TECHNICAL SHEET

TS 20102
Rev. 0 of 15.11.2007
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BRILLIANT GREEN BILE BROTH 2%

Selective medium for coliforms and faecal coliforms detection according to ISO 4832.

TYPICAL FORMULA (g/L)

Oxbile............................... 20.0
Lactose......................... 10.0
Peptone................. 10.0
Brilliant Green.... 0.0133
Final pH 7.2 0.2

DESCRIPTION
BRILLIANT GREEN BILE BROTH 2% is a selective medium for coliforms and faecal coliforms detection with MPN method . The medium is
recommended :
For coliforms determination at 30 C with MPN method by directive UNI ISO 4831 for foods and by ISO 5541/2 for milk and dairy products..
By APHA for confirmation of faecal coliforms at 44.5C.
By DPR n. 470, 8.6.82, for research with MPN method, of coliforms in water bathing at 44C.
By O.M. 11/10/87 for presumptive test of research of coliforms in milk, products with eggs, ice-creams and compounds for ice-creams.

PRINCIPLE
BRILLIANT GREEN BILE BROTH 2% contains two inhibitors of both gram-positive and selected gram-negative organisms; i.e., oxgall and brilliant
green dye. Organisms, primarily coliforms, which are resistant to the action of the inhibitors and which ferment the lactose, are able to replicate in this
medium. Fermentation is detected by gas production.

TECHNIQUE
For the enumeration of coliform bacteria with the most probable number (MPN) technique proceed according to ISO 4831 and proceed as following:
1. From each of the incubated tubes with double-strength and single -strength Lauryl Pepto Broth (Code 470240) inoculate with a loop a tube of
BRILLIANT GREEN BILE BROTH 2% and incubate at 30 or 37C for 24 2 hours or, if gas formation is not observed, for 48 2 hours.
2. For each dilution of incubated confirmation liquid medium count the total number of tubes in which gas formation is observed.
3. Express the results as the Most Probable Number of coliforms on the basis of gas production in BRILLIANT GREEN BILE BROTH 2% tubes
after 48 hours incubation.

For the enumeration of faecal coliform bacteria with the most probable number technique proceed as following:
1. From each of the positive tubes of MacConkey Broth (Code 20126), inoculate, with a loop, a tube of BRILLIANT GREEN BILE BROTH 2%
and a tube of Peptone Water (Code 20098) and incubate at 44C.
2. Observe for gas production in BRILLIANT GREEN BILE BROTH 2%, after 24 and 48 hours of incubation and test the indole production on
Peptone Water (Code 20098) after 24 hour of incubation.

For the detection of coliform bacteria in milk and milk products, with MPN technique, proceed according to ISO 5541-2.

INTERPRETATION OF RESULTS
Gas production within 48 3 hours is considered positive evidence of fermentation by coliform bacilli. Detailed results for the enumeration of coliforms
using BRILLIANT GREEN BILE BROTH 2% are discussed in the various compendia of methods for microbiological examination of foods, dairy products
and water and wastewater.

STORAGE
10-25C away from light, until the expiry date indicated on the label or until signs of deterioration or contamination are evident.

WARNING and PRECAUTIONS

The product is not classified as hazardous by current legislation and does not contain harmful substances in concentrations of 1%.The product must
be used only by properly trained operators.

DISPOSAL of WASTE
Disposal of waste must be carried out according to national and local regulations in force.

REFERENCES
1. Clesceri, Greenberg and Eaton (ed.) 1998. Standard methods for the examination of water and wastewater, 20 th ed. American Public Health
Association, Washington, D.C.
2. Marshall (ed.)1993. Standard methods for the examination of dairy products, 16th ed. American Public Health Association, Washington, D.C.
3. Horwitz (ed.) 2000. Official methods of analysis of AOAC International, 17th ed. Vol. 1. AOAC International, Gaithersburg, Md.
4. ISO 4832 Microbiology of food and animal feeding stuffs_Horizontal method for the enumeration of coliforms_Colony Count technique.
5. ISO 5541-2 Milk and Milk products- Enumeration of coliforms- Part 2 Most probable number technique at 30C. 1986-12-01

Liofilchem s.r.l.
Via Scozia-Zona industriale - 64026 Roseto degli Abruzzi Tel. +39.085.8930745 - Fax +39.085.8930330
Web site: http://www.liofilchem.net E-mail: [email protected]
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PRODUCTS SPECIFICATIONS

NAME
BRILLIANT GREEN BILE BROTH 2%

PRESENTATION
Glass tubes containing 10 ml of broth with Durham tube.

STORAGE
10-25C

PACKAGING
Code Content Packaging
10 tubes in cardboard
20102 10 tubes x 10 ml
box

pH OF THE MEDIUM
7.2 0.2

USE
Selective medium for coliforms and faecal coliforms detection according to ISO 4832.

TECHNIQUE
Refer to technical sheet of the product.

APPEARANCE of the MEDIUM

Emerald green

SHELFLIFE
2 years

QUALITY CONTROL
1. Control of general characteristics, label and print
2. Sterility control
2 days at 20 2C, in aerobiosis
1 day at 36 1C, in aerobiosis
3. Microbiological control
Inoculum for productivity: 10-100 UFC/ml
Inoculum for specificity: 104 UFC/ml
Inoculum for selectivity: 104-105 UFC/ml
Incubation conditions: 35 2C for 18-24 hours.

Microorganism Growth Gas production

Klebsiella pneumoniae ATCC 13883 Good +
Proteus mirabilis ATCC25933 Good -
Escherichia coli ATCC 25922 Good +
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 Good -

TABLE of SYMBOLS
Symbol Meanings
Manufacturer
Catalogue number
Use by
Temperature limitation
Do not reuse
Contains sufficient for <n> tests
Consult accompanying documents
Batch code
Fragile, handle with care

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 SCHEDA TECNICA
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Rev. 0 21.01.2010
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BRILLIANT GREEN BILE BROTH 2%

Terreno selettivo per la ricerca di coliformi e coliformi fecali secondo la ISO 4832

FORMULA TIPICA (g/L)

Bile Batteriologica 20.0
Lattosio 10.0
Peptone 10.0
Verde Brillante 0.0133
pH = finale 7.2 0.2

DESCRIZIONE
BRILLIANT GREEN BILE BROTH 2% un terreno selettivo per la ricerca di coliformi e coliformi fecali secondo la ISO 4832.
Il terreno raccomandato :
per la determinazione dei coliformi a 30 C con il metodo MPN dalla direttiva UNI ISO 4832 per gli alimenti in generale e dalla
ISO 5541/2 per latte e prodotti caseari in particolare.
Dall' APHA per la conferma dei coliformi fecali a 44.5C.
Dal DPR n. 470, 8.6.82, per la determinazione dei coliformi a 44 C con il metodo MPNnelle acque di balneazione.
Dall' O.M. 11/10/87 per la ricerca presuntiva dei coliformi nel latte, nei prodotti contenenti uova, gelati e composti per gelati.

PRINCIPIO
Il peptone fornisce azoto, carbonio, zolfo e vitamine. Il lattosio una fonte di energia che favorisce la crescita dei microrganismi.
La presenza del verde brillante sopprime la crescita dei batteri anaerobi lattosio-fermentanti (Clostridium perfringens) non ottenendosi
falsi positivi; il verde brillante ed i sali biliari inibiscono la crescita dei microrganismi Gram-positivi.

TECNICA
La norma UNI ISO 4831 raccomanda la seguente tecnica per la determinazione dei coliformi con metodo MPN:
1. Seminare 3 provette con 10 ml di terreno a doppia concentrazione con 10 ml del campione da esaminare, se liquido o 10 ml della
sospensione madre se solido.
2. Seminare 3 provette con 10 ml di terreno a concentrazione semplice con 1 ml del campione da esaminare, se liquido o 1 ml della
sospensione madre se solido.
3. Per ciascuna delle diluizioni seguenti (a partire da 1/10 o 1/100 a seconda dei casi) seminare 3 provette di terreno a concentrazione
semplice con 1 ml di ciascuna diluizione.
4. Incubare le provette a doppia concentrazione in termostato a 30 +/- 1C per 24 +/- 2 ore.
5. Incubare le provette di terreno a concentrazione semplice in termostato a 30 +/- 1C per 24 +/- 2 ore, oppure, se a questo stadio non
si osserva formazione di gas n intorbidimento, per 48 +/- 2 ore.
6. A partire da ciascuna provetta di terreno a concentrazione doppia, trapiantare unansata di brodocoltura in nuove provette di terreno a
concentrazione semplice ed incubare a 30 +/- 1C per 24 +/- 2 ore, oppure, se a questo stadio non si osserva formazione di gas n
intorbidimento, per 48 +/- 2 ore.
7. Operare nello stesso modo per le provette a concentrazione semplice trapiantando solo nel caso si osservi formazione di gas o
intorbidimento, dal momento che si osserva uno di questi fenomeni.
8. Per ogni diluizione, contare il numero di provette dove si nota formazione di gas.

INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI

Esprimere i risultati facendo uso delle apposite tabelle MPN.
Per eseguire il test di conferma dei coliformi fecali a 44C operare come segue:
1. Trasferire unansata di crescita dai tubi positivi di Mac Conkey Broth in provette di Brilliant Green Bile Broth 2% e di Peptone Water
ed incubare a 44 +/- 1C.
2. Osservare lo sviluppo di gas nelle provette di Brilliant Green Bile Broth 2% dopo 24 e 48 ore di incubazione ed eseguire il test
dellindolo sulla crescita di 24 ore in Peptone Water.
3. Le colture che producono gas e sono indolo positive sono da considerarsi coliformi di origine fecale.

CONDIZIONI DI CONSERVAZIONE
10-25C al riparo dalla luce, fino alla data di scadenza indicata in etichetta. Eliminare se vi sono segni evidenti di deterioramento.

AVVERTENZE E PRECAUZIONI
Il prodotto non classificato come pericoloso ai sensi della legislazione vigente, n contiene sostanze nocive in concentrazioni 1%. Il
prodotto deve essere utilizzato da parte di personale qualificato. Prima delluso assicurarsi che il prodotto non presenti segni di
deterioramento ed inquinamento.

SMALTIMENTO DEI RIFIUTI

Lo smaltimento del prodotto deve essere effettuato secondo le vigenti regolamentazioni nazionali e locali.

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Pag. 2 di 3

RIFERIMENTI BIBLIOGRAFICI
1. Clesceri, Greenberg and Eaton (ed.) 1998. Standard methods for the examination of water and wastewater, 20 th ed. American
Public Health Association, Washington, D.C.
2. Marshall (ed.)1993. Standard methods for the examination of dairy products, 16 th ed. American Public Health Association,
Washington, D.C.
3. Horwitz (ed.) 2000. Official methods of analysis of AOAC International, 17 th ed. Vol. 1. AOAC International, Gaithersburg, Md.
4. ISO 4832 Microbiology of food and animal feeding stuffs_Horizontal method for the enumeration of coliforms_Colony Count
technique.
5. ISO 5541-2 Milk and Milk products- Enumeration of coliforms- Part 2 Most probable number technique at 30C. 1986-12-01

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SPECIFICHE DI PRODOTTO
DENOMINAZIONE
BRILLIANT GREEN BILE BROTH 2%

PRESENTAZIONE
Provette in vetro pronte all'uso contenenti 10+/-1 mL di terreno ed una provetta di Durham.

CONFEZIONAMENTO
Codice Contenuto Confezionamento
20102 10 provette x 10 ml 10 provette in scatola di cartone

pH DEL TERRENO
7.2 0.2

IMPIEGO
BRILLIANT GREEN BILE BROTH 2% un terreno selettivo per la ricerca di coliformi e coliformi fecali secondo la ISO 4832.

TECNICA
Fare riferimento alla scheda tecnica del prodotto.

ASPETTO DEL TERRENO

Terreno verde smeraldo.

VALIDITA DALLA DATA DI PRODUZIONE

2 anni

CONTROLLO DI QUALITA
1. Controllo caratteristiche generali, etichettatura e stampa
2. Controllo sterilit
2 giorni a 20 2C, in aerobiosi
1giorni a 36 1C, in aerobiosi
3. Controllo microbiologico
Dimensione dellinoculo per produttivit: 10-100 UFC/ml
Dimensione dellinoculo per selettivit: 100-1000 UFC/ml
Condizioni di incubazione:24 ore a 36+/-1C

Microrganismo Crescita Gas

Klebsiella pneumoniae ATCC 13883 Buona +
Proteus mirabilis ATCC25933 Buona -
Escherichia coli ATCC 25922 Buona +
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 Buona -

TABELLA DEI SIMBOLI

Attenzione, consultare le Contenuto sufficiente per
Codice del lotto Fabbricante
istruzioni per l' uso <n> saggi

Numero di catalogo Limiti di temperatura Utilizzare entro

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