UNIVERSITE SIDI MOHAMED BEN ABDELLAH

FACULTE DES SCIENCES ET TECHNIQUES DE FES

Département des sciences de la vie

Projet de Fin d’Etudes

Licence Sciences & Techniques
Biotechnologie et Valorisation des Phyto-Ressources

Titre

Multiplication in vitro du palmier dattier (Phoenix dactylifera L.)

par bourgeonnement

Présenté par :
- SETTINI Khalid

Encadré par :
- Pr AMRANI JOUTEI Khalid
- Pr ANJARNE Mohamed

Soutenu le : 07 juin 2018

Devant le jury composé de :
 Mr. AMRANI JOUTEI Khalid
 Mr. ANJARNE Mohamed
 Mr. DERRAZ Khalid

Année universitaire
2017/2018
 Remerciement

Le présent travail n’aurait pu avoir lieu sans la contribution de plusieurs personnes. Je

tiens à exprimer ma profonde gratitude en remerciant tous ceux qui m’ont aidé à bien
mener ce travail.

Le présent travail a été réalisé au laboratoire de biotechnologie Végétale de l’Institut

Nationale de la Recherche Agronomique (INRA) centre Régional de Marrakech.

C’est avec beaucoup de plaisir que J’exprime mes profonds remerciements et ma vive
reconnaissance à mes chers professeurs AMRANI JOUTEI Khalid et ANJARNE
Mohamed d’avoir accepté d’encadrer et de diriger mon projet de fin d’étude. Je leur
remercie également pour leur disponibilité, leur gentillesse, leur patience et pour le
temps et l’intérêt qu’elles ont consacré pour ce travail.

Je tiens à remercier Mr le Directeur de l’institut national de recherche agronomique de

m’avoir accueilli comme stagiaire au sein du laboratoire national de culture des tissus
du palmier dattier à Marrakech.

Je veux adresser ma gratitude la plus profonde à tous ceux qui m’ont aidé à
l’accomplissement de ce travail. Parmi eux je veux remercier toute l’équipe du
laboratoire de biotechnologie végétale du CRRA de Marrakech où j’ai passé des bons
moments de travail et d’amitié partagés.

Mes remerciements vont également à Mr DERRAZ Khalid, Mr AMRANI JOUTEI

Khalid et Mr ANJARNE Mohamed d’avoir accepté de participer aux membres du jury,
qu’ils trouvent ici l’expression de mes plus sincères remerciements et toute ma gratitude.

Finalement, j’adresse des sincères remerciements à ma famille et tous mes ami(e)s et

mes collègues pour leur amitié, encouragement et leur soutien précieux.

1
 Sommaire
Introduction…………………………………………………………………………………...6
Etude bibliographique………………………………………………………………………..8
I- Le palmier dattier………………………………………………………………8
1- Taxonomie………………………………………………………………….8
2- Description botanique………………………………………………………8
3- Importance et répartition au Maroc………………………………………...9
II- Les techniques conventionnelles de multiplication du palmier………………10
1- Semis des graines…………………………………………………………10
2- Multiplication par rejets…………………………………………………..11
III- La culture in vitro du palmier………………………………………………...11
1- Avantages………………………………………………………………....11
2- Méthodes de multiplication in vitro du palmier…………………………..12
a) Embryogenèse somatique…………………………………………12
b) Organogenèse……………………………………………………..12
3- Les Facteurs de maitrise…………………… …………………………...14
a) Milieu de culture…………………………………………………..14
b) Environnement…………………………………………………….14
c) Stérilité…………………………………………………………….15
IV- Problème de la phoeniciculture au Maroc…………………………………….15
1- La maladie du Bayoud…………………………………………………….15
2- La sécheresse ……………………………………………………………..15
3- L’invasion du sable………………………………………………………..15
4- Désintérêt des phoeniciculteurs…………………………………………...15
Matériel et méthodes………………………………………………………………………...17
I- Matériel végétale……………………………………………………………...17
II- Milieu de culture……………………………………………………………...17
1- Préparation des solutions mères ………………………………………….17
a) Les macroéléments………………………………………………..17
b) Les microéléments ………………………………………………..17
c) Le fer………………………………………………………………18
d) Les vitamines……………………………………………………...18
2- Préparation du milieu……………………………………………………..18
III- Repiquage et culture des souches……………………………………………..19
IV- Observations et critères d’évaluation…………………………………………20
1- Taux de multiplication …………………………………………………...20
2- Nombre et longueur des feuilles …………………………………………21
3- Indice de verdissement……………………………………………………21
4- Nombre et longueur des racines…………………………………………..21
5- Indice de la taille des bourgeons………………………………………….21
Résultats et discussion………………………………………………………………………23
I- Résultats…………………………....................................................................23

2
 1- Taux de multiplication……………………………………………………23
2- Nombre et longueur des feuilles………………………………………….23
3- Indice de verdissement……………………………………………………24
4- Nombre et longueur des racines…………………………………………..25
5- Indice de la taille des bourgeons………………………………………….26
II- Discussion…………………………………………………………………….26
Conclusion……………………………………………………………………………………27
Références bibliographiques………………………………………………………………..28

3
 Liste d’abréviations

 MS : Murashige & Skoog

 INRA : Institut Nationale de la Recherche Agronomique
 KIN : Kinétine
 IPA : IsoPentenylAdénoside
 AIA : Acide Indole 3-Acétique
 ANA : Acide Naphtalène Acétique
 EDTA : EtylèneDiamineTétraAcétique

4
 Résumé
Le palmier dattier (Phoenix dactylifera L.) joue un rôle important sur la scène socio-économi-
que dans le Maroc. Cependant la culture du palmier dattier est actuellement confrontée à
plusieurs contraintes qui limitent la propagation de cette plante à grande échelle. C’est pour
cela que nous avons faits cette recherche. Dans cette étude, l’objectif était de comparer
l’action de différentes concentrations des régulateurs de croissance sur la multiplication des
souches de cv. Boufeggous, dans le but d’améliorer la production de cette plante.

Les résultats de cette étude montrent que le milieu de culture contenant les concentrations
hormonales suivantes : 1ml/L de KIN ; 0.75ml/L d’IPA ; 0.5ml/L d’AIA et 0.05ml/L d’ANA,
a donné les meilleurs résultats avec des bourgeons de grand taille, des feuilles et des racines
multiples et de grands tailles et un taux de multiplication et verdissement élevée par rapport
au milieu témoin sans hormones qui a donné un taux de multiplication élevée mais avec peu
des bourgeons, feuilles et racines qui sont de petite taille.

Mots clés : Phoenix dactylifera L., Propagation, régulateurs de croissance, cv. Boufeggous,
Milieu de culture, hormones.

5
 Introduction
La production de palmier dattier « Phoenix dactylifera L. » a subi un changement radical au
cours des centaines d’années dernières. Lors du 19ème siècle, la production nationale des dattes
plaçait le Maroc au troisième rang mondiale. Ceci s’explique par sa culture qui occupait des
superficies importantes avec plus de 15 millions de pieds. Mais à partir du 20ème siècle, le
palmier dattier occupait une superficie de 48 000 ha pour un effectif de 4,743 millions de
pieds (El Hadrami et El Hadrami, 2008 ; Anonyme, 1991) avec une production annuelle des
dattes qui est estimée en moyenne à 72 000 tonnes et un rendement moyen de l’ordre de 20
kg/pied. Par comparaison, dans les pays où la phoeniciculture moderne est pratiquée
(pollinisation mécanisée, irrigation localisée et fumigation intensive), un pied de palmier
dattier peut produire jusqu'à’200 kg/an (El Hadrami et al., 1998). Cette régression est due
essentiellement à :

 La maladie du Bayoud qui est à l’origine de la destruction de plus des deux tiers du
patrimoine phoénicicoles (Fernandez et al.,1995)
 A l’effet de sécheresses prolongées qui ont entrainé le dessèchement partiel de plus de
500 000 palmiers. Durant les années 80, près de 350 000 palmiers ont été desséchés dans
les seules palmeraies de Ouarzazate et d’Errachidiya (Haddouch, 1993).
 Au problème de l’ensablement des palmeraies.
 Enfin, au désintérêt des populations et à leur reconversion vers des secteurs plus
rémunérateurs, laissant le palmier à son propre sort sans soins particuliers à l’exception
des irrigations, des pollinisations et de la récolte (El Hadrami, 1998).

La méthode de multiplication sexuée reste non fiable, et la méthode végétative asexuée

nécessite un nombre important de rejets. En effet, la production naturelle de rejets par un seul
palmier ne dépasse pas 20 à 40 rejets dans toute sa vie. Ainsi, cette technique traditionnelle
reste lente et incapable de répondre aux besoins importants exigés pour l’extension rapide des
palmeraies (El Hadrami et al., 1998).

C’est pour cela les phoeniciculteurs ont tournés vers les techniques de multiplication in vitro
qui est une technique rapide et permet d’obtenir un nombre élevé de clones indemnes de
Fusarium, permettant d’éviter la dispersion de la maladie du Bayoud.

6
Il existe plusieurs méthodes de multiplication in vitro mais au Maroc, on note l’utilisation de
la technique d’organogenèse qui, en principe, permet une certaine authenticité variétale.
Ainsi, environ 150 000 vitroplants issus d’une vingtaine de génotypes marocains ont été
produits via cette méthode, ce qui représente moins de 15 à 20 % des besoins au Maroc (El
Hadrami et al., 1998).

L’objectif de ce travail est de comparer l’action de 4 différents milieux de culture avec des
différentes balances hormonales sur les souches de la variété Boufeggous afin d’optimiser le
rendement de la plante.

7
 ETUDE BIBLIOGRAPHIQUE

I- Le palmier dattier :
1- Taxonomie :

Le palmier dattier a été dénommé « Phoenix dactylifera » pour la première fois par Linné en
1734.Cette dénomination dérive de Phoenix (phénicien), car c’était les phéniciens qui ont
diffusé cette plante. Le terme spécifique est composé de dactylus indiquant dattes dérivant du
grec daktulos, signifiant doigt, en raison de la forme du fruit (Munier, 1973). Sa position
systématique était donnée comme suit :
- Embranchement : Angiosperme
- Classe : Monocotylédone
- Ordre : Palmales
- Famille : Palmacées (Arecaceae)
- Sous-famille : Coryphoïdées
- Tribu : Phoénicée
- Genre : Phoenix
2- Description botanique :

Le palmier dattier est caractérisé par un stipe très élancé, pouvant atteindre 30 m de hauteur.
Les feuilles, réunies en un nombre de 20 à 30 au maximum forment une couronne apicale
clairsemée. Elles sont pennées et peuvent atteindre 6 m de longueur. L’espèce est dioïque et
porte des inflorescences mâles ou femelles, appelées spadices, enveloppées d’une très grande
bractée membraneuse, la spathe. Les fleurs femelles ont trois carpelles indépendants, dont un
seul se développe pour former la datte. Les fruits (les dattes) groupées en régimes, sont des
baies oblongues, de couleur orange-foncé à maturité, longues jusqu’à 5 cm chez les variétés
cultivées, contenant une pulpe sucrée et une graine de consistance ligneuse (Zouine. 2007).
Le dattier est une espèce xérophile et adaptée aux conditions des zones arides et semi-arides.
Il pousse sur des sols neutres, profonds, bien drainés, assez riches ou susceptible d’être
fertilisés. L’intensité maximale de végétation est atteinte à des températures de 30 à 40°C.
Comme tous les arbres fruitiers, le palmier dattier possède un cycle biologique au cours
duquel il passe par une période de repos végétatif en hiver où la croissance de tous les organes

8
est bloquée à l’exception des inflorescences qui se trouvent en cours de formation. La reprise
de végétation a lieu au printemps lorsque la température du sol dépasse 12°C. La période de
maturation des fruits correspond aux mois les plus chauds de l'année (Zouine. 2007).
3- Importance et répartition au Maroc :
La culture du palmier dattier est pratiqué dans plus de 30 pays différents avec une superficie
qui est estimée à 1 204 971 ha dont 73,71% soit 814 533 ha dans les pays arabes (Sedra,
2003). Ces effectifs ont produit 8 460 443 tonnes de dattes en 2016 au niveau mondiale dont
44,7% est produite par l’Afrique où se trouve le Maroc (FAO, 2016). Les statistiques actuelles
indiquent que l’Egypte occupe la première place en production des dattes suivi de Iran puis
l’Algérie. Actuellement le Maroc se trouve au 13ème rang mondiale et 11ème rang arabe (FAO,
2016).

Figure 1 : Les pays producteurs des dattes au niveau du monde

Tableau 1 : Classement des pays producteur des dattes (Unité tonne)

Class° Pays Valeur
1 Egypte 1694813
2 Iran 1065704
3 Algérie 1029596
4 Arabie saoudite 964536
5 Emirats arabes unis 671891
6 Iraq 615211
7 Pakistan 494601
8 Soudan 439120
9 Oman 348642
10 Tunisie 241000
11 Libye 173546
12 Chine 159144
13 Maroc 125329
14 Koweït 98366
15 Yémen 57726

9
Sur une surface oasienne globale estimée à 84 500 ha en 1948, la palmeraie marocaine
s’étalait en 1994 sur une superficie de 44 450 ha occupée par un effectif total de 4,425
millions de palmiers (Anonyme, 1994). Cet effectif a été auparavant estimé à 4,743 millions
palmiers (Anonyme, 1991). En 2003, la surface occupée par le palmier a augmenté de 3550
ha, suite à l’installation de nouvelles plantations en marges des palmeraies anciennes, passant
ainsi à 48 000 ha (Sedra, 2003).
Les principales palmeraies se présentent sous forme de longs cordons qui longent l’Oued Draâ
et l’Oued Ziz. (El Hadrami, 1998). L’importance du palmier par province montre que les
provinces de Ouarzazate, d’Errachidiya et de Tata sont les plus importantes et constituent de
ce fait, les plus grandes régions phoénicicoles. En effet, la province de Ouarzazate est en tête
avec 40% de l’effectif totale de palmiers, suivie des provinces d’Errachidiya avec 28,24% et
de Tata avec 19,72%. Les autres provinces ne représentent que moins de 4% de l’effectif
totale de palmiers (Sedra, 2003)

Tableau 2 : Importance par province du palmier dattier au Maroc (Anonyme, 1994)

Province Nombre de pieds Pourcentage %
Ouarzazate 1 873 000 40,67
Errachidiya 1 250 000 28,24
Tata 800 000 19,72
Tiznit 139 140 3,14
Guelmine 138 000 3,12
Figuig 125 500 2,83
Marrakech 100 000 2,26
Total 4 425 640

II- Les techniques conventionnelles de multiplication du palmier :

On connait deux techniques de multiplication conventionnelles qui sont :
1- Semis des graines :
La méthode de semis par graine est le moyen le plus ancien pour la propagation du palmier
dattier. Son principal avantage est la simplicité de son application et permet d’élargir la
diversité génétique du palmier. Par conséquent, cette technique se révèle très pratique dans les
programmes de reproduction et de sélection parmi la descendance ce qui peut conduire au
développement de meilleurs palmiers à traits intéressants (Abahmane, 2011). Dans certains
pays, le nombre de palmiers d’origine hybride est très important : l’Egypte par exemple
contient 3.5 millions de pieds. Le Maroc lui contient plus que 2 millions de pieds. Dans

10
d’autre pays (l’Emirat arabe unis, Kuwait, Pakistan, Yémen, etc…), la propagation par graine
est toujours pratiquée (Ferry et al, 1998). Cependant, cette méthode ne peut pas être utilisée
pour propager des palmiers portant des caractères d’élite ou des génotypes sélectionnés
puisque la descendance sera très variable à cause du caractère hétérozygote élevé du palmier
dattier (Tisserat 1982). Plus que ça, la moitié de la descendance sera composée des pieds
mâles qui ne peuvent pas être distingués avant la floraison. Les plantes femelles des graines
dérivées vont produire une variété de fruits qui sont généralement de qualité inférieure
(Abahmane, 2011).
2- Multiplication par rejets :
C’est une multiplication végétative du palmier, qui permet une reproduction pratiquement
conforme et une transmission génétique fidèle des caractères des parents (Sedra, 2003), c’est
la technique de multiplication végétative la plus conventionnelle. Cependant, il y a des
contraintes qui limitent son utilisation à grande échelle, un seul arbre ne peut produire dans
toute sa vie plus de 40 rejets d’une façon irrégulière qui dépend de l’environnement, de la
variété et de l’âge de la plante. Cette méthode est aussi très lente, il nous faut au moins 30
années pour obtenir quelques milliers de palmiers à partir d’une plantation de rejets, et en plus
que ça les rejets constituent un moyen de dissémination de la maladie du Bayoud et d’autres
maladies infectieuses (El Hadrami et al., 1998). Un autre inconvénient est que les rejets sont
difficile à arracher et les taux de reprise et de réussite de ses plantations est généralement
inférieure à 60% (Abahmane, 2011).

III- La culture in vitro du palmier :

Etant donné que les méthodes conventionnelles de propagation sont limitées en terme de
fournir un nombre insuffisant de plantes de palmier dattier, la culture in vitro a fourni une
alternative prometteuse pour répondre à la demande croissante de plantes au cours des
dernières décennies. Elle permet la production rapide de plusieurs milliers de vitroplants
conformes aux plantes mères (Sedra, 2003).
1- Avantages :
Cette technologie est indispensable pour :
 Multiplier en masse des plants des variétés désirées
 Multiplier les clones sélectionnés de hautes performances agronomiques qui ne sont
représentés que par quelques spécimens, en vue de repeupler les palmeraies dévastées
par le Bayoud dans un délai raisonnable, de restructurer les palmeraies traditionnelles
et enfin de créer de nouvelles oasis.

11
  Sauvegarder les variétés ou cultivars rares menacés d’extinction à cause de facteurs
d’érosion génétique d’origine abiotique ou biotique. Il en est de même pour les
individus sélectionnés de bonne qualité dattière mais extrêmement sensibles au
Bayoud.
 Produire des plants indemnes de maladies.
2- Méthodes de culture in vitro du palmier :
Deux principales méthodes de culture in vitro sont connues et les plus utilisées dans le
monde :
a) L’embryogenèse somatique :
L'embryogenèse somatique (encore appelée embryogenèse asexuée) consiste à obtenir des
embryons non zygotiques à partir de différents tissus de la plante mère. Ces embryons
peuvent se développer à partir de cellules somatiques ou germinales placées sur des milieux
de culture appropriés. De tels embryons se développent directement à partir de cellules
méristèmatiques des explants ou indirectement à partir de cals. Les embryons somatiques
produits sont, en principe, génétiquement identiques et capables de produire des clones à
partir de génotypes donnés. Les explants utilisés, comme pour la technique d’organogenèse,
proviennent de la base de jeunes feuilles de cœurs de rejets, des inflorescences…etc. (El
Hadrami et Baaziz, 1995; Loutfi, 1999).
L’embryogenèse somatique in vitro est obtenue soit par voie directe, sans formation de cals,
soit par voie indirecte, après formation d’un cal.
L'inconvénient principal est que les doses élevées des hormones dans le milieu rendent les
plantules enclines à la mutation qui produit des variations somaclonales, et qui ne sont
manifestés qu’après quelques années de plantation en champ. Cependant, ces variations
somaclonales produites par l'embryogenèse somatique, représentent une diversité génétique
induite qui peut avoir des traits génétiques souhaitables pour la sélection de nouveaux clones
(Edwin F et al., 2008)
b) Organogenèse :
La technique d’organogenèse est la base fondamentale de la multiplication végétative,
laquelle s’appuie toujours sur la formation de nouveaux méristèmes. En partant d’un explant,
elle aboutit à la néoformation d’un nouvel individu par l’élaboration de bourgeons apicaux
(caulogenèse) et de racines (rhizogenèse). Ces bourgeons néoformés in-vitro peuvent
apparaître sur l’explant initial (organogenèse direct) ou sur un cal (organogenèse indirecte).
Les bourgeons peuvent être considérés comme un cas particulier de bourgeons adventifs. Ils

12
sont induits sur n’importe quel type d’organe ou de tissu y compris sur ceux qui ne les
produisent pas dans les conditions naturelles. En outre, cette technique présente un maximum
de conformité et d’homogénéité génétique des vitroplants produits puisque les bourgeons sont
directement initiés à partir du tissu mère (Abahmane, 2011).
A l’état actuel, cette technique est l’unique voie de micropropagation utilisée pour la
multiplication à grande échelle du palmier dattier au Maroc (El Hadrami, 1998). Les étapes
de la technique d’organogenèses sont :
i) Initiation de bourgeons :
L’initiation de tissus organogènes se fait à partir de sites potentiellement méristèmatiques
préexistants au niveau de l‘épiderme interne de la base des jeunes feuilles du bourgeon
terminal ou du cœur du rejet (Aissam, 1990) ; ces cellules préméristèmatiques commencent à
fonctionner par suite de la levée d’inhibition exercée par le bourgeon axillaire ; cette levée
peut être mécanique par élimination du bourgeon ou chimique sous l’action des hormones à
dominance auxinique. Cette phase se déroule à l’obscurité et aboutit à la formation de souches
réactives.
ii) Multiplication de bourgeons :
La multiplication des bourgeons se fait autant de fois qu’il faut pour atteindre le nombre de
bourgeons désirés. Elle s’effectue à la lumière dans un milieu où la teneur en Cytokinines et
élevée.
iii) Elongation de bourgeons :
Cette étape consiste à cultiver les plantules dans un milieu aillant des concentrations en
hormones (Cytokinines) qui favorisent leur allongement.
iv) Enracinement de plantules :
Pour obtenir des plantes complètes, on transfère les tiges sur un milieu frais habituellement
enrichi en auxines, c’est le principe du bouturage. Des cellules de la tige vont former un
méristème qui va développer des racines.
v) Acclimatation de plantules :
C’est l’étape la plus importante, elle consiste à transférer les plantules sous serre pour
s’adapter à la vie à l’air libre. Chaque échec à cette étape veut dire échec à tous les stades
précédents, et perte du temps, des efforts, et des coûts.

13
Figure 2 : étapes de la culture in vitro par la méthode d’organogenèse et l’embryogenèse
somatiques
3- Les facteurs de maitrise :
a) Milieu de culture :
Généralement, un milieu basal de sels inorganiques de Murashige et Skoog (1962) (MS) est
utilisé pour la micropropagation du palmier dattier. Basé sur la multiplication stade, il peut
être utilisé à pleine force ou dilué habituellement à la moitié de la force en raison de son
niveau élevé de sels principalement d'ammonium (Abahmane, 2011). Un milieu de culture est
constitué principalement d’eau, de sels minéraux (macro-éléments, microéléments, fer),
d’éléments organiques (vitamines, sucre, parfois des acides aminés, etc.), de régulateurs de
croissance. Cette solution aqueuse est souvent solidifiée au moyen d’agar. L’agar est
facilement dissous à 100°C, on doit donc atteindre le point d’ébullition afin de l’incorporer au
milieu de manière uniforme.
Les milieux de culture sont distribués dans des tubes à essai (150 × 25 mm) à 15-20 ml ou
bocaux de culture (flacons de 250 ml, bocaux de 170 ml ou contenants magenta) à 50 ml.
Les milieux sont ensuite autoclaves à 121 ° C et sous une pression de 1 bar pendant 15 à 30
minutes en fonction du volume du milieu de culture dans les récipients (Abahmane, 2011).
b) L’environnement :
Après transfert dans des milieux de culture, les explants sont incubés pendant 3-6 mois dans
l'obscurité de manière à favoriser l'initiation des bourgeons et à empêcher l'oxydation des
composés phénoliques qui se produit dans des conditions de lumière. Les explants doivent
être transférés vers de nouveaux milieux chaque mois. Après l'initiation, les pousses sont
transférées dans des conditions éclairées avec une photopériode de 16 h. La température de

14
l'air dans la chambre de croissance est maintenue à 27 ± 1 ° C pendant la période éclairée et
22 ± 1 ° C pendant la période sombre (Anjarne et al., 2005 ; abahmane et al., 1999).
c) Les conditions aseptiques :
Comme les milieux sont riches et les conditions de cultures chaudes et humides, toutes les
conditions d'un développement bactérien ou fongique sont réunies. Les causes d'infection sont
nombreuses. Il faut donc manipuler dans des conditions d'asepsie rigoureuses :
 Matériels passés à l'alcool et flambés,
 Désinfection des plantes à la Javel puis rinçage a l'eau distillée avant l’extraction de
l'explant.
 Travaille sous la hotte

IV- Problèmes de la phoeniciculture au Maroc :

Le Maroc qui était au 19ème siècle, exportateur de dattes de bonnes qualité commerciale vers
l’Europe, devient importateur au cours du 20ème siècle (Sedra, 2003). Les principales causes
de cette dégradation sont :
1- La maladie du Bayoud :
Le Bayoud sévit uniquement en Afrique du Nord, dans toutes les grandes palmeraies du
Maroc (sauf Ouarzazate et Marrakech). La maladie est originaire de la vallée du Draa, au
Maroc, où elle fut observée pour la première fois vers 1870. Elle s’est ensuite propagée dans
l’ensemble des palmeraies marocaines. Les pertes ont été estimées à plus de 10 millions de
palmiers détruits, soit les deux tiers des arbres productifs. De fait, le Bayoud a été, et
demeure, la maladie la plus destructrice dans le Maroc (Fernandez et al., 1995).
2- La sécheresse :
L'effet des sécheresses prolongées qui ont occasionné des dégâts sur les palmiers dus au
dessèchement. Au début des années 80, près de 350 000 palmiers ont subi un dessèchement
néfaste dans les palmeraies du Draâ et du Tafilalet (El Hadrami, 1998).
3- L’invasion par le sable :
L'invasion des palmeraies par le sable, qui a conduit les exploitants à abandonner leurs
vergers phoénicicoles, malgré leurs multiples tentatives de lutte désespérée dans l’ensemble,
contre l'ensablement et les sécheresses prolongées (Sedra, 2003).
4- Désintérêt des phoeniciculteurs :
L’absence de la rentabilité souhaitée du secteur phoénicicole à cause de la faiblesse des
productions de dattes de qualité marchande élevée, qui a conduit la plupart des agriculteurs à
se désintéresser de la culture du palmier et de son bon entretien. En effet, le palmier dattier ne

15
bénéficie plus désormais de soins spéciaux à l’exception des opérations de pollinisation, de
récolte et d’irrigation qui se pratiquent globalement de façon traditionnelle et empirique (El
Hadrami, 1998 ; Sedra, 2003).
Grâce à ces problèmes, le Maroc est confronté à un grand dilemme et les techniques
conventionnelles se révèlent insuffisantes pour la restauration des palmiers détruits pendant
toutes ces années.
Ainsi, le Maroc s'est tourné vers la culture in vitro et spécifiquement la multiplication par la
technique d’organogenèse pour essayer de répondre à l'énorme demande de plantes in vitro.
Le présent travail a été entrepris afin d’optimiser la technique d’organogenèse chez le palmier
dattier. Il vise la détermination de la concentration idéale des différentes hormones végétale
qui donne le maximum effet sur la multiplication et l’élongation des souches de la variété
Boufeggous.

16
 Matériel et méthodes

I- Matériel végétal :
Ce travail a été réalisé sur la variété Boufeggous qui se caractérise par une bonne qualité
dattièrs. Des souches identiques ont été utilisées pour évaluer les effets des différentes
concentrations en régulateurs de croissance. Les phases précédentes ont été réalisées au
laboratoire de culture in vitro des tissus à l’INRA Marrakech à partir du cœur de rejets du
palmier dattier.

II- Milieu de culture :

Le milieu de base utilisé est le milieu MS (MURASHIGE et SKOOG, 1962). Certains
composés comme les macroéléments, les microéléments, le fer et les vitamines sont requis en
si petite quantité qu’il est impossible de les peser. On doit donc les concentrer préalablement
sous forme de solutions-mères.
1- Préparation des solutions mères
Les différentes méthodes de préparation de ces solutions-mères sont montré si dessous :
a- Les macroéléments :
Une solution mère concentré 40 fois par rapport au milieu de culture est préparée en
solubilisant sous agitation et sans chauffage les différentes quantités de macroéléments dans
de l’eau distillé stérile. Chaque élément est solubilisé seul avant d’être ajouté à la solution
mère. Cette dernière est par la suite ajustée à 1L dans une fiole jaugée.
Tableau 3 : composition en macroéléments par litre de la solution mère et du milieu MS
Composition Milieu de culture en mg/L Solution mère en mg/L
NH4NO3 1650 33 000
KNO3 1900 38 000
CaCl2 332 6 640
MgSO4,7H2O 370 7 400
KH2PO4 170 3 400

b- Les microéléments :
Les microéléments sont préparés en solution mère 200 fois concentrés par rapport au milieu
de culture. Chacun de ces microéléments est solubilisé sous agitation dans l’eau distillée
stérile, puis ajouté dans une fiole jaugée, qu’on ajuste à 1L avec l’eau distillé stérile.

17
Tableau 4 : compositions en microéléments par litre de la solution mère et de milieu MS
Composition Milieu de culture en Solution mère en
mg/L mg/L
MnSO4,H2O 16,9 3 380
ZnSO4,7H2O 8,6 1 720
CuSO4,5H2O 0,025 5
H3BO4 6,2 1 240
KI 0,83 166
NaMo4,2H2O 0,25 50
CoCl2,4H2O 0,025 5

c- Le fer :
La solution ferrique est obtenue en dissolvant a part du sulfate de fer FeSO4,7H2O et l’EDTA
dans l’eau distillée stérile, en les mélangeant ensuite selon les quantités présenté dans le
tableau 5 pour obtenir une solution mère 200 fois concentré par rapport au milieu de culture.
Le rôle de l’EDTA est d’éviter la précipitation du fer dans le milieu.
Tableau 5 : composition en Fe-EDTA de la solution mère
composition Milieu de culture en mg/L Solution mère en mg/L
FeSO4,7H2O 27,8 5 560
Na2EDTA,2H2O 37,3 7 460

d- Les vitamines :
Les vitamines sont dissoutes dans l’eau distillée stérile puis versé et ajusté dans une fiole
jaugée de 100ml. Le tableau 6 présente la composition de la solution vitaminique en
mg/100ml, et en mg/L de milieu de culture.
Tableau 6 : composition en vitamines de la solution mère et du milieu de culture
Composition Milieu de culture en mg/L Solution mère en mg/100ml
Thiamine, HCl 10 1000
Acide nicotinique 1 100
Pyridoxine 0,1 10
Biotine 0,01 1

2- Préparation du milieu :
Après l’obtention des différentes solutions, on procède à la préparation du milieu. Dans un
erlenmeyer de 5L déposé sur un agitateur chauffant, on ajoute 1L d’eau distillé puis 9g d’agar,
après homogénéisation on ajoute les différents constituants montré dans le tableau 7 à

18
l’exception de l’adénine qui doit être solubilisé seul avant son addition. Après on ajuste à 2,5L
avec l’eau distillé.
Tableau 7 : concentration des constituants de milieu MS par litre puis par 2,5 litres
Constituant Quantité par 1L Quantité par 2,5L
Macroéléments 50 ml 125 ml
Microéléments 5 ml 12,5 ml
Vitamines 1 ml 2,5 ml
Fe-EDTA 5 ml 12,5 ml
Adénine 20 mg 50 mg
Myo-inositol 100 mg 250 mg
Glutamine 100 mg 250 mg
Saccharose 30 g 75 g

Après on distribue les 2,5L du milieu dans 5 erlenmeyers de 0,5L et on ajoute les hormones
dans 4 de ces erlenmeyers suivant les différentes concentrations montré dans le tableau 8. Le
5ème erlenmeyer va contenir le milieu témoin et donc ne doit pas contenir les hormones.
Tableau 8 : concentration des différentes hormones dans chaque milieu en ml/L
Milieu
hormone A1 A2 A3 A4 A5
KIN 2 1 0,5 0,25 0
IPA 1,5 0,75 0,36 0,25 0
AIA 1 0,5 0,25 0,1 0
ANA 0,1 0,05 0,025 0,05 0

Après l’ajustement du pH à 5,8 , les milieux de cultures sont distribués à l’aide d’un
distributeur de milieu dans des tubes à essais à raison de 11 ml/tube, 30 tubes/milieu, puis
enfermés avec des capuchons en polycarbonate, puis enveloppés avec du papier kraft et
autoclaves pendant 20 min en phase de vapeur sous une température de 121°C et une pression
de 1 bar.

III- Repiquage et culture des souches :

Les souches de Boufeggous ont été repiquées sur les différents milieux de culture sous une
hotte à flux laminaire nettoyé avec de l’alcool 70% et du coton stérile. Puis les cultures sont
incubées dans des étagères sous une température de 27±2 °C avec une photopériode de 16h/8.
L’éclairement est d’environ 2500 lux et est fourni avec des tubes à néon blanc, et l’humidité
est au voisinage de 100%. Les cultures sont entretenues par repiquages sur des milieux frais
tous les 30 jours.

19
 Photo 1 : souches végétales incubée dans les différents milieux

Photo 2 : souches végétales après 30 jours d’incubation

IV- Observations et critères d’évaluation :

Pour évaluer l’effet des différents milieux sur la multiplication des souches, des observations
sur des critères donnés ont été faites pour chaque milieu :
1- Taux de multiplication :
Ce critère d’évaluation estime la capacité des souches mises en culture sur les différents
milieux à se multiplier et donner des nouveaux bourgeons néoformés. A la fin du repiquage,
on note combien on a eu des tubes par milieu et on divise le nombre obtenu par le nombre
original des tubes et ce rapport nous donne le taux de multiplication.

20
 2- Nombre et longueur des feuilles :
Ce critère d’évaluation représente une estimation de la capacité des souches mises en culture
sur les différents milieux à néoformé des feuilles. Le nombre et longueurs des feuilles
néoformées ont été noté au moment de chaque observation.
3- Indice de verdissement :
Ce critère d’évaluation donne une idée sur la quantité de chlorophylles synthétisées et aussi
sur la capacité photosynthétique pour chaque souche. Ceci a été réalisé par comparaison de
chaque souche à une gamme formée de 5 souches qui présentent un degré de verdissement
progressif.

1 2 3 4 5

Photo 3 : échelle de verdissement progressif

4- Nombre et longueur des racines :

Ce critère d’évaluation estime la capacité des souches mises en culture sur les différents
milieux à néoformé des racines. Le nombre des racines néoformées et leurs longueurs ont été
noté au moment de chaque observation.
5- Indice de la taille des bourgeons :
Comme l’indice de verdissement, ce critère a été réalisé par comparaison de chaque souche à
une gamme formée de 5 souches dont la taille des bourgeons varie progressivement.

21
 1 2 3 4 5

Photo 4 : échelle de taille des bourgeons progressif

Le calcul des résultats, les moyennes et les histogrammes ont été faites par Microsoft Office
Excel.

22
 Résultats et discussion

I- Résultats :
1- Taux de multiplication :
D’après la figure 3, nous constatons une distinction des milieux A4 (0.25ml/L de KIN ;
0.25ml/L d’IPA ; 0.1ml/L d’AIA et 0.05ml/L d’ANA) et A5 (sans hormones). Les
concentrations faibles ou l’absence de ces hormones ont donné le meilleur taux de
multiplication avec une moyenne de 1.7 pour A4, et 1.82 pour A5. Les concentrations des
hormones dans les milieu A1 (2ml/L de KIN ; 1.5ml/L d’IPA ; 1ml/L d’AIA et 0.1ml/L
d’ANA), A2 (1ml/L de KIN ; 0.75ml/L d’IPA ; 0.5ml/L d’AIA et 0.05ml/L d’ANA) et A3
(0.5ml/l de KIN ; 0.36ml/L d’IPA ; 0.25ml/L d’AIA et 0.025ml/L d’ANA) ont donné un taux
de multiplication relativement faible. Ceci montre que les concentrations élevées des
hormones défavorisent la multiplication des souches.

2 1,82
1,8 1,7
1,58
taux de multiplication

1,6 1,5
1,41
1,4
1,2
1
0,8
0,6
0,4
0,2
0
Milieu A1 Milieu A2
milieuMilieu A3 Milieu A4 Milieu A5

Figure 3 : effet des hormones sur la multiplication des souches

2- Nombre et longueur des feuilles :

Les résultats de la figure 4 montrent que les souches dans les milieux A1 (2ml/L de KIN ;
1.5ml/L d’IPA ; 1ml/L d’AIA et 0.1ml/L d’ANA) et A2 (1ml/L de KIN ; 0.75ml/L d’IPA ;
0.5ml/L d’AIA et 0.05ml/L d’ANA) ont le nombre le plus élevée des feuilles, mais également
les autres milieux présentent un nombre assez élevé des feuilles. Cela nous dis que l’effet des
hormones sur le nombre des feuilles n’est pas significatif.

23
 10 8,64
8,41
nombre des feuilles
7,47
8 6,82
6,29
6
4
2
0
Milieu A1 Milieu A2 Milieu A3 Milieu A4 Milieu A5
milieu

Figure 4 : effet des milieux sur le nombre des feuilles

D’un autre côté et en se concernant la longueur des feuilles, les milieux A2, A3 et A4
présentent des souches avec des feuilles longues par rapport au milieux A1 et A5 comme il est
montré dans la figure 5. Le meilleur allongement des feuilles est trouvé dans le milieu A3
avec une valeur moyenne de 2.91 cm

3,5
2,84 2,91
longueur des feuilles

3 2,76
2,5 2,04
1,9
2
1,5
1
0,5
0
Milieu A1 Milieu A2 Milieu A3 Milieu A4 Milieu A5
Milieu

Figure 5 : effet des milieux sur l’allongement des feuilles

3- Indice de verdissement :
La figure 6 montre que les milieux A1, A2 et A3 représentent l’indice de verdissement élevé
dont le plus grand est de A2 avec une valeur moyenne de 3.41. Mais même si les autres
milieux représentent une valeur relativement faible, la gamme de différence n’est pas assez
grand pour dire c’est un effet des hormones car les autres milieux ont montré des feuilles avec
un indice de verdissement élevé.

24
 4 3,41 3,23
indice de verdissement
3,5 3,11 3,05
3 2,76
2,5
2
1,5
1
0,5
0
Milieu A1 Milieu A2 Milieu A3 Milieu A4 Milieu A5
Milieu

Figure 6 : effet des milieux sur l’indice de verdissement

4- Nombre et longueur des racines :
La figure 7 nous montre une bonne émission racinaire chez les souches mises dans les milieux
A2, A3 et A5 dont le meilleur nombre a été obtenu dans les milieu A3 et A5 avec une valeur
de 2.47 pour chaque milieu. Par contre les milieux A1 et A4 ont donné un nombre assez faible
des racines. D’une autre côté la longueur des racines a été plus ou moins la même dans tous
les milieux à l’exception des milieux A1 et A4 qui ont montré une valeur respectivement de
0.7 cm et 0.58 cm.
3
2,41 2,47 2,47
2,5
2 1,82
1,64
1,5
1,02 0,97
0,88
1 0,7 0,58
0,5
0
Milieu A1 Milieu A2 Milieu A3 Milieu A4 Milieu A5

Nombre Longueur

Figure 7 : effet des milieux sur le nombre et la longueur des racines

5- Indice de la taille des bourgeons :

La figure 8 nous montre une diminution progressive de la taille des bourgeons dont le milieu
A1 présente les souches avec le plus grand indice de la taille et le milieu A5 présente les
souches avec le plus faible indice.

25
Indice de la taille des 4
3,5
3
bourgeons

2,5
2
1,5
1
0,5
0
Milieu A1 Milieu A2 Milieu A3 Milieu A4 Milieu A5
Milieu
Figure 8 : effet des milieux sur la taille des bourgeons

II- Discussion :
Les régulateurs de croissance sont impliqués dans la morphogenèse en culture in vitro. Les 5
milieux différents présentent des résultats qui sont basée sur les différentes concentrations des
hormones végétales. Le milieu A1 présente la meilleure taille des bourgeons avec une
multiplication et un verdissement importantes, mais il n’est pas très efficace pour le nombre et
longueur des feuilles et racines. Les milieux A2 et A3 présentent des tailles assez importantes
des bourgeons, tailles et nombres très importants des feuilles et racines et un verdissement
élevé mais ils ont un taux de multiplication faibles par rapport aux autres milieux. Et même si
les milieux A4 et A5 présentent un taux de multiplication élevé, ils manquent dans les autres
critères.
D’après ces résultats on peut dire que le milieu A2 (1ml/L de KIN ; 0.75ml/L d’IPA ; 0.5ml/L
d’AIA et 0.05ml/L d’ANA) présente les meilleurs résultats puisque les bourgeons, les feuilles
et les racines sont de très bon qualité et il présente un taux de multiplication élevé.

26
 Conclusion

En conclusion, le présent travail a mis en évidence le rôle des différentes concentrations en

hormones végétales dans la multiplication des souches de la variété Boufeggous et a fourni
une méthode pratique pour la production de ces souches.
Les résultats de ce travail indiquent que le milieu A2 (1ml/L de KIN ; 0.75ml/L d’IPA ;
0.5ml/L d’AIA et 0.05ml/L d’ANA) est le meilleur milieu pour la multiplication des souches
qui présentent des bourgeons et des feuilles en très bon qualités ainsi que des racines
nombreuses et de grand taille. Ces résultats pourraient aider à améliorer le rendement du
palmier dattier et pourraient être aussi généralisés aux autres variétés de cette plante autre que
la variété Boufeggous.
Comme deuxième perspective à ce travail on propose de faire une étude qui compare l’effet
des différents comportements du milieu MS ou bien d’autres types du milieu afin d’opter pour
le milieu le plus favorable pour la multiplication du palmier dattier.

27
 Références bibliographiques

 Abahmane L, Bougerfaoui M, Anjarne M (1999) Use of tissue culture techniques

for date palm propagation and rehabilitation of palm groves devastated by bayoud
disease. Proceedings international symposium on date palm, Assiut University, Assiut
(Egypt) Nov 9-11
 Abahmane, L.2011a. Date palm micropropagation via organogenisis. In: S.M. Jain,
J.M.Al-Khayri and D.V. Johnson (Eds), pp.69-90. Date Palm Biotechnology,
Springer, Dordrecht
 Aissam F, 1990. Observation histologique sur l’organogenèse et le développement des
bourgeons du palmier dattier (Phoenix dactylifera L.) en culture « in vitro », thèse de
3ème cycle, Université Cadi Ayyad Marrakech, Maroc, 99pp.
 Anjarne M, Abahmane L, Bougerfaoui M (2005) Les techniques de
micropropagation du palmier dattier (Phoenix dactylifera L.) : Expérience de l’INRA–
Maroc. Actes du Symposium International sur le Développement Agricole Durable
des Systèmes Oasiens. Erfoud, Morocco, Mar 8–10, pp 86–93.
 Edwin, G., H. Mike, and G. J. De Klerk. “Plant Propagation by Tissue Culture 3rd
Edition: Volume 1. The Background.”(2008).
 El Hadrami, I., and M. Baaziz. “Somatic embryogenesis and analysis of peroxidases
in Phoenix dactylifera L.” Biologia plantarul 37.2 (1995): 197-203.
 El Hadrami, Ismaïl, et al. "Biotechnologies végétales et amélioration du palmier
dattier (Phoenix dactylifera L.), pivot de l'agriculture oasienne marocaine." Cahiers
Agricultures 7.6 (1998): 463-468.
 EL HADRAMI I., EL HADRAMI A., 2008 – « Breeding date palm ». In breeding
plantation tree crops: Tropical species, Jain Shri Mohan; Priyadarshan, P.M. (eds.),
2008, Approx. 660 p., Hardcover ISBN: 978-0-387-7199-7.
 FAO (2016) http://faostat.fao.org
 Fernandez D, et al., 1995. Le Bayoud du palmier dattier, une maladie qui menace la
phoéniciculture, phytoma, la défense des végétaux, 469 :36-39.

28
 Ferry M, Bouguedoura N, El Hadrami I (1998) Patrimoine génétique et techniques
de propagation in vitro pour le développement du palmier dattier. Spécial Oasis.
Sécheresse 9(2):139–146
 Haddouch, M. "Situation actuelle et perspectives de développement du palmier
dattier au Maroc." Options Mediterr28 (1996): 63-79.
 Loutfi K 1999.Organogenesis et embryogenèse somatique à partir des tissus floraux
du Palmier dattier (Phoenix dactylifera L.) cultivés in vitro. Aspects histologiques et
caryologie des vitroplants. Thèse de Doctorat, Université Cadi Ayyad, Faculté des
Sciences Semlalia- Marrakech.
 Munier, 1973.Le palmier dattier. Paris : Ed. Maison-neuve et Larose, 217p
 Sedra, Moulay Hassan. Le palmier dattier base de la mise en valeur des oasis au
Maroc: techniques phoénicicoles et création d'oasis. INRA Editions, 2003.
 Tisserat B (1982) Development of new tissue culture technology to aid in the
cultivation and crop improvement of date palms. Proceedings first symposium on date
palm. King Faisal University, Saudi Arabia, pp 126–140.

29