ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA
DE CHIMBORAZO
FACULTAD DE CIENCIAS
BIOQUÍMICA Y FARMACIA
QUÍMICA ANALÍTICA
PREPARCIÓN DE TAMPONES
CURSO:
TERCERO “A”
GRUPO:
7
PROFESOR:
ING. CARLOS PILAMUNGA
INTEGRANTES: CÓDIGOS:
• AREVALO CARLOS 4393
• BRAVO ANDRES 4520
• CAICEDO DERICK 4548
• COBO CATALINA 4504
• SANCHEZ XIMENA 4626
OCTUBRE 2023 – MARZO 2024
1. OBJETIVOS
1.1 OBJETIVO GENERAL
• Definir el procedimiento de la preparación de disoluciones tampón mediante ejemplos
para ser elaborados en el laboratorio.
1.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS
• Detallar el procedimiento de la elaboración de disoluciones tampón a un pH de 4, 7 y
10 en el laboratorio.
2. INTRODUCCIÓN
En la presente investigación científica, se da a conocer las distintas preparaciones de
disoluciones de tampón que cumplen un papel esencial para garantizar la estabilidad del
entorno químico en el que se llevan a cabo diversos análisis. Las disoluciones tampón de pH
4, 7 y 10 son particularmente cruciales en este contexto, ya que abarcan una amplia aplicación
en campos como la bioquímica, la biología molecular y sobre todo en la química analítica.
Estas soluciones, están diseñadas para mantener el pH constante frente a la adición de ácidos
o bases, son fundamentales para la reproducibilidad y precisión de los resultados
experimentales.
Es por eso que esta investigación se enfoca en proporcionar una visión integral y
práctica sobre la preparación de disoluciones tampón de pH 4, 7 y 10. A lo largo de esta
consulta, se abordarán no solo las fórmulas químicas específicas y los procedimientos
detallados, sino también la importancia crítica de estas soluciones en la consecución de
investigaciones de alta calidad. La comprensión y aplicación correctas de estos métodos
prácticos no solo impactarán directamente en la eficacia de los experimentos, sino que también
ofrecerán un fundamento sólido para la optimización de resultados en disciplinas científicas
diversas.
3. MARCO TEÓRICO
3.1 Que son las Disoluciones Tampón, sus aplicaciones y sus ventajas en diferentes
campos de la ciencia.
Las disoluciones tampón, son soluciones químicas que tienen la capacidad de
resistir cambios significativos en su pH cuando se les agregan ácidos o bases. Estas
soluciones contienen un ácido débil y su base conjugada o una base débil y su ácido
conjugado. La presencia de ambos componentes permite que el sistema amortiguador
actúe como un regulador de pH, manteniendo la acidez o alcalinidad relativamente
constante (ES, 2023).
Componentes Principales de una Disolución Tampón:
Ácido débil y su base conjugada o Base débil y su ácido conjugado: Estos
componentes son cruciales para proporcionar la capacidad de amortiguación al
sistema.
Concentración Adecuada: La concentración de los componentes debe ser suficiente
para mantener la capacidad de amortiguación en un rango efectivo.
Aplicaciones de las Disoluciones Tampón:
Bioquímica y Biología Molecular: En experimentos de biología molecular, como la
PCR (Reacción en Cadena de la Polimerasa), las disoluciones tampón mantienen un
entorno óptimo para la actividad de enzimas a lo largo del proceso. Se utilizan en
estudios de biología celular para mantener condiciones fisiológicas estables durante
experimentos en cultivos celulares.
Química Analítica: En análisis químicos, las disoluciones tampón se emplean para
calibrar instrumentos de medición de pH y para estandarizar soluciones ácidas o
básicas. Facilitan la determinación precisa del punto final en titulaciones ácido-base.
Farmacología y Medicina: En la fabricación de medicamentos, las disoluciones
tampón son esenciales para garantizar la estabilidad de las formulaciones y la eficacia
de los principios activos. Se utilizan en laboratorios clínicos para preparar muestras
biológicas y mantener condiciones adecuadas para ensayos bioquímicos.
Industria Alimentaria: En la industria alimentaria, se aplican para controlar y
mantener el pH en productos como bebidas y alimentos procesados. Contribuyen a
preservar la calidad y la seguridad de los alimentos mediante el control de la acidez
([Link], 2019).
Ventajas de las Disoluciones Tampón:
Estabilidad del pH: La principal ventaja radica en su capacidad para mantener un pH
constante, lo que es crucial en numerosos procesos biológicos y químicos.
Prevención de Cambios Drásticos: Evitan cambios bruscos en el pH,
proporcionando un entorno más estable para las reacciones químicas y biológicas.
Optimización de Procesos Experimentales: Mejoran la reproducibilidad y la
precisión de los resultados experimentales al proporcionar un entorno controlado.
Versatilidad de Aplicaciones: Su utilidad abarca una amplia variedad de campos
científicos, desde la investigación biomédica hasta la industria alimentaria, lo que
demuestra su versatilidad y relevancia.
3.2 Con que otro nombre se les conoce a las disoluciones de tampón de pH 4, 7 y 10
y cuáles son sus propiedades.
Las disoluciones de tampón también se las conocen con el nombre de
"sistemas amortiguadores" o simplemente "buffers". Estos términos se utilizan de
manera intercambiable para referirse a soluciones que tienen la capacidad de resistir
cambios significativos en su pH cuando se les agregan ácidos o bases. La función
principal de estos sistemas es actuar como reguladores de pH, manteniendo la acidez
o alcalinidad en un rango relativamente constante (Reagents, 2018).
pH 4: También puede ser llamado "Buffer Ácido" o "Solución Tampón Ácida”.
Ejemplo: "Buffer Ácido Acético/Acetato" utilizando ácido acético y acetato. Los
tampones ácidos son fundamentales en experimentos bioquímicos específicos.
Muchas enzimas tienen una actividad óptima a pH 4, por lo que la preparación de
soluciones tampón en este rango es esencial para mantener la actividad enzimática
(FIÑANA, 2022).
pH 7: Es comúnmente conocido como "Buffer Neutro" o "Solución Tampón Neutra".
Ejemplo: "Buffer Fosfato" utilizando ácido fosfórico y fosfato de sodio. El pH neutro
es crucial en aplicaciones biológicas y en la calibración de instrumentos. Tampones
de pH 7 son comúnmente utilizados en biología molecular, microbiología y
bioquímica (FIÑANA, 2022).
pH 10: Se puede llamar "Buffer Alcalino" o "Solución Tampón Alcalina". Ejemplo
práctico: "Buffer Amoníaco/Amonio" utilizando amoníaco y amonio. Los tampones
alcalinos encuentran aplicación en la investigación de productos químicos básicos y
en ciertos procesos industriales. También son relevantes en el análisis de muestras que
requieren un ambiente alcalino (FIÑANA, 2022).
3.3 Métodos para medir el pH de una solución, tanto teórico como experimental.
Método teórico:
Cálculo a partir de la concentración de iones H+ y OH-: El pH se puede
calcular utilizando la concentración de iones hidrógeno (H+) en una solución acuosa.
La fórmula para calcular el pH es pH = -log[H+]. De manera similar, se puede calcular
el pOH utilizando la concentración de iones hidróxido (OH-) en una solución acuosa
(Valencia Carmona, 2020).
El método teórico más común para calcular el pH de una solución es utilizando
la fórmula matemática del logaritmo negativo de la actividad de los iones hidrógeno
(H+). La fórmula para calcular el pH es pH = -log[H+]. Esta fórmula se basa en la
concentración de iones hidrógeno en la solución y proporciona una medida del grado
de acidez o alcalinidad de la solución.
Es importante tener en cuenta que el pH es una escala logarítmica negativa, lo
que significa que cada unidad de cambio en el pH representa un cambio de 10 veces
en la concentración de iones hidrógeno. Por ejemplo, una solución con un pH de 3 es
10 veces más ácida que una solución con un pH de 4 (Skoog, D., & West, D. , 2014).
Método experimental:
- Uso de indicadores de pH: Los indicadores de pH son sustancias químicas
que cambian de color en función del pH de la solución. Al agregar un indicador de pH
a la solución, se puede observar un cambio de color que indica el pH aproximado.
Estos son solo algunos ejemplos de indicadores de pH comunes, pero existen
muchos otros disponibles. Cada indicador tiene un rango de pH específico en el que
cambia de color, lo que permite determinar aproximadamente el pH de una solución
mediante la observación del cambio de color (Salinas Hernandez, 2020).
- Uso de papel indicador de pH: El papel indicador de pH, también
conocido como papel de tornasol, es un papel impregnado con un indicador de pH. Al
sumergir el papel en la solución, este cambia de color y se puede comparar con una
escala de colores para determinar el pH (Domingues, 2022).
- Uso de medidores de pH: Los medidores de pH son instrumentos
electrónicos que miden directamente el pH de una solución. Estos dispositivos utilizan
un electrodo de vidrio y un circuito electrónico para medir y mostrar el valor de pH
(Guo, Y., Siretanu, I., Mugele, F., Mul, G., & Mei, B, 2023).
3.4 Como preparar una disolución tampón de pH 4.00
Para preparar una solución tampón con un pH de 4, es importante seleccionar
un ácido débil y su base conjugada que tengan un pKa cercano a 4. En este caso, el
ácido acético (CH₃COOH) y su base conjugada, el acetato (CH₃COO⁻), son una
opción común, debido a que su pKa corresponde a 4,75 (García , 2019).
• Acido: ácido acético
• Base Conjugada: Ion acetato
Para calcular las concentraciones, volúmenes y cantidades de sustancias
necesarias para preparar una solución tampón con pH de 4, se puede utilizar la
ecuación de:
(𝐴−)
𝑝𝐻 = 𝑝𝐾𝑎 + 𝑙𝑜𝑔
(𝐴𝐻)
Otra forma es a partir de una concentración conocida del ácido, después
calcular la concentración de iones hidronio y despejar la concentración de la base
conjugada de la fórmula de ka del ácido, para poder preparar la solución
amortiguadora de pH 4 (García , 2019).
Procedimiento de preparación a nivel de laboratorio
Para preparar las soluciones amortiguadoras se siguen varios pasos como:
calcular las concentraciones, las cantidades y el volumen objetivo, la medición y
pesado de las sustancias, mezcla de las mismas, aforar y etiquetar las soluciones
amortiguadoras.
EJEMPLO PRÁCTICO
Sustancias y Materiales
• Ácido acético
• Acetato de Sodio
• Agua destilada
• Matraz aforado de 50 ml
Procedimiento:
Primero se debe pesar con precisión 0,1g de Acetato de sodio en la balanza
analítica con la ayuda de un vidrio reloj, después medir con una micropipeta 1,5 ml
de ácido acético y depositarlo en el matraz de 50 ml en el previamente se debe preparar
una cama con agua destilada, seguido se debe colocar la cantidad pesada de acetato
de sodio en el matraz y después se debe aforar con agua destilada en el matraz aforado
de 50 ml y mezclar con las técnicas adecuadas para obtener una solución
amortiguadora de pH 4, se debe medir con pH metro o con la tira de papel tornasol.
Si es necesario corregir el pH se debe adicionar cantidades pequeñas de ácido o de la
base conjugada hasta llegar al pH de 4 (García , 2019).
3.5 Como preparar una disolución tampón de pH 7.00
Un pH igual a 7 es neutro, menor que 7 es ácido y mayor que 7 es básico a
25 ºC. A distintas temperaturas, el valor de pH neutro puede variar debido a la
constante de equilibrio del agua (Kw).
Es utilizado en laboratorios en general y en la industria. A diferencia de la
solución líquida, ésta no ocupa espacio en el lugar de trabajo, hasta que se prepara en
solución líquida, lo que permite ahorrar espacio. Son una opción práctica en estudios
de campo y para fácil transporte.
Donde pKa = -logKa
• [sal]=concentración de la sal
• [ácido]=concentración de iones hidrógeno
TAMPÓN FOSFATO
Se trata de un tampón inorgánico que se encuentra en los líquidos
intracelulares y mantiene el pH en torno al 6,86 debido al equilibrio existente entre
un ácido débil; eldihidrógeno fosfato (DHP) y su base: el monohidrógeno fosfato
(MHP). Ambos compuestos mantienen un equilibrio entre sí, pudiendo el DHP liberar
un protón y transformarse en MHP, (la reacción se desplaza hacia la derecha), y el
MHP puede unirse aun protón para originar una molécula de DHP, (la reacción se
desplaza hacia la izquierda) (Laura, 2022).
H2PO4- ? HPO4-2 + H+
Es decir, a pH fisiológico, las especies del fosfato con capacidad de tamponar
son H2PO4- y HPO4-2 ya que su valor de pK es de 6,8. Así pues, para el tampón
fosfato:pH = 6,8 + log HPO4-2 / H2PO4- A pH fisiológico de 7,4 la concentración de
HPO4-2 (un 80%) es 4 veces superior a la de H2PO4- (un 20%).
Así pues, el tampón fosfato es un sistema muy eficaz para amortiguar ácidos.
Procedimiento de preparación a nivel de laboratorio
El buffer fosfato, pH 7.2, se utiliza para la preparación de blancos de dilución
microbiológicos en un entorno de laboratorio.
El buffer fosfato, pH 7.2, se especifica para su uso en la dilución de agua,
productos lácteos y alimentos en métodos microbiológicos. En las pruebas de agua y
productos lácteos, se recomienda la adición de cloruro de magnesio (Sánchez , 2023).
EJEMPLO PRÁCTICO
Materiales
• Fosfato de potasio dihidrógeno 26.22 g
• Carbonato de sodio 7.78 g
• Cloruro de magnesio, 5 ml
La fórmula se puede ajustar y/o complementar según sea necesario para
cumplir con las especificaciones de rendimiento.
Procedimiento Solución madre
Disuelva 34 g del medio en un litro de agua purificada, mezcle bien, regule el
equipo Autoclave a 121°C durante 15 minutos, después almacene en refrigeración. El
pH final se toma después de que el buffer fosfato, pH 7.2, se ha esterilizado en
autoclave y enfriado a 25°C (temperatura ambiente).
Solución funcional con coluro de magnesio
Añada 1.25 mL de la solución madre y 5 mL de la solución de cloruro de
magnesio (81.1 g MgCl2 ⦁ 6H2O por litro de agua purificada) a agua purificada y
completar hasta un litro, seguidamente dispense en botellas o tubos para proporcionar
99 ± 2.0 mL, 9 ± 0.2 mL u otras cantidades apropiadas, regule el equipo autoclave a
121°C durante 15 minutos. El pH final se toma después de que el buffer fosfato, pH
7.2, se ha esterilizado en autoclave y enfriado a 25°C (temperatura ambiente).
3.6 Como preparar una disolución tampón de pH 10.00
Para preparar una solución se debe recordar que la constante pKa no esté más
allá de la unidad de pH que se quiere encontrar, en este caso un pH 10. Primero se
debe seleccionar el ácido con un pKa entre 9 y 11. El ácido seleccionado es el H2CO3
que posee una constante de acides de 10,25 pKa valor cercano al pH 10 que se desea
obtener (Diaz, 2023).
Ke= 4.3 x 10^ -7 pKa= 6.37
Ke= 5.6 x 10^ -11 pKa= 11.25
• Ácido: Ion Bicarbonato
• Base conjugada: Ion carbonato
Se procede a utilizar la ecuación de Henderson Hasselbach que nos dice que
el pH de la solución amortiguadora será el pKa del ácido más el logaritmo
de la división entre la concentración de la base conjugada y la concentración del
ácido.
(𝐴−)
𝑝𝐻 = 𝑝𝐾𝑎 + 𝑙𝑜𝑔
(𝐴𝐻)
Procedimiento de preparación a nivel de laboratorio
Preparar las soluciones tampón consta de varios pasos: calcular los
componentes (las concentraciones y las cantidades) conforme al uso necesario y el
volumen objetivo, pesar los componentes, disolver los componentes, ajustar el pH,
llenar hasta el volumen final y etiquetar.
EJEMPLO PRÁCTICO
Materiales:
• Agua destilada
• NH3
• 50 mg de NH4Cl
Procedimiento:
En un vaso de precipitado agregar 50 ml de agua destilada posteriormente en
cada micro pipeta medir 30 ml de amoniaco que lo añadiremos en el agua destilada
introduciendo en este un agitador magnético y luego se debe llevar a la plancha para
la disolución completa. Con el peachímetro limpio medir el pH. Luego pesar en la
balanza semi analítica 50 mg de cloruro de amonio en el vidrio reloj e ir agregando en
la disolución que se encuentra en agitación constante en la plancha con el peachímetro
fijo en su borde hasta llegar a pH 10 (Diaz, 2023).
4. CONCLUSIONES
• En base al trabajo de investigación se logró definir el procedimiento general de la
elaboración de soluciones tampón o amortiguadoras, además de dar a conocer las
sustancias más utilizadas en las preparaciones del mismo
• Para finalizar se dio a conocer mediante el trabajo de investigación a detalle los pasos
de elaboración de disoluciones tampón a distintos pH como de 4, 7 y 10, con cantidades
y concentraciones detalladas para poder ser utilizadas en un futuro en el laboratorio.
5. RECOMENDACIONES
• Las disoluciones de tampón se preparan disolviendo un ácido débil y una sal que
contenga a su base conjugada (por ejemplo, CH3COOH y CH3COONa) o bien
disolviendo una base débil y una sal del ácido conjugado (por ejemplo, NH3 y NH4Cl).
• Tener un ambiente con temperaturas constantes, cercanas a los 20° y 25°C, ayuda a
que el buffer se mantenga en sus concentraciones establecidas.
6. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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Guo, Y., Siretanu, I., Mugele, F., Mul, G., & Mei, B. (26 de Mayo de 2023). pH-Dependent
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Skoog, D., & West, D. . (2014). Fundamentos de Quimica Analitica. . Newark: Cengage Learning
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Valencia Carmona, O. D. (2020). Calculos quimicos: Problemario de quimica analitica. Wehawkean:
Independently Published.
