CFGS Laboratorio Clínico y Biomédico – Técnicas de Inmunodiagnóstico Cristina Durán Bretón
TAREA PARA TID01
Actividad 1.
• Explica cuál es la utilidad de la prueba de Coombs directa. (1 punto).
La prueba de Coombs es una prueba que permite detectar la sensibilización de
eritrocitos por IgG, actuando como antígeno frente a la antiglobulina.
La prueba directa, detecta sensibilizaciones in vivo, es decir, la unión de anticuerpos
producidos por el propio organismo a antígenos presentes en eritrocitos del paciente.
Se incuba el suero problema con hematíes Rh +, si hay IgG anti-Rh se unirán a estos
hematíes y al añadir el reactivo de Coombs se producirá la aglutinación de los hematíes.
• Pon algún ejemplo de situación en la que se realice dicha prueba. (0,5
puntos).
Se puede utilizar para el diagnóstico de la anemia hemolítica autoinmune o para detectar
la enfermedad hemolítica del recién nacido.
Actividad 2.
En esta imagen puedes ver los resultados de una hemaglutinación en microplaca.
Cada fila corresponde a un paciente diferente identificado con un número. Las
columnas corresponden a diferentes diluciones de la muestra y a los controles.
(0,5 puntos por apartado).
a. ¿Qué fenómeno ha tenido lugar en los pocillos 1/2 y /1/4 del paciente 6?
Se ha producido el fenómeno de prozona por exceso de anticuerpos. Ya que, se
bloquean todos los puntos de unión del antígeno (epítopos) y, de igual modo, se
impide la agregación de las partículas antigénicas.
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b. ¿Qué tipo de control es el control A?
El control A es un control positivo. Se realiza con un suero positivo que posee los
anticuerpos que se quieren determinar en el suero problema. Pone de manifiesto la
correcta reactividad de las partículas sensibilizadas.
c. ¿Qué tipo de control es el control B?
El control B es un control negativo. Se realiza con solución salina donde los anticuerpos
que se quieren determinar en el suero problema, están ausentes. Pone de manifiesto
la especificidad de la técnica.
d. ¿Cuáles son los títulos de los pacientes 1 y 6?
Título del paciente 1: 64
Título del paciente 6: 128
El título de anticuerpos es la inversa de la dilución más elevada de la muestra que
resulta aglutinada.
Actividad 3.
El pocillo 1 contiene una mezcla de dos anticuerpos monoclonales A y B. Los
pocillos 2 y 3 contienen dos soluciones antigénicas diferentes. (0,5 puntos por
apartado).
a. ¿A qué técnica corresponde este tipo de esquema?
Pertenece a la técnica de precipitación en gel. Dónde, los componentes de la
reacción se depositan en los pocillos, difunden a través del gel y en la zona donde
se alcanza el punto de equivalencia, es decir, donde existen concentraciones
equiparables de antígeno y anticuerpo, forman los inmunocomplejos y aparecen
líneas, arcos o bandas que precipitan y se observan a simple vista.
b. ¿Cómo se denomina a la reacción que se observa?
Se denomina doble difusión o reacción de Ouchterlony. Se excavan tres pocillos, en
dos se dispensa dos soluciones antigénicas y en el otro, el suero en el que se
encuentran los anticuerpos específicos.
En este caso, de estudio de identidad entre antígenos, se determina la existencia o
no de determinantes comunes entre antígenos estudiando las bandas de
precipitación formadas.
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c. ¿Por qué se produce esta reacción a pesar de que las dos soluciones
antigénicas no son iguales?
La reacción que se produce es la de identidad total, porque los dos antígenos
comparten todos los determinantes antigénicos (epítopos), a pesar de no ser
iguales.
Actividad 4.
En un enzimoensayo de fluorescencia los pocillos con control positivo no
muestran ningún tipo de fluorescencia. (0,5 puntos por apartado)
a. ¿Cuáles pueden ser los motivos?
Puede ser debido a la no formación del producto enzimático, producido cuando la
enzima da lugar a la formación del producto a partir del sustrato y que sería capaz de
generar la fluorescencia.
Esto es generado por algún error en la realización de la técnica, dando lugar a posibles
resultados falsos. Debería mostrar color después del revelado porque sí debería
contener el analito que se está estudiando.
b. ¿Y si los pocillos con controles negativos mostraran fluorescencia?
Puede ser debido a la formación del producto enzimático, de forma errónea, generando
un producto que se cuantifica con el fluorímetro.
No debería mostrar color después del revelado porque no contiene el analito que se
está estudiando.
Actividad 5.
En una determinación de TSH mediante una técnica ELISA se utilizan siete
estándares. En la tabla adjunta puedes ver sus concentraciones y sus
absorbancias leídas a 450 nm. En la misma microplaca, la absorbancia de un suero
problema es de 0,742. (0,5 puntos por apartado)
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a. Representa gráficamente los datos utilizando una aplicación de cálculo. El
eje de las "x" debe estar en escala logarítmica.
Determinación de TSH por ELISA
3,5
2,5
Absorbancia
1,5
0,5
0
1 10 100
µlU/mL
b. Halla la ecuación de la mejor curva de regresión y calcula la concentración
de TSH en el suero problema. Debes copiar el gráfico obtenido y pegarlo
en el documento final junto con las respuestas.
Determinación de TSH por ELISA
3,5
y = 0,055x + 0,2949
3
R² = 0,9672
2,5
Absorbancia
1,5
0,5
0
1 10 100
µlU/mL
Siendo la ecuación de regresión y sustituyendo la absorbancia: 0,742 en “y”, para
conocer la concentración del problema, obtenemos el siguiente resultado:
y = 0,055x + 0,2949;
0,742 = 0,055 X + 0,2949; X = 8,13 µlU/mL
Por lo tanto, la concentración de TSH en el Suero problema es de 8,13 µlU/mL
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Actividad 6.
En la tabla siguiente puedes observar qué componentes intervienen en la
realización del ELISA de la pregunta anterior:
a. Fíjate en los componentes que se utilizan y di de qué tipo es la técnica
ELISA. (0,5 puntos)
Es una técnica ELISA sándwich.
b. En la tabla, rellena las celdas de la columna "Orden" con los números del
1 al 6 según el orden de la etapa que corresponda. (1 punto)
Etapas en la técnica ELISA
Etapas Orden
Muestra del paciente. 2
Complejo avidina-peroxidasa. 5
Microplaca sensibilizada con anti-TSH monoclonal. 1
Anti-TSH policlonal. 3
TMB y peróxido de hidrógeno. 6
Anti-Ig biotinilada. 4
Actividad 7.
Rellena la tabla siguiente, indicando qué tipo de detección se utiliza en cada
técnica (colorimetría, fluorescencia, radiactividad o quimiluminiscencia). (0,5
puntos).
Detección de diferentes tipos de inmunoensayos.
Técnica Detección
EMIT Colorimetría
FPIA Fluorescencia
RIA Radiactividad
CMIA Quimioluminiscencia
Actividad 8.
Explica los métodos de transferencia que se utilizan para realizar un Western blot
(1 punto).
La transferencia consiste en recubrir el soporte con una hoja de papel de nitrocelulosa,
para que las proteínas se transfieran del soporte a la membrana en la misma posición y
se unan a ella de forma irreversible.
La transferencia se puede hacer de dos formas:
- Por electroforesis: aprovechando las cargas negativas de las proteínas. Ya que,
el electrodo negativo se encuentra bajo el soporte y el positivo sobre la
nitrocelulosa.
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- Por capilaridad: a través del flujo de solución amortiguadora desde unos papeles
de filtro húmedos situados bajo el gel a otros secos que se hallan sobre la
nitrocelulosa.
