UNIVERSITE DE MONASTIR
FACULTE DE PHARMACIE DE MONASTIR
EPU DE BIOCHIMIE
Exploration des protéinuries
Dr Asma Ben Abdelaziz (1)
Dr Nada Yousfi (2)
(1) Laboratoire de Biochimie –Hôpital sahloul
(2) Laboratoire de biologie médicale- Hôpital régional de Ben Arous
Objectifs
Connaitre les différents types de protéinurie
Connaitre les méthodes de dosage de la protéinurie
et la microalbuminurie
Connaitre les techniques qualitatives d ’exploration
d’une protéinurie
Plan
Protéinurie Physiologique
Classification des protéinuries
Détection et quantification de la protéinurie
Typage de la protéinurie
Plan
Protéinurie Physiologique
Classification des protéinuries
Détection et quantification de la protéinurie
Typage de la protéinurie
5
La protéinurie physiologique
Au niveau rénal, les protéines plasmatiques subissent 2 phénomènes successifs : une
filtration glomérulaire et un métabolisme de réabsorption/catabolisme tubulaire
Image source: Madhero88 https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Physiology_of_Nephro
Protéines faibles Protéines taille Protéines de grande taille >70kD
taille <5kD moyenne <70kD
Le coefficient de
tamisage
glomérulaire des
protéines
5kD 70kD
Passage libre Filtration dépendante de la Absence de passage
taille et de la charge
DELANGHE SEPTEMBER 2021 (positive>neutre>négative)
EFLM Syllabus Course
7
La protéinurie physiologique
• Protéinurie <150 mg/24H ( <130mg/24H)
• Albuminurie < 30 mg/24H
• Enfant <4mg/m2/h ou <100/m2/24H
La mucoprotéine de Tamm-Horsfall,
protéine synthétisée et sécrétée
spécifiquement dans la branche ascendante
large de l’anse de Henlé
D’après T. Le Bricon. ABC
Plan
Protéinurie Physiologique
Classification des protéinuries
Détection et quantification de la protéinurie
Typage de la protéinurie
Classification de la protéinurie
Les protéinuries
Intermittente Pré rénale Rénale Post rénale
HTA ,
Hyperthermie Lésion
Orthostatique Lésion du
Concentration glomérulaire ou
, d’effort, post tubulaire ( ou les
tractus
prandial protéique urogénital
élevée = deux )
protéinurie de
surcharge
Classification de la protéinurie
Les protéinuries
Intermittente Pré rénale Rénale Post rénale
HTA ,
Hyperthermie Lésion
Orthostatique Lésion du
Concentration glomérulaire ou
, d’effort, post tubulaire ( ou les
tractus
prandial protéique urogénital
élevée = deux )
protéinurie de
surcharge
D’apres sebia 2014 Electrophorèse et exploration des protéinuries
Mécanisme de la protéinurie de surcharge
et de la protéinurie rénale
Lésion mixte
Protéinuries Caractéristiques Situations cliniques
Fonctionnelles Transitoires, modérées, disparaissent HTA, insuffisance cardiaque, hyperthermie,
avec la cause, absence d’atteinte effort prolongé, stress, grossesse,
rénale. orthostatisme, post-prandiale.
Glomérulaires Massives, prépondérance de Maladies systémiques (carcinomes,
rénales macroprotéines, dues à une altération hémopathies malignes, lupus érythémateux
de la FG. systémique, toxémie gravidique, diabète),
infectieuses, rénales (syndrome néphrotique,
néphropathies immunologiques), médicaments,
toxiques.
Tubulaires Permanentes, modérées, rares, Maladies congénitales (Wilson, galactosémie,
rénales souvent transitoires, dues à une acidose tubulaires), intoxications, myélome,
réabsorption incomplète des lupus érythémateux systémique.
protéines de faible PM suite à une
lésion tubulaire ou à un dépassement
de la réabsorption.
Mixtes Massives, composition complexe, Pyélonéphrite, glomérulonéphrites chroniques,
atteinte glomérulaire et tubulaire, atteinte rénale myélomateuse, accident
peuvent s’associer à une insuffisance vasculaire rénal.
rénale
Pré-rénales ou Hyperproduction de protéines de Chaînes légères libres ou protéinurie de Bence-
de surcharge faible PM, dépassement des Jones (myélome, Waldenström), hémopathies
capacités de RT, protéinurie très malignes, carcinome bronchique, myolyse et
variable (0,3 – 30 g/24h). myosite, syndromes hémolytiques, fibrinolyses.
Post-rénales Quantitativement et qualitativement Lithiase urinaire, infection uro-génitale, cancer
variables, dues à des lésions du des voies urinaires.
tractus urinaire. 68
Plan
Protéinurie Physiologique
Classification des protéinuries
Détection et quantification de la protéinurie
Typage de la protéinurie
Détection et quantification
de la protéinurie
Pré analytique :
Urines de 24 h (+ 4 °C, antiseptique) => Protéinurie de 24H
Miction ponctuelle :
protéines (mg/L),
protéines/créatinine (mg/mmol) => une bonne corrélation avec la proteinurie de 24h
Protéinurie fractionnée :
le matin, à jeun vide sa vessie => allongé 1 h Pvt 1 => debout 1 h Pvt2 =>effort Pvt3=>
repas vide sa vessie Pvt3
1 2 3 4
+ + + + PU permanente
- + + + PU orthostatique
- - + - PU d’effort PU intermittentes
- - - + PU postprandiale
Dépistage de la protéinurie
à la bandelette
Urine non centrifugée
seuil de détection 150 mg/l
Inconvénients :
Lecture subjective : opérateur-dépendant (solution : lecteur de bandelettes automatique )
Faux négatifs/sous estimation :
la réactivité est fortement affectée par la composition protéique : très sensible à l’albumine, peu ou pas aux
chaînes légères libres
Faux positifs :
urine fortement alcaline.
présence de sang (hématurie, règles)
présence de pus (infection urinaire) ou de sécrétions prostatiques ou menstruation
Avantages :
Pratiqué au lit de patient
Dépistage
Une fois décelée, il est important de la caractériser la protéinurie de façon quantitative et qualitative
afin d'en déterminer l'étiologie
Dosage de la protéinurie totale
Méthodes par précipitation en milieu alcalin (chlorure de benzéthonium) avec
détection par néphélémétrie ou turbidimétrie
Avantage :
Moins sensible à la composition protéique de l'urine
Inconvénients :
Interférences avec certains médicaments
Méthodes colorimétriques : le rouge de pyrogallol (méthode de Fujita, 1983), le
violet de pyrocatéchol (chimie sèche)
Avantages (rouge de pyrogallol) :
Meilleur compromis actuel (sensibilité, spécificité, praticabilité, coût)
Domaine de mesure : 0,05 - 4 g/L
Inconvénients:
Réactivité non homogène les différents protéines (en particulier les chaînes légères
Problème du choix du calibrant: albumine (forte réactivité),globulines (faible réactivité) ou
mélange albumine/globulines (réactivité intermédiaire) => solution: addition de SDS dans le réactif
= détergent anionique diminue la réactivité des colorants vis à vis de l'albumine et augmente celle
des globulines de manière dose dépendante => meilleure identité de réaction entre albumine et
globlines
Plan
Protéinurie Physiologique
Classification des protéinuries
Détection et quantification de la protéinurie
Typage de la protéinurie
Typage des protéinuries
Méthodes spécifiques immunologiques (dosage des
protéines spécifiques )
Méthodes globales électrophorétiques
Typage des protéinuries
Méthodes spécifiques immunologiques (dosage des
protéines spécifiques )
Méthodes globales électrophorétiques
Méthodes spécifiques immunologiques
La présence et/ ou l’augmentation de certaines
protéines au niveau des urines peut donner une idée sur:
Le niveau de la lésion ( rénale, post rénale , pré rénale )
La nature de la lésion : glomérulaire , tubulaire…
Méthodes spécifiques immunologiques
Albuminurie : définition
24 h Recueil sur 4h Échantillon d’urine
(mg/j) (g/min) (g/mg
de créatinine) *
Alb. normale < 30 < 20 < 30
Microalbuminurie 30 - 300 20 – 200 30 - 300
Protéinurie > 300 > 200 > 300
L’utilisation du rapport microalbuminurie / créatinine urinaire a été
validée par la HAS en 2011 comme une alternative à la
microalbuminurie . Il permet de s’affranchir au recueil des urines de
24H et remédier aux variations physiologiques (activité physique)
Albuminurie : intérêt
Indicateur de la
qualité de la de
la barrière
glomérulaire
Albuminurie : intérêt
Marqueur de
diagnostic et
du suivi de
la néphropathie
du sujet
diabétique
Albuminurie :Méthodes de dosage
Méthode turbidimétrique
Méthode néphélémétrie
Bandelettes urinaires ??
Rapport EEQ Biorad novembre 2021
3
Typage des protéinuries
Méthodes spécifiques immunologiques (dosage des
protéines spécifiques )
Méthodes globales électrophorétiques
Méthodes globales électrophorétiques
Cette exploration est réalisée généralement en deux temps :
Electrophorèse des protéines urinaires: dépistage / caractérisation
de la protéinurie
Immunofixation : pour caractériser le composant monoclonal, Ig
complète et ou chaine légère
Méthodes globales électrophorétiques
Cette exploration est réalisée généralement en deux temps :
Electrophorèse des protéines urinaires: dépistage / caractérisation
de la protéinurie
Immunofixation : pour caractériser le composant monoclonal, Ig
complète et ou chaine légère
Electrophorèse des
protéines urinaires
Hydragel Hydragel Urine Electrophorèse
Hydragel HR®
Protéinurie® Profil(e)® capillaire
Electrophorèse sur Hydragel
Protéinurie® (Sebia)
1. Les différentes protéines : sont traités par
un détergent anionique « le dodécyl
sulfate de sodium (SDS) » les différentes
protéines prennent la même charge
2. Séparation des protéines en fonction de
leurs poids moléculaires sur le gel
d’agarose à 50 g/L hautement réticulé
3. La coloration au violet acide permettent la
détection des protéines
4. les protéines individuelles d'origine
tubulaire (<65-70 kDa) et d'origine
glomérulaire (> 65 à 70 kDa) sont
clairement séparés.
5. La protéinurie peut être non seulement
détectée mais également classée en
fonction des protéines détectées
Electrophorèse sur Hydragel HR® (Sebia)
1. Les différentes protéines : sont traités
par un tampon alcalin (barbital, pH
8,6)
2. Séparation des protéines en fonction
de leurs mobilités éléctrophorétiques (
rapport charge/taille )
3. La coloration au violet acide
permettent la détection des protéines
D’apres sebia 2014 Electrophorèse et exploration des protéinuries
Electrophorèse sur Hydragel HR® (Sebia)
1. Les différentes protéines : sont traités
par un tampon alcalin (barbital, pH
8,6)
2. Séparation des protéines en fonction
de leurs mobilités éléctrophorétiques (
rapport charge/taille )
3. La coloration au violet acide
permettent la détection des protéines
Morrison, T., R. A. Booth, K. Hauff, P. Berardi and A. Visram (2019). "Laboratory assessment of
multiple myeloma." Adv Clin Chem 89: 1-58 D’apres sebia 2014 Electrophorèse et exploration des protéinuries
Electrophorèse sur Hydragel Urine
Profil(e)® (Sebia)
1. Même principe que Hydragel HR
2. La coloration au violet acide
permettent la détection des
protéines
3. Premier puit (précipitation non
spécifique de toutes les protéines)
4. Sur les autres puits , on réalise une
immunofixation des protéines
permettant une aide au typage
(glomérulaire vs. tubulaire) et
une identification des
composants monoclonaux Anti alpha 1 Microglobuline Anti alpha 2 Maroglobuline
éventuels Anti RBP
Anti beta 2 microglobuline
Anti albumine
Raidelet, L. and T. L. Bricon (2013). "Exploration de la protéinurie au laboratoire." Revue Francophone des Laboratoires 2013(451): 75-82.
Séparation par électrophorèse capillaire
Les protéines urinaires sont séparées dans des capillaires de silice en
fonction de leur mobilité électrophorétique propre dans un tampon alcalin
de pH donné et d’un flux électro-osmotique plus ou moins important.
Les fractions protéiques urinaires sont directement détectées à
l’absorbance spécifique de 200 nm et quantifiées par un pic.
(données Sebia™).
Méthodes globales électrophorétiques
Cette exploration est réalisée généralement en deux temps :
Electrophorèse des protéines urinaires: dépistage / caractérisation
de la protéinurie
Immunofixation : pour caractériser le composant monoclonal, Ig
complète et ou chaine légère
Immunofixation : Quand ?
IF sebia , 2014
Immunofixation : Comment?
Principe : séparation électrophorétique et une précipitation par des
immunsérums dont obligatoirement des anti-kappa et anti-lambda libres
2 programmes disponibles :
Hydragel Urine profile
Hydragel BJ
Hydragel BJ Hydragel Urine profile
Même sensibilité GAM , Kappa et lambda libre et totale
IF sebia , 2014
En résumé
Camare, C. and E. Causse (2013). "[Urinary protein electrophoresis, which analysis to select? A simplified interpretation]." Ann Biol Clin (Paris) 71(6): 667-678.
Merci pour votre attention
