Enzimas
Conceitos básicos e Cinética
A actividade enzimática é responsável pela luminescência de
algumas espécies
Aequorina
luz
Velocidade de uma reacção química
+ Enzima
Sem enzima
Produto
Segundos Horas
Tempo
Aumento da velocidade de reacção por alguns enzimas
Velocidade Velocidade Aumento de
Meia-vida sem enzima com enzima velocidade
Enzima sem enzima
OMP descarboxilase anos
Nuclease de estafilococo anos
AMP nucleosidase anos
Carboxipeptidase A anos
Cetoesteroide isomerase semanas
Triose fosfato isomerase dias
Corismato mutase horas
Anidrase carbónica segundos
Os enzimas aceleram reacções ao diminuírem a energia de activação
Os enzimas não alteram o equilíbrio das reacções!
Estado de transição, S‡
DG‡
(não catalisada)
DG‡ (catalisada)
Substrato
Energia livre
DG para
a reacção
Produto
Progresso da reacção
Mecanismo de acção enzimática
Estado de transição, S‡
Energia livre, G
Progresso da reacção
Mecanismo de acção enzimática
Substrato (polipéptido)
Quimotripsina
Complexo enzima-substrato
Mecanismo de acção enzimática
Modelo de chave e fechadura da ligação enzima substrato
Substrato
Centro
activo
Complexo ES
Enzima
Mecanismo de acção enzimática
Modelo induzido da ligação enzima substrato
Substrato
Centro
activo
Complexo ES
Enzima
Modelo induzido - Hexoquinase
hexoquinase
Enzima livre Complexo enzima-substrato
Mecanismo de acção enzimática
Os centros activos podem incluir aminoácidos distantes
Mecanismo de reacção
Notação de Cleland
1. Mecanismo UniUni
A P
A P
Enzima EA Enzima
EP
Mecanismo de reacção
Notação de Cleland
2. Mecanismo BiBi ordenado
A+B P +Q
A B P Q
Enzima EA EAB EQ Enzima
EPQ
Mecanismo de reacção
Notação de Cleland
2. Mecanismo BiBi ordenado
Piruvato Lactato
Piruvato Lactato
Enzima Enzima
piruvato lactato
Mecanismo de reacção
Notação de Cleland
3. Mecanismo BiBi ao acaso
A+B P +Q
A B P Q
EA EQ
Enzima EAB Enzima
EB EPQ EP
B A Q P
Mecanismo de reacção
Notação de Cleland
3. Mecanismo BiBi ao acaso
Creatina Fosfocreatina
Creatina Fosfocreatina
Enzima Enzima
creatina fosfocreatina
Creatina Fosfocreatina
Mecanismo de reacção
Notação de Cleland
4. Mecanismo BiBi ping-pong
A+B P +Q
A P B Q
Enzima EA Enzima’ E’B Enzima
E’P EQ
Mecanismo de reacção
Notação de Cleland
4. Mecanismo BiBi ping-pong
Aspartato a-Cetoglutarato Glutamato Oxaloacetato
Aspartato Oxaloacetato a-Cetoglutarato Glutamato
Enzima Enzima
aspartato oxaloacetato a-cetoglutarato glutamato
Classificação dos Enzimas
Classe Tipo de Reacção Exemplo
1. Oxidorreductases Oxidação-redução Lactato desidrogenase
2. Transferases Transferência de radicais de um composto Glucoquinase
para outro
3. Hidrolases Reacções de hidrólise (transferência Quimotripsina
de radicais para a água)
4. Liases Clivagem de um composto em Fumarase
Fragmentos de menor massa
5. Isomerases Isomerização (intertransformação Triose fosfato isomerase
de isómeros)
6. Ligases Ligação de dois substratos à custa da Piruvato carboxilase
hidrólise de ATP ou outro NTP
Apoenzima + Cofactor = Holoenzima
Cofactores enzimáticos
Cofactor Enzima
Coenzima
Tiamina pirofosfato Piruvato desidrogenase
Flavina adenina dinucleótido Monoamina oxidase
Nicotinamida adenina dinucleótido Lactato desidrogenase
Piridoxal fosfato Glicogénio fosforilase
Coenzima A (CoA) Acetil CoA carboxilase
Biotina Piruvato carboxilase
5’-Desoxiadenosil cobalamina Metilmalonil mutase
Tetra-hidrofolato Timidilato sintase
Metal
Zn2+ Anidrase carbónica
Zn2+ Carboxipeptidase
Mg2+ EcoRV
Mg2+ Hexoquinase
Ni2+ Urease
Mo Nitrato redutase
Se Glutationo peroxidase
Mn2+ Superóxido dismutase
K+ Propionil CoA carboxilase
Cinética enzimática
Determinação da velocidade inicial – v0
Equilíbrio
Produto
Tempo
Cinética enzimática
Velocidade de reacção em função da concentração de substrato numa
reacção enzimática
Velocidade máxima
Velocidade de reacção
Concentração de substrato
Cinética enzimática
Alteração das concentrações dos participantes numa reacção enzimática
em função do tempo
Hipótese do estado estacionário – Briggs e Haldane
Concentração
Equilíbrio
Estado
estacionário:
Estado pré- Tempo Estado pré-
estacionário estacionário
Cinética enzimática
Equação de Michaelis - Menten
Cinética enzimática
Cinética de Michaelis - Menten
Velocidade de reacção
Concentração de substrato
Cinética enzimática
Linearização da equação de Michaelis – Menten
Gráfico de Lineweaver-Burk
Declive
Intercepção
Intercepção
Inibição enzimática
Inibidor
Substrato competitivo
Enzima Enzima
Inibidor anti-
Substrato Substrato competitivo
Inibidor não-
competitivo
Enzima Enzima
Inibição competitiva
Sem inibidor
Inibição competitiva
+ Inibidor competitivo
KM
Vmax =
Sem inibidor presente
Inibição não-competitiva
Inibição não competitiva
+ Inibidor não competitivo
KM =
Vmax
Sem inibidor presente
Inibição anti-competitiva
Inibição anti competitiva
+ Inibidor anti competitivo
KM
Vmax Sem inibidor presente
Enzimas alostéricos
Não obedecem à cinética de Michaelis - Menten
Velocidade da reacção,
Concentração de substrato,
Enzimas alostéricos
Estado T Estado R
(menos activo) (mais activo)
Favorecido pela ligação Favorecido pela ligação
a um inibidor ao substrato
Enzimas alostéricos
Velocidade Curva do estado R
da reacção
Curva do estado T
[Substrato]
Formas de modulação enzimática
1. Controle alostérico
2. Modificação covalente
3. Múltiplas formas das enzimas
(Isozimas)
4. Ativação proteolítica
Modulação da actividade enzimática
Subunidade reguladora
Substrato
Subunidade catalítica
Modulador positivo
Enzima menos activo
Enzima mais activo
Complexo
enzima-substrato
activo
Modulação da actividade enzimática
Modificação covalente - Fosforilação
Fosforilase b
(menos activa)
Fosforilase Fosforilase
fosfatase quinase
Fosforilase a
(mais activa)
Modulação da actividade enzimática
Isozimas (Isoenzimas)
LDH – Lactato desidrogenase
Isozima M – ambiente anaeróbio
Isozima H – ambiente aeróbio Piruvato Lactato
Coração Rim Hemácia Cérebro Leucócito Músculo Fígado
Modulação da actividade enzimática
Zimogénios
Zimogénios gástricos e pancreáticos
Local de síntese Zimogénio Enzima activo
Estômago Pepsinogénio Pepsina
Pâncreas Quimotripsinogénio Quimotripsina
Pâncreas Tripsinogénio Tripsina
Pâncreas Procarboxipeptidase Carboxipeptidase
Pâncreas Proelastase Elastase
Secreção de zimogénios pelo pâncreas
Ribossomas ligados ao
retículo endoplasmático
Complexo
de Golgi
Grânulo de
zimogénio
Modulação da actividade enzimática
Activação de zimogénios por clivagem proteolítica
Enteropeptidase
Tripsinogénio Tripsina
Proelastase Elastase Procarboxi- Carboxi-
peptidase peptidase
Quimotripsinogénio Quimotripsina Prolipase Lipase
