deau de dilution.
Cette eau doit tre maintenue 20C et utilise dans la journe.
PRPARATION DE LESSAI
Vrifier que le pH de lchantillon est compris entre 6 et 8. Neutraliser si ncessaire avec NaOH 0,5
mol/L ou HCl 0,5 mol/L.
Estimer la DBO5 attendue avec les donnes suivantes :
Eaux uses : DBO5 = 0,35 0,65 x DCO, rejet : DBO5 = 0,2 0,35 x DCO.
On donne galement le tableau de la norme :
DBOn attendue (en mgO2/L) Facteur de dilution (Vt/Ve) Exemple d'eau
36 Entre 1,1 et 2 Eau de rivire (R)
4 12 2 R ou eaux uses urbaines traites biologiquement (E)
10 30 5 R, E
20 60 10 E
40 120 20 Eaux uses urbaines dcantes ou effluent industriel faiblement
contamin (S)
100 300 50 S ou eaux uses urbaines brutes (C)
200 600 100 S ou C
400 1200 200 Effluent industriel fortement contamin ou C
1000 3000 500 I
2000 6000 1000 I
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Dterminer la dilution raliser sur lchantillon de faon avoir une consommation en
O2 comprise entre 1/3 et 2/3 de la concentration en O2 initiale (voir exemple ci-dessous).
TALON= CONTRLE ERU REJET
DBO 5 attendue (mgO2/l) 225 67,2 128,4 8,2 14,35
[O2]ini (mgO2/l) 10,2 10,61 10,19
1/3[O2]ini (mgO2/l) 3,4 3,5 3,4
2/3[O2]ini (mgO2/l) 6,8 7,1 6,8
Fd 50 20 2
Vt (mL) 1000 1000 1000
Ve (mL) 20 50 500
Introduire dans une fiole jauge (Vt = 500 mL par ex.) un volume dchantillon (Ve) puis 2 mL dAllyl
Thio Ure (inhibiteur de nitrification)et amener au volume final avec de leau de dilution ensemence.
Si le facteur de dilution est > 100, procder des dilutions en cascade.
Remplir compltement un flacon dincubation et boucher hermtiquement en veillant quil ne reste
aucune bulle dair lintrieur.
Mesurer loxygne dissous avec un oxymtre et noter la valeur C1.
Prparer de la mme manire 2 autres mlanges correspondant des dilutions encadrant la premire.
Placer les flacons dans l'tuve rgle 20C labri de la lumire pendant 120 heures.
Mesurer ensuite loxygne dissous qui reste dans les flacons et noter C2.
PRPARATION DU TMOIN
Remplir 1 nouveau flacon avec leau de dilution et 2 mL dATU.
Mesurer loxygne dissous, noter C3
Boucher hermtiquement. Placer le flacon dans lenceinte rgle 20C pendant 120 heures puis
mesurer loxygne dissous qui reste dans le flacon. Noter C4
La consommation doxygne au cours de ce tmoin ne doit pas dpasser 1,5 mgO2/L. Si tel ntait pas le
cas cela indiquerait que leau de dilution na pas apporte un ensemencement convenable et il
conviendrait de modifier en consquence sa prparation.
CONTRLE
Raliser un essai avec 20 mL de solution dacide glutamique (150 mg/L) et de glucose
(150 mg/L). Ajouter 2 mL dATU et complter 1 L.
DBO5 attendue = 210 +/- 40 mgO2/L DBO7 = 225 +/- 40 mgO2/L
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EXPRESSION DES RSULTATS
Dterminer parmi les dilutions, celle(s) qui est(sont) telle(s) que :
E0/3 < E0-E5 < 2xE0/3
La demande biochimique en oxygne, exprime en mg/L, est donne par lexpression :
DBO5 =[ (C1-C2) [(Vt-Ve)/Vt] (C3-C4)] Vt/Ve
C1 : concentration en O2 dans la dilution de l'chantillon au temps O
C2 : concentration en O2 dans la dilution de l'chantillon au temps 5 jours
C3 : concentration en O2 dans le blanc (tmoin de respiration endogne) au temps O
C4 : concentration en O2 dans le blanc (tmoin de respiration endogne) au temps 5 jours
Ve : volume d'chantillon utilis pour la prparation de la dilution
Vt : volume total de la solution d'essai
Prcautions
n Risque biologique partir du moment o l'eau de dilution est ensemence : manipuler en respectant les
rles d'asepsie, dcontaminer la verrerie l'eau de Javel, la sonde oxymtrique (mais la membrane )
l'alcool
n Allyl-thio-ure : toxique uniquement forte concentration
Points critiques
La verrerie doit tre rince et dcontamine
Les mesures de concentration en dioxygne doivent tre ralises avec une sonde fonctionnelle
correctement calibre. La valeur est releve aprs exactement une minute de raction entre la sonde et
le milieu sous agitation.
Qualit
Limites dapplication : entre 3 mg.L-1 et 6000 mg.L-1.
Justesse : 2 mgO2.L-1; fidlit : 1,5 mgO2.L-1; limite de dtection :2 mg O2.L-1 , limite de quantification
: 3 mgO2.L-1 (arrt du 17/09/2003)
Dchets
A dcontaminer
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