Remarques

- Il faut cependant savoir que la ………………………… peut être variable pour une même espèce (par
exemple, le pneumocoque se décolore facilement, de même, certaines
bactéries ………………………… quand les colonies sont âgées).

- Certaines bactéries sont même dites « ……………….. » ou « …………………» (ex: corynébactéries).

Risques d'erreurs
- Attention, une mauvaise coloration peut conduire à des erreurs d'identification bactérienne ou à une
mauvaise orientation de diagnostic.

Faux positif Faux négatif

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Les bactéries Gram positif et les bactéries Gram négatif
liste des bactéries Gram positif et les bactéries Gram négatif

Description du
Morphotype Organismes les plus courants

Cocci à Gram positif

Paires Staphylococcus, Streptococcus, Enterococcus spp.

Tétrades Micrococcus, Staphylococcus, Peptostreptococcus spp

Groupes Staphylococcus, Peptostreptococcus, Stomatococcus spp.

Chaînes Streptococcus, Peptostreptococcus spp.

Clusters, Streptococcus spp. Microaérophile, streptocoques viridans, Staphylococcus spp.

intracellulaires

Encapsulé Streptococcus pneumoniae, Streptococcus pyogenes (rarement), Stomatococcus

mucilaginosus

En forme d'ancet Streptococcus pneumoniae

Cocci à Gram negatif

Neisseria spp., Moraxella catarrhalis.

Bacilles à Gram positif

Petit Listeria monocytogenes, Corynebacterium spp.

Moyen Lactobacillus, bacilles anaérobies

Grand Clostridium, Bacillus spp.

Diphtéroïde Corynebacterium, Propionibacterium, Rothia spp.

Pléomorphe, Gram Gardnerella vaginalis

variables

Perlé Mycobactéries, lactobacilles affectés par les antibiotiques et corynébactéries

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 liste des bactéries Gram positif et les bactéries Gram négatif

Description du
Morphotype Organismes les plus courants

Filamenteux Morphotypes anaérobies, cellules affectées par les antibiotiques

Filamenteux, perlé, Actinomycetes, Nocardia, Nocardiopsis, Streptomyces, Rothia spp.

ramifié

Formes bifides ou en Bifidobacterium spp., brevibacteria

Coccobacilles à Bordetella, Haemophilus spp. (pléomorphe)

Gram négatif

Masses Veillonella spp.

Chaînes Prevotella, Veillonella spp

Bacilles à Gram négatif

Petit Haemophilus, Legionella (thin with filaments), Actinobacillus, Bordetella,

Brucella, Francisella, Pasteurella, Capnocytophaga, Prevotella, Eikenella spp.

Bipolaire Klebsiella pneumoniae, Pasteurella spp., Bacteroides spp.

Moyen Entériques, pseudomonas

Grand Clostridia ou bacilles dévitalisés

Incurvée Vibro, Campylobacter spp.

Spirale Campylobacter, Helicobacter, Gastrobacillum, Borrelia, Leptospira, Treponema

spp

Fusiforme Fusobacterium nucleatum

Filaments Fusobacterium necrophorum (pléomorphe)

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2.2.2.2 Coloration de Ziehl Neelsen

La coloration de Ziehl-Neelsen (ZN) est l'une des techniques de coloration les plus utilisées
pour détecter les ……………………………., également connu sous le nom de bacille de …….., la bactérie
responsable de la ………………….. (TB). La méthode de choix pour la bacilloscopie des frottis
d'expectoration est la coloration de ………………………….. (ZN) car elle est la seule à fournir
régulièrement de bons résultats sans nécessiter un équipement spécial.

Lorsque l'échantillon suspecté de contenir Mycobacterium tuberculosis est prélevé, il est…………….

sur une lame de microscope, puis ………… et …………….. sous microscope. Les mycobactéries, si
présentes, apparaissent comme des …………… rouges ou roses caractéristiques.

1. Principe
Cette coloration est utilisée pour la recherche des ………………. tuberculeux, elle est basée sur
la capacité de ces bactéries à conserver, après coloration à…………… à la fushine , la teinte rose malgré
l’action d’un …………….. fort concentré et de l’……………. à 0.95%. Ces bactéries sont appelés les
………………………..-Résistants ou bacilles A.A.R .

La présence d'acides ………………… dans les parois cellulaires des bactéries acido-alcoolo-
résistantes est la base …………….. de cette coloration. L'acide mycolique donne à ces bactéries une
plus grande affinité pour le colorant primaire et une résistance à la décoloration par une solution d'acide-
alcool.

La fuchsine est utilisée comme colorant ………………….. parce qu'elle est ………….. et
pénètre la paroi cellulaire ………………... La coloration est encore améliorée en ………………. jusqu'à
émission de ………………de la préparation pour faire fondre la cire et permettre au colorant de se
déplacer dans la cellule. Le mélange ………………. est utilisé pour décolorer les cellules non acido-
alcoolo-résistantes. Une contre-coloration, telle que le bleu de méthylène, est ensuite appliquée. Une fois
terminées, les bactéries acido-alcoolo-résistantes sont colorées en ……………….. sur un fond bleu.

2. Le protocole
 ……………… l'expectoration régulièrement sur la zone centrale de la lame grâce à un
mouvement continu de rotation ; on recommande un étalement d'environ 20 mm sur 10mm .
 …………. les lames sur le séchoir avec la surface d'étalement vers le haut et
laisser ……………………………………………………………………
 Procéder à la …………………….. des lames séchées en les tenant avec une pince et en les
passant sur ……………… 5 fois pendant environ 4 secondes, la face d'étalement tournée vers le
24
 haut. Ne pas fixer par la ……………………………… et éviter un échauffement
……………..

☲ Coloration :
❶ Placer les lames fixées sur le support de …………………. selon leur numéro d'ordre, la
face d'étalement vers le haut. Les lames devraient être séparées par un intervalle d'1 cm et ne
jamais se toucher l'une l'autre.

❷ Recouvrir les lames l'une après l'autre au moyen de la solution de travail

de ………………………………………… à 0,3 % filtrée

❸ En plaçant une bande de papier ………… comme un papier ………… ou même du

papier journal, on retiendra la solution de coloration et on évitera le dépôt de cristaux de
fuchsine sur le frottis.

❹ ……………….. les lames par le dessous au moyen de la flamme d'un bec Bunsen
jusqu'à émission de …………... Il ne faut jamais aller jusqu'à l'ébullition de la solution de
colorant. Ne pas laisser le colorant se dessécher

❺ Laisser les lames recouvertes d'une solution …………… et ……………… de fuchsine

phéniquée pendant 5 minutes en repassant la flamme si c'est nécessaire

❻ Rincer les lames délicatement à l'eau pour écarter l'excès de …………………….

❼ Evacuer l'excès d'eau de rinçage des lames . Les frottis d'expectoration ont une couleur
……………...

☲ Décoloration :
❶ Recouvrir les lames au
moyen …………………………………………………………………………………………
……………………………… et laisser agir pendant 3 minutes, après cela la coloration rouge
devrait avoir presque disparu .En cas de nécessité, répéter cette séquence durant deux minutes
supplémentaires.

❷ …………………….délicatement l'acide sulfurique ou l'alcool-acide et l'excès de colorant

à l'eau . Evacuer des lames l'……………………. d'eau de rinçage.
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☲ Contre-coloration :

Recoloration :
1) Recouvrir les lames l'une après l'autre avec la solution de contre-coloration (bleu de
méthylène à 0,3 %) et laisser agir pendant 1 minute.

2) Rincer les lames à l'eau individuellement.

3) Evacuer l'eau des lames et les laisser sécher à l'air.

3. Résultats
Les A.A.R apparaissent ………………. tandis que les autres bactéries sont ……………..

2-3. Coloration de spores :

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 Certaines espèces bactériennes ont la propriété de se transformer en………………ex :
………………….; c’est une forme de résistance de ces bactéries en particulier vis-à-vis de la chaleur ,
capable de redonner la ……………………… . La coloration de spore se fait par le vert de …………..
les spores apparaissent vertes dans les corps bactériens roses.

2.4. Coloration de capsule :

Les capsules sont des couches denses et bien délimitées de molécules visqueuses accumulées à
l’extérieur de la paroi par certaines bactéries comme les ……………………...

Pour l’observation de la capsule des microorganismes on utilise …………………… : le fond de

la préparation apparait …………….et la capsule apparait ……………….autour d’une bactérie plus
foncée.

3. Identification bactérienne
L’identification bactérienne consiste à placer une souche particulière dans un taxon connu. La
souche inconnue est comparée à des espèces déjà décrites (souches types) et le nom de l’espèce la plus
similaire est proposé.
L’identification ………………. utilise un faible nombre de caractères considérés comme
importants tels que la morphologie, la mise en évidence d’un caractère biochimique (enzymes),
sérologique (anticorps) ect. les identifications bactériennes par les caractères biochimiques et
sérologiques sont les plus utilisés en routine.
L’identification………………… : elle est basée sur les techniques de biologie moléculaire telle
que la PCR (Amplification en Chaîne par Polymérase), séquençage de l’ARN 16s, cependant ces
techniques sont chère est nécessite un matériel spécifique et un personnel qualifié.
L’identification moléculaire en se basant sur la …………………… en utilisant la spectrométrie
de masse de types MALDI-TOF MS est parmi les méthodes nouvelles les plus recommandées ces
dernières années à cause de ça rapidité et sensibilité et son cout moins cher.

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